(1-3)-β-D葡聚糖联合降钙素原、CD4^(+)T淋巴细胞多指标在艾滋病患者马尔尼菲篮状菌感染早期诊断临床研究

目的探讨(1-3)-β-D葡聚糖联合降钙素原(procalcitonin,PCT)、CD4^(+)T淋巴细胞多指标在艾滋病患者马尔尼菲篮状菌感染早期诊断临床研究。方法回顾性选取我院2020年1月—2022年6月住院的120例艾滋病患者为研究对象。依据实验室结果,将其分为马尔尼菲篮状菌感染确诊组(血或组织液培育养出马尔尼菲篮状菌),简称A组(62例),及马尔尼菲篮状菌感染临床诊断组[根据临床症状、体征、血常规及(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞多指标诊断],简称B组(58例)。检测患者(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞的表达水平,采用受试者工作特征(receiver-operating characteristic,ROC)曲线下面积(area under the curve,AUC)评估上述指标联合检测对艾滋病患者感染马尔尼菲篮状菌的诊断效能。结果A组的(1-3)-β-D葡聚糖和PCT水平均高于B组,CD4^(+)T淋巴细胞个数低于B组(P<0.05);(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的AUC为0.933,(1-3)-β-D葡聚糖单独检测的AUC是0.812,PCT单独检测的AUC为0.883,CD4^(+)T淋巴细胞单独检测的AUC是0.810,(1-3)-β-D葡聚糖、PCT和CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的AUC皆优于三项单独检测,表明(1-3)-β-D葡聚糖、PCT和CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的诊断价值皆优于单一指标诊断,且联合检测的特异度、约登指数分别为92.43%和0.580,均高于三项单独检测。结论(1-3)-β-D葡聚糖联合PCT和CD4^(+)T淋巴细胞多指标对艾滋病马尔尼菲篮状菌感染具有非常高的临床诊断价值,能够帮助医生分析出高危风险患者,及时制定治疗方案,同时也承担预后效果的判断依据,对治疗艾滋病马尔尼菲篮状菌感染具有非常重要的研究价值。

表达β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶基因的转基因烟草及其抗真菌病的研究

利用烟草碱性β－１，３－葡聚糖酶及菜豆碱性几丁质酶基因构建了组成型表达的双价植物 表达载体ｐＢＬＧＣ，利用农杆菌介导法转化了烟草，并得到了转基因植株。对其进行分子生物 学分析的结果表明，部分转基因植株在所有检测中都显示较强的阳性反应，这说明外源基因 已整合到烟草基因组中并得到正确表达。活体接菌实验初步表明，转基因植株与对照相比，对 赤星病的侵染具有较强的抵抗能力。

啤酒酵母中β-(1-3)葡聚糖的提取及其性能分析

本文采用Ｓｅｖａｇｅ脱蛋白法、酸溶液浸提法、碱溶液浸提法对啤酒废酵母细胞壁中的β（１－３）葡聚糖作了提取试验，并对所获多糖进行生化特性分析。

核黄素和接种番茄黄化曲叶病毒对番茄几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性的影响

以番茄品种‘1479’为材料,研究喷施核黄素(riboflavin)和接种番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)对番茄叶片几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性的影响。结果表明:喷施处理后96 h内,2.0 mmol·L-1核黄素能显著提高番茄叶片的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性;接种TYLCV后,核黄素进一步诱导番茄叶片的酶活性显著升高,接种处理的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性均高于未接种处理。表明核黄素诱导病程相关蛋白酶活性增强与番茄对TYLCV的诱导抗性密切相关。

木霉菌平板抗菌、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性与病害防治效果

对60株分离自不同植物根际的木霉菌菌株(包括哈茨木霉菌,绿色木霉菌,康宁木霉菌和绿木霉菌)进行了平皿对峙试验、测定了几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性。所有菌株在这三个指标上均表现出明显的差异。选择38个抑菌能力、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性不同的菌株进行的盆载试验表明,所有菌株对棉花立枯病都有防治效果,但不同菌株的防治效果差异显著。相关性分析表明,木霉菌防治棉花立枯病的效果与平皿对峙抑制率,几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性间没有数量上的相关关系。

指天蕉β-1,3-葡聚糖酶基因全长cDNA的克隆及序列分析

【目的】克隆植物中主要的防卫基因β-1,3-葡聚糖酶基因,为该基因功能研究和有效利用提供理论依据。【方法】通过分析芭蕉科植物的β-1,3-葡聚糖酶基因,据其保守区域设计一对简并引物,通过RACE法从野生指天蕉中克隆得到一个β-1,3-葡聚糖酶基因的全长cDNA——glu。【结果】glu全长为1 114 bp,其推导的氨基酸序列与GenBank中其它来源的β-1,3-葡聚糖酶蛋白序列的相似性为54%—71%。其中,与芭蕉科植物Grand Nain的β-1,3-葡聚糖酶蛋白序列的相似性最高(71%)。【结论】在芭蕉类作物中克隆了一个新的β-1,3-葡聚糖酶基因,为进一步研究该基因的功能并应用于作物转基因抗病育种研究奠定了基础。

自溶超声波耦合法提取啤酒废酵母中β-1,3-D-葡聚糖

采用自溶-超声波耦合法提取啤酒废酵母中β-1,3-D-葡聚糖。首先以自溶率为考察指标,将单因素和正交实验相结合,结果显示,pH=5.0条件下,质量分数5%NaCl和体积分数1.5%乙酸乙酯混合添加可以最大限度地促进酵母细胞的自溶,从而促进酵母细胞质壁分离。进而,采用超声波法从自溶后收集的细胞壁沉淀中提取β-1,3-D-葡聚糖,以质量分数2%NaOH作超声溶剂,利用Box-Behnken设计考察了超声功率、超声时间和超声次数对葡聚糖提取率的影响,确定最佳提取条件为:超声功率550 W,超声时间33 min,超声次数2次,在该条件下葡聚糖提取率达到50.5%,与纯超声波提取葡聚糖法相比提取率提高了2倍。

烟草Ⅰ类几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶cDNA植物双价表达载体的构建及转化番茄的研究

将烟草中经修饰的Ⅰ类几了质酶和β－1，3-葡聚糖酶cDNA分别加上CaMV35S启动子和NOS终止子，依次插入到同一植物表达载体pBin19上，获得植物双价表达载体pCG－Ⅱ。然后载体pCG－Ⅱ以土壤农杆菌LBA4404介导转化番茄，再生植株的点杂交及PCR扩增证明两种cDNA已随T－DNA同时导入番茄植株中。

碱-酶法提取啤酒酵母粉中β-(1,3)-D-葡聚糖

以啤酒酵母粉为原料,综合考虑提取率、蛋白质含量和多糖含量3个指标,在单因素实验的基础上,采用正交实验,得出碱-酶法提取废啤酒酵母中β-(1,3)-D-葡聚糖的理想工艺条件:酵母粉经过水洗,脱色后,按照150mL∶10g的比例加入3%的NaOH溶液,在80℃水浴条件下水解2h,离心,洗涤,调整pH至8.5～9.0,再加入600U/g碱性蛋白酶(以干酵母粉计),在55℃下水解24h,离心,沉淀,干燥得到成品。β-(1,3)-D-葡聚糖的提取率为13.8%,产品多糖含量85.2%、蛋白质含量1.2%、水分9.2%,产品为乳白色粉状固体,色度为L值83.07、a值2.12、b值8.86。

青稞β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ基因启动子的克隆分析及表达载体的构建

根据本实验室克隆并公布的藏青稞β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ(BGH Ⅱ)基因序列,以藏青稞QB09基因组DNA为模板,构建DNA步移文库,并通过步移技术克隆出BGH Ⅱ起始密码子上游调控序列BGHP.鉴定和分析表明,BGHP具备大多数高等植物启动子的保守元件,预测它对BGHⅡ基因的表达具有一定的作用.为鉴定BGHⅡ基因的基本启动子元件,将基因5’侧翼序列做缺失片段分析,利用PCR方法从BGHP中得到3个不同大小两端带有HindⅢ、BamH Ⅰ酶切位点的片段BGHP1、BGHP2和BGHP3,定向插入载体pMGFP4(pBI221改建,报告基因为GFP)中,取代原有的CaMV35S启动子,构建了由驱动报告基因GFP的植物表达载体BGHPV1、BGHPV2和BGHPV3,用于大麦的遗传转化,为进一步研究其功能奠定了基础.

α-羰基烯酮环二硫代缩醛化学(Ⅵ)——β,β-1,3-亚丙二硫基-α,β-不饱和芳酮与烯丙基Grignard试剂加成物脱水反应的研究

提出了由β,β-1,3-亚丙二硫基-α,β-不饱和芳酮类化合物(1)与苄基氯化镁及烯丙基溴化镁加成所得的醇(2)在BF_3·Et_2O催化下脱水生成共轭烯烃(3)新的合成途径,合成了13种新化合物,结构经~1H N-MR、IR、UV及元素分析等确证.并对这一新合成途径的反应机制进行了讨论.

水稻中超氧诱导与稻瘟菌抗性及苯丙氨酸解氨酶、几丁酶、β-1,3-葡聚糖酶活性诱导的关系

19个水稻（OryzasativaL.）品种和8个稻瘟菌生理小种，或它们菌丝代谢产物（RBHM）组成的亲和与非亲和组合，及一些品种和稻瘟菌生理小种间交叉组合的实验结果表明.在非亲和组合中的水稻品种都有超氧（O2-）产率的诱导升高。毛地黄皂苷诱导O2-产率增高同时，也使稻苗对原亲和病原表现出抗性。二乙基二硫代氨基甲酸（DDTC）对超氧歧化酶（SOD）活性近乎完全抑制时，能使O2-产率猛增;N-乙烯马来酰亚胺（NEM）近乎完全清除O2-时，也可增加SOD活性。放线菌素D和环己亚胺处理后能抑制SOD活性，而使O2-产率明显增高。除了抗病时苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性诱导比感病时增长较强或较早外，无论用RBHM也好，毛地黄皂苷、DDTC、NEM也好，PAL活性都会增加。但它们都不能诱导几丁酶、β-1，3-葡聚糖酶活性升高。这样，PAL活性的诱导似乎并不是水稻对病原攻击一种特异的反应。几丁酶、β-1，3-葡聚糖酶活性诱导升高未必与O2-产率相关，而且诱导它们表达的信号传导与PAL也可能是不相同的。

茉莉酸甲酯对人参β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性的影响

为了明确β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶在茉莉酸甲酯(MeJA)诱导人参抗人参锈腐病过程中的作用,试验设4个处理:MeJA、Cylindrocarpon destructans、MeJA+Cylindrocarpon destructans和CK。MeJA浓度为200 mg/L。处理后3,6,9,12,15,20,25,30天测定酶活。结果表明,经MeJA处理后接种人参锈腐菌,人参根系β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶的活性均较对照增强。β-1,3-葡聚糖酶活性在第12天达到峰值,是对照的1.39倍;几丁质酶活性在第15天达到峰值,是对照的1.51倍。这表明β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶在MeJA诱导人参抗人参锈腐病的过程中起重要作用。

用酸碱法从面包酵母中提取β-(1-3-)-D葡聚糖

研究了用酸—碱法制备水不溶性葡聚糖的工艺。 0 .75mol/L的NaOH在1 0 0℃下作用 2h ,能有效地去除甘露聚糖 ,0 .5mol/L的酸使不溶性的葡聚糖的比粘度增加 ,除去糖元。分析表明 ,产品为β D 葡聚糖 ,其中β ( 1 3) D 葡聚糖约为 87%。

β-1,3-葡聚糖酶的研究和应用

β-1，3-葡聚精酶的生产菌种由冻土毛霉经紫外线诱变获得，据正交试验确定培养条件。经硫酸铵盐析和SephadexG-100柱层析，酶得到纯化，并对酶的性质进行了研究。酶对酵母自溶有明显促进作用，使自溶产物的游离氨基氮含量、还原糖含量、总蛋白质得率、干物质得率均得以提高。

毛竹β-1,3-葡聚糖酶基因的克隆及序列分析(英文)

β-1,3-葡聚糖酶是一种植物病程相关蛋白,在植物抵御病害中有重要作用。本研究以毛竹为实验材料,利用RACE技术,克隆毛竹β-1,3-葡聚糖酶基因的外显子序列,并在β-1,3-葡聚糖酶基因的编码区两端设计引物,以毛竹基因组DNA为模版扩增该基因的内含子序列。序列结果表明,该基因全长1693bp,包含两个外显子和一个内含子,命名为PheGLU(GenBank登录号GU238236)。该基因包含1个996bp的开放阅读框,编码332个氨基酸,相对分子质量为3.541×104Da,其等电点pI为6.389,是一个酸性蛋白且分泌到胞外;其中,该蛋白的二级结构中包含35.15%的α-螺旋,21.82%的β-转角,43.03%的延伸链和无规则卷曲等;三级结构同源建模预测显示,它与大麦β-1,3-葡聚糖酶(PDB number:1ghsA)具有80.4%的同源性;聚类分析显示,该基因序列与已报道的其它植物具有较的高氨基酸序列同源性。本研究为进一步鉴定毛竹β-1,3-葡聚糖酶基因的抗真菌病害能力奠定了基础。

墨兰炭疽菌侵染过程与几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶活性的变化

研究了墨兰炭疽菌的侵染过程以及墨兰叶片中几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性的变化。结果显示,炭疽菌接种12 h后开始产生侵染丝侵入墨兰叶片的气孔腔,60 h之前炭疽菌菌丝在叶肉细胞的胞间隙蔓延,从84 h开始,炭疽菌次生菌丝侵入叶肉细胞内,部分叶肉细胞解体。几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶活性在接种炭疽菌后缓慢上升,到84 h达到最大。表明炭疽菌侵入墨兰叶肉细胞的胞间隙和胞质中对几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性高峰的出现有重要影响。

药用真菌β-(1,3)-D-葡聚糖构效关系及检测方法研究进展

β-(1,3)-D-葡聚糖是许多活性真菌多糖的核心结构,由于具有免疫调节、抗肿瘤等多种生物活性,已成为研究热点。本文从β-(1,3)-D-葡聚糖的主链、支链分支度、支链基团、分子量及空间结构等方面介绍了结构与生物活性之间的关系,并对目前该类多糖的定性方法及鲎G因子、半乳糖神经酰胺ELISA等定量检测方法进行了综述。

产β-1,3-葡聚糖酶海洋细菌的筛选及其酶学性质研究

依据从海水中分离、筛选得到的-β1,3葡聚糖酶活较高的菌株SY-3之形态、生理及生化特性,初步鉴定为气单胞菌。该菌发酵产生的粗酶液经过硫酸铵沉淀、透析除盐后,对其酶学性质进行了初步研究。经测定,SY-3所产-β1,3葡聚糖酶的最适作用温度、pH分别为30℃、7.5。通过Lineweaver-Burk做图,得到其米氏常数(Km)为1.21 mg/ml。K+、Na+和Ca2+对酶促反应有促进作用,而Mg2+、Mn2+、Cu2+和Zn2+等有不同程度的抑制作用。

从酵母细胞壁提取β-1,3-D-葡聚糖的研究

分别采用酸法、碱法来提取酵母细胞壁中的β-1,3-D-葡聚糖。用紫外光谱法、纸层析法法和红外光谱法分析多糖成分。结果发现:经酸法(醋酸溶液浓度为0.5mol/L)提取的β-1,3-D-葡聚糖产品中除含有葡聚糖外,还含有一定量的甘露聚糖和蛋白质成分;而用碱法(氢氧化钠溶液浓度为1.0mol/L)提取时,产品为高纯度的β-1,3-D-葡聚糖。本文从其水解机理上探讨了产生上述两种不同结果的原因,指出碱法提取是从酵母中提取β-1,3-D-葡聚糖的高效方法。