逍遥散介导β-AR信号通路调控M2型巨噬细胞极化的研究

目的:研究逍遥散介导β-AR信号通路对于M2型巨噬细胞极化的调控。方法:在THP-1细胞培养模型上,观察NE对PMA、IL-4诱导的M2型巨噬细胞生成的影响,并观察逍遥散含药血清对该过程的影响,分别利用流式细胞技术、ELISA确定M2型巨噬细胞的生成,其中包括CD163、CD206、IL-12、IL-10的表达。结果:本研究发现NE处理后CD206、CD163、IL-10、cAMP表达均升高(P<0.05,P<0.01),而加入逍遥散含药血清后,CD163下降明显(P<0.05),CD206、IL-10、cAMP显著下降(P<0.01)。结论:NE能促进M2型巨噬细胞生成,而逍遥散能抑制NE处理后的M2细胞生成,逍遥散能通过抑制β-AR信号通路活化从而调控M2型巨噬细胞的生成。

纳米材料Ac-αCD包装的Rab5a siRNA对肺微血管内皮细胞β-AR的调控作用

目的研究纳米材料缩醛化环糊精(acetalatedα-cyclodextrin,Ac-αCD)包装的Rab5a siRNA对肺微血管内皮细胞(Pulmonary Microvascular Endothelial cells,PMECs)β肾上腺素受体(β-Adrenergic Receptor,β-AR)的调控作用。方法设计合成5′端标记FITC的Rab5a siRNA序列,并由Ac-αCD组装成Ac-αCD-Rab5a siRNA的纳米颗粒处理大鼠肺微血管内皮细胞24h,同时用常规细胞转染试剂进行Rab5a siRNA转染细胞24h,激光共聚焦显微镜下比较细胞对Rab5a siRNA的摄取情况;分别利用RT-PCR、Western blotting检测Ac-αCD-Rab5a siRNA处理细胞0h、24h、48h后Rab5a的mRNA和蛋白表达;利用放射性配体结合受体试验检测Ac-αCD-NC siRNA组和Ac-αCD-Rab5a siRNA处理细胞48h后细胞表面β-AR表达情况;转染GFP标记的β2-AR质粒至内皮细胞,激光共聚焦显微镜下观察纳米系统对β2-AR细胞内定位的作用。结果纳米颗粒Ac-αCD-Rab5a siRNA可被细胞有效摄取,细胞内可见大量呈颗粒状均匀分布的绿色荧光颗粒;Ac-αCD-Rab5a siRNA可显著下调目的基因mRNA和蛋白表达水平;Ac-αCD-Rab5a siRNA可增加细胞膜表面β-AR表达;Ac-αCD-Rab5a siRNA可使β2-AR在细胞内定位发生改变。结论纳米材料Ac-αCD包装的Rab5a siRNA能被PMECs有效摄取,从而调控β-AR在细胞膜表面的表达和细胞内的定位。

β-AR激活对脂多糖导致的肺微血管内皮屏障功能障碍的保护作用

目的研究β-AR在脂多糖导致的肺微血管内皮屏障功能障碍中的调控作用。方法LPS(10μg/ml)处理细胞2~8 h;分别激活β1-AR和β2-AR后再利用LPS处理6 h。采用Transwell小室法检测内皮屏障通透性,共聚焦显微镜观察细胞肌动蛋白(F-actin)的形态,蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞连接蛋白VE-cadherin和occludin的表达;质粒转染方法转染β2-AR-GFP,免疫荧光技术标记Rab5a,共聚焦显微镜观察Rab5a和β2-AR-GFP在细胞内的定位。结果LPS对肺微血管内皮屏障通透性的作用呈时间依赖性,随时间延长通透性增加,在6~8 h达到最高峰;LPS导致骨架蛋白F-actin形态学发生改变、应力纤维形成,下调VE-cadherin和occludin的蛋白表达水平;选择性激活β2-AR可部分逆转LPS对内皮屏障的损伤作用;Rab5a与β2-AR-GFP共定位于细胞膜,受体激活后主要共定位于细胞核周。结论β2-AR在肺微血管内皮细胞的激活可调控细胞骨架蛋白重构以及细胞间连接蛋白表达水平,对LPS导致的内皮屏障损伤有一定的保护作用。

当归芍药散加味方对老年鼠脑组织和淋巴细胞β-AR的影响

目的 :研究当归芍药散加味方 (DSS)对老年鼠脑组织和淋巴细胞β肾上腺受体 (β AR)含量的影响。方法 :选用中老年鼠 (18个月 ) ,分组灌服DSS水煎液。 3周后 ,用放射配基受体结合分析法测定大鼠大脑皮质、海马、小脑皮质、脾细胞和血液淋巴细胞 β AR密度。结果 :与老年对照组比较 ,DSS组小脑皮质、脾细胞和血液淋巴细胞 β AR密度明显增多 (P <0 0 1) ,大脑皮质、海马 β AR密度与老年对照组间差别不明显 (P >0 0 5 )。结论 :DSS可选择性提高老年鼠小脑皮质、淋巴细胞的 β AR密度。

分别阻断α和β-AR对豚鼠胰岛素低血糖休克的影响

在 30IU/kg的剂量下豚鼠的胰岛素低血糖休克率为 6 6 .6 7% ,出现休克的潜伏期为 (16 5 .1± 4 7.5 8)min。用心得安阻断 β-AR后其休克率增加到 95 .6 5 % (P <0 .0 0 5 ) ,潜伏期缩短到 (118.3± 33.7)min(P <0 .0 2 5 )。用酚妥拉明阻断α一AR后 ,其休克率 5 3.33%和潜伏期 (15 5 .5± 32 .88)min ,均无显著变化 (P >0 .0 5 )。结果说明阻断β-AR可显著加速豚鼠胰岛素低血糖休克的发生 。

β-AR基因多态性与脑梗死的相关性研究

目的探讨肾上腺素能受体(β-adrenergic receptor,β-AR)基因多态性与脑梗死病的相关性。方法采用病例-对照研究方法和PCR-RFLP方法,检测90例脑梗死及90名健康人对照的β-AR基因多态性,经χ2检验比较病例组和对照组基因型和等位基因频率的分布,并进行统计学分析。结果β1-AR Arg389Gly位点的基因型频率在脑梗塞组与正常对照组有显著差异,Gly 49Ser位点的基因型频率在脑梗死组与正常对照组有统计学意义;β2-AR Arg16Gly位点和β3-AR Trp64Arg位点的基因型频率在2组间没有显著差异。结论β1-AR基因可能是脑梗死病的1个易感基因;β2-AR Arg16Gly位点和β3-AR Trp64Arg位点与脑梗死无明显相关。

β-AR信号通路介导去甲肾上腺素提高HT-29细胞侵袭能力的研究

目的探讨去甲肾上腺素通过β-AR信号通路对结肠癌侵袭能力的影响及可能的作用机制。方法以人结肠癌细胞株HT-29为研究对象,采用Transwell观察去甲肾上腺素对HT-29细胞侵袭能力的影响,同时观察加入非选择性β-AR阻断剂普萘洛尔后,HT-29细胞侵袭能力的变化。实时荧光定量PCR和Western blot法检测去甲肾上腺素通过β-AR信号通路对HT-29细胞MMP-2、MMP-9和VEGF的表达及ERK1/2活性的影响。结果0.1、1、10μmol/L去甲肾上腺素组处理后,HT-29细胞的侵袭能力显著高于空白对照组,并且随着去甲肾上腺素浓度的提高,细胞的侵袭能力逐渐增强。而普萘洛尔可逆转去甲肾上腺素对HT-29细胞的促侵袭作用。与空白对照组比较,10μmol/L去甲肾上腺素可显著上调HT-29细胞MMP-2、MMP-9、VEGF mRNA和MMP-2、MMP-9、VEGF、pERK1/2蛋白表达水平。普萘洛尔可拮抗去甲肾上腺素的作用,下调MMP-9和VEGF表达,并减弱去甲肾上腺素对HT-29细胞ERK1/2活性的影响。结论去甲肾上腺素可通过β-AR信号通路提高HT-29细胞的体外侵袭能力。

三七总皂甙对烫伤应激大鼠心脏β-AR信号转导系统的调节作用

严重体表烫伤后心脏舒缩功能显著降低,是导致烧伤休克及病员死亡的重要原因,因而寻找有效防治心脏舒缩功能降低药物的研究对烧伤病人的救治具有重要意义。本室近年观察到烧伤后动物心肌β-AR密度下调,中药有效成份三七总皂甙(PNS)能明显改善烧伤动物的心脏舒缩功能,并同时升高心肌组织中cAMP含量。结合近来(1995)Kacimi R等关于β-AR信号转导系统(β-AR STS)对心脏舒缩功能调节起重要作用的报道,本文进一步探讨了PNS对烧伤大鼠心脏β-AR信号转导系统的影响,并对其机制进行了研究。

阻断β-AR加速鸡胰岛素低血糖休克的研究

在成年鸡上禁食４８小时后进行了阻断β－ＡＲ加速胰岛素低血糖休克的研究。试验鸡先注射心得安（１ｍｇ／ｋｇ）阻断β－ＡＲ，对照鸡先注射同剂量生理盐水。１５ｍｉｎ后均注射胰岛素（３０ＩＵ／ｋｇ，ｉｖ）。结果：对照鸡公、母各１只在５小时内出现休克；试验鸡５小时内全部出现休克，组间差异极显著（Ｐ＜０．００１）。出现休克的潜伏期对照鸡为１８３．５±１０９．６ｍｉｎ，试验鸡缩短到９０．９±３１．３ｍｉｎ（Ｐ＜０．０１）。证明阻断β－ＡＲ可显著加速鸡的胰岛素低血糖休克。

β-AR在调节心律失常-房颤中的鉴定与机理研究

观察β-肾上腺素能受体(β-AR)的完全缺失对诱发小鼠心房颤动的影响,探讨β-AR在心房颤动发作及维持中的作用。方法 选取20只小鼠随机分为β-AR组和对照组(Con组)。敲除β1/β2/β3肾上腺素能受体基因的10只小鼠为β-AR组,同种基因另外10只小鼠(β1+/+β2+/+β3+/+)为对照组(Con组)。对所有β-AR组小鼠和Con组野生型小鼠均采用S1S2递减刺激测量心房有效不应期,通过Burst刺激测量房颤诱发率和持续时间。刺激结束后取小鼠心房组织进行蛋白免疫印记法检测两组内缝隙连接蛋白Cx43总量的表达变化。结果:(1)与Con组小鼠相比,β-AR组小鼠的心房不应期(AERP)显著延长(p<0.01),平均心率显著降低(p<0.01);(2)通过电生理刺激,与Con组小鼠相比,β-AR组小鼠的心房颤动发生概率显著降低(p<0.01),心房颤动的发作维持时明显缩短(P <0.05)。3、与Con组小鼠相比,β-AR组小鼠Cx43蛋白水平明显下降(P<0.05)。结论:β-AR缺失可延长心房有效不应期,降低房颤易感性和维持时间, 同时可通过降低缝隙连接蛋白Cx43表达水平,改变离子通道特性抑制心房肌电重构,在降低房颤的发生和维持中起一定的作用。这表明β-AR在心房颤动的发生及维持中有重要作用,为房颤的药物治疗靶点提供科学依据。

PHD2/HIF-1α介导β-AR调控大鼠心梗后心力套竭

目的观察PHD2、HIF-1α在心肌梗死后心衰时表达量的变化,探讨β肾上腺受体(β-AR)调控PHD2/HIF-1α通路对心肌梗死后心衰发生影响。方法采用冠状动脉左前降支结扎法制备大鼠急性心梗模型,实验分为3组:假手术组、模型组、普蔡洛尔组。记录冠脉结扎前后心电图变化,12周后利用心脏超声检测心功能变化,PCR和Western Blot检测PHD2、HIF-1α的mRNA及蛋白表达的变化。结果结扎冠脉后心电图示ST段显著抬高。结扎12周后心脏射血分数(Ejection fraction,EF)从假手术组的(79.45±2.86)%下降到模型组的(61.10±2.78)%(P<0.05),普蔡洛尔组则高于模型组为(67.33±2.66)%(P<0.05)。PHD2的mRNA及蛋白表达在模型组显著下降(P<O.05),而普蔡洛尔组较模型组明显上升(P<O.05)。HIF-1α的mRNA及蛋白表达在模型组显著上升(P<0.05),而普蔡洛尔组较模型组明显下降(P<0.05)。结论PHD2/HIF-1α通路在大鼠心梗后心衰的发生过程中可能具有重要作用;而心肌梗死后B-肾上腺系统激活,可能通过对PHD2/HIF-1α通路的调节进而促进心衰的发生。

分别阻断β_1-和β_2-AR对小鼠胰岛素低血糖休克的影响

分别阻断小鼠 β1 和 β2 AR后进行了加速胰岛素低血糖休克的研究。结果表明 ,对照组的休克率为 4 7 3 % ,潜伏期为 (1 64 8± 3 1 9)min ;阻断 β1 AR组的休克率增加到 74 % (P <0 0 0 5 ) ,潜伏期减少到(1 4 3 8± 4 5 6)min (P <0 0 5 ) ;阻断 β2 AR组的休克率降低到 1 5 3 % (P <0 0 0 5 ) ,潜伏期为 (1 4 9 3±4 9 1 )min (P >0 2 )。证明阻断 β1 AR可加速小鼠的胰岛素低血糖休克 ,而阻断 β2

肾上腺素受体与阿尔兹海默症的关系研究进展

阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)是一种常发生于65岁以上人群的神经退行性疾病,严重影响患者生活质量。AD主要病理特征为脑部β淀粉样蛋白(βamloid protein,Aβ)沉积以及Tau蛋白的过度磷酸化。目前,临床治疗药物仅能缓解其临床症状,并不能有效延缓或逆转疾病的进程。因此,新型治疗靶点和药物亟待解决。研究显示,肾上腺素受体(Adrenergic receptor,AR)α2A-AR和β-AR参与Aβ沉积和Tau的磷酸化过程,可能是治疗AD的有效靶点之一。本文就AR在AD的发生、发展中发挥的作用进行了综述,为发现AD新型治疗靶点和药物提供帮助。

β_1-AR/CMC-UPLC/MS联用的分析方法筛选辛夷中的活性成分

目的建立高表达的β_1肾上腺素受体细胞膜色谱法(β_1-AR/CMC)与超高效液相-质谱(UPLC/MS)离线联用(β_1-AR/CMC-Offline-UPLC/MS)的分析方法,并从辛夷中筛选对β_1-AR具有抑制作用的活性成分。方法建立β_1-AR/CMC-Offline-UPLC/MS分析方法;采用阳性对照药物美托洛尔(Meto)和阴性对照药物地西泮(DZ)考察分析方法的可行性;用所建立的分析方法分离、筛选、鉴定辛夷提取物中的活性成分。结果建立并验证了β_1-AR/CMC-Offline-UPLC/MS分析方法,并以β_1-AR/CMC系统对辛夷95%乙醇提取物中的活性成分进行筛选,经UPLC/MS鉴定保留组分为辛夷脂素。结论本课题所建立的β_1-AR/CMC-Offline-UPLC/MS分析方法具有灵敏度高、特异性强、稳定性高、分析速度快的特点,能够用于从辛夷中筛选对β1-AR具有抑制作用的活性成分。

外周血Th9、Th22和Treg细胞及细胞因子在过敏性鼻炎中的研究

目的检测过敏性鼻炎(AR)患者外周血辅助T细胞9(Th9)、辅助T细胞22(Th22)、调节性T细胞(Treg)的比例及血清中白细胞介素-9(IL-9)、白细胞介素-22(IL-22)、转化生长因子β(TGF-β)和总IgE的表达水平,讨论其与过敏性鼻炎的关系以及临床意义。方法选择48例过敏性鼻炎患者为患者组,40例健康成人作为对照组,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中Th9、Th22和Treg细胞的比例;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中细胞因子IL-9、IL-22和TGF-β的含量;用速率散射比浊法检测血清中总IgE的水平。测得数据用SPSS 24.0统计软件进行分析,用Pearson相关分析进行相关性检验。结果同对照组相比,AR患者组Th9细胞的百分比显著升高(P<0.0001),Treg细胞的百分比显著降低(P<0.0001),Th22细胞的百分比与健康对照组相比无显著差异(P=0.63)。与对照组相比,AR患者组血清IL-9、IL-22和总IgE表达水平显著升高(P<0.0001),而TGF-β则呈现明显下降(P<0.0001)。AR患者血清IL-9与总IgE水平呈正相关(r=0.487,P<0.05),TGF-β与总IgE水平呈负相关(r=-0.679,P<0.05)。结论外周血Th9、Treg细胞及细胞因子的分泌异常、比例失调在过敏性鼻炎的发病过程中起着重要作用,可作为病情诊断的重要参考指标,也可为临床病因的分析研究提供理论依据,而Th22细胞目前不明确,可能没有参与AR的发病机制。

肝气郁结对结肠癌模型小鼠肝转移的影响

目的通过构建肝气郁结证模型,观察肝气郁结对结肠癌肝转移的影响并探讨β-AR信号通路在其中的作用机制。方法通过束缚制动法构建肝气郁结证模型,将BALB/C裸小鼠随机分为空白对照组、普萘洛尔对照组、ICI118,551对照组、空白肝郁组、普萘洛尔肝郁组、ICI118,551肝郁组,共六组,每组6只。ELISA法检测血清、脾种植瘤肾上腺素(epinephrine,E)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)含量;qRT-PCR和Western blot法检测脾脏种植瘤组织转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)表达情况;免疫组化法观察肝转移瘤组织VEGF和CD31蛋白表达情况。结果与空白对照组相比,空白肝郁组小鼠肝脏重量明显升高(P<0.01),并能升高小鼠血清NE、E水平及脾脏NE水平(P<0.01、P<0.05、P<0.05),差异具有统计学意义;与对照组相比,肝郁组小鼠脾脏肿瘤组织中TGF-β、IL-6、VEGF、MMP-9蛋白以及mRNA的表达显著升高(P<0.01),而给予普萘洛尔或ICI118,551后表达降低(P<0.01、P<0.05),差异具有统计学意义;肝郁组肝转移瘤VEGF、CD31表达明显高于对照组(P<0.01),给予普萘洛尔或ICI118,551后,则表达降低(P<0.01、P<0.05),差异有统计学意义。结论肝气郁结可通过介导β2-AR信号通路促进结肠癌肝转移。

加味六君子汤对哮喘大鼠肺组织β-肾上腺素能受体水平cAMP含量的影响

用放射配基结合分析和放射免疫分析，测定连续激发大鼠哮喘和加味六君子汤治疗后不同时间肺组织β-肾上腺素能受体（β－AR）结合位点和cAMP含量。激发哮喘第3天起，模型组肺内β－AR和cAMP均低于正常组，加味六君子汤和必可酮可上调哮喘大鼠肺内β－AR和cAMP，在第7天表现更明显。

急性肺损伤大鼠多核白细胞与肺组织β受体变化的相关性研究

目的：观察急性肺损伤（ＡＬＩ）大鼠循环血多核白细胞（ＰＭＮ）和肺组织β肾上腺素能受体（β－ＡＲ）的变化，并探讨二者β－ＡＲ变化的相关性。方法：静往内毒素复制大鼠ＡＬＩ模型，循环血ＰＭＮ及肺组织β－ＡＲ用放射性配基结合分析法测定。结果：静往内毒素后１、４、６ｈ，大鼠循环血ＰＭＮ及肺组织β－ＡＲ的最大结合容量（Ｂｍａｘ）均明显低于对照组（Ｐ＜０．０１）；静注内毒素后４ ｈ，６ ｈ较１ｈ及６ｈ较４ ｈ ＰＭＮ β－ＡＲ的Ｂｍａｘ均显著降低（Ｐ＜０．０５），肺组织β－ＡＲ Ｂｍａｘ各内毒素组间差异不明显（Ｐ＞０．０５）；循环血ＰＭＮ和肺组织β－ＡＲ变化在程度上无相关性（Ｐ＞０．０５）。结论：ＡＬＩ时循环血ＰＭＮ及肺组织β－ＡＲ数目均明显减少，其在ＡＬＩ发生发展中可能起一定的作用，但ＡＬＩ时外周血ＰＭＮβ－ＡＲ不能作为观察肺组织β－ＡＲ变化的相关指标。

丙卡特罗对儿童支气管哮喘肾上腺素β受体及环磷腺苷的影响

目的 :研究丙卡特罗对支气管哮喘病儿外周血淋巴细胞肾上腺素 β受体 ( β AR)及血浆环磷腺苷水平的影响及其临床疗效。方法 :采用放射配基受体结合分析方法和放射免疫方法对哮喘急性发作病儿 (n =30 )丙卡特罗治疗前后 β AR及环磷腺苷水平分别进行检测。结果 :哮喘急性发作病儿治疗后 β AR水平 [( 2 673±s34 4 )site/cell]较治疗前[( 3965± 32 6)site/cell]明显下降 ,差异有非常显著意义 (P <0 .0 1) ,而环磷腺苷水平治疗后 [( 19.6±1.5)nmol·L- 1]较治疗前 [( 18.9± 1.9)nmol·L- 1]则上升 ,差异无显著意义 (P >0 .0 5)。结论 :丙卡特罗在体内激活了 β AR ,因而对哮喘急性发作期治疗有效 ,且效果显著。

知母皂甙元对家兔氢化可的松模型血淋巴细胞β受体的作用

用放射性配基结合分析法和放射免疫分析法测定了家兔肌注氢化可的松(HC)前后血淋巴细胞β-肾上腺素受体(β-AR)和血浆皮质醇(Cor)的变化以及灌服知母皂甙元(SAR)后对它们的影响。结果表明:肌注HC 4d后,家兔血淋巴细胞β-AR的特异结合(SB)由0.65±0.03升至1.48±0.13fmol/10~6细胞(P<0.001);血浆Cor由128.0±20.6升至238.7±45.2nmol/l(P<0.001)。HC连用4d后加用SAR6d,血淋巴细胞β-AR的SB降至0.76±0.06fmol/10~6细胞,与用SAR前相比有显著性差异(P<0.001);血浆Cor为236.9±40.2nmol/L,与用SAR前相比无显著性差异(P>0.05)。本文结果提示:SAR可使家兔肾上腺皮质机能亢进模型(氢可模型)升高了的β-AR数目趋于正常;SAR的这种调整作用与体内Cor水平无关。