新型hGLP-1基因对β-TC-6胰岛瘤细胞凋亡的影响

目的探讨新型人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val2-hGLP-1)对四氧嘧啶(AXN)诱导凋亡的β-TC-6胰岛瘤细胞株的影响。方法脂质体介导重组质粒pIRES2-EGFP/2×Val2-hGLP-1转染β-TC-6胰岛瘤细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP),酶联免疫吸附法(ELISA)检测目的蛋白表达;以AXN诱导细胞凋亡后观察细胞形态,Hoechst染色及四甲基偶氮唑盐光吸收法(WST-1)检测目的基因表达对细胞凋亡的影响。结果荧光显微镜观察到GFP表达;ELISA显示重组质粒转染组细胞培养液吸光度值为(2.53±0.05),高于其他研究组(P<0.05);细胞形态观察及Hoechst染色显示,AXN可诱导β-TC-6细胞凋亡;WST-1显示转染重组质粒的细胞组存活率为66.23%,高于其他研究组(P<0.05);Hoechst染色显示,经重组质粒转染的细胞凋亡减少。结论 2×Val2-hGLP-1的表达对胰岛β细胞凋亡具有一定抑制作用,为糖尿病基因治疗提供了相关试验研究基础。

不同浓度石斛合剂含药血清对β-Tc-6细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨不同浓度石斛合剂Ⅰ方和Ⅱ方含药血清对小鼠胰岛素瘤细胞株β-Tc-6增殖及凋亡的影响。方法将长满80%培养瓶的β-Tc-6消化后,接种于96孔板,1×104个细胞/孔,采用MTT法测吸光值A490,连续10d,绘制生长曲线;分别用20%、10%和5%的石斛合剂Ⅰ方或Ⅱ方含药血清作用于对数生长期细胞,48h后采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果β-Tc-6在第5前缓慢增殖,到第6天进入对数生长期,第9天后进入平台期。与对照组相比,10%石斛合剂Ⅰ方组可显著促进细胞增殖(P<0.05);与对照组相比,三种不同浓度的石斛合剂Ⅰ方组及10%Ⅱ方组显著抑制细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),与10%Ⅰ方组相比,20%Ⅰ方组和5%Ⅰ方组抑制凋亡更为显著,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与对照组相比,20%Ⅱ方组显著促进细胞凋亡(P<0.05)。结论石斛合剂Ⅰ方具有促进增殖及抑制凋亡的作用,其最佳作用浓度为10%;石斛合剂Ⅱ方对细胞增殖无显著性促进作用,但对细胞凋亡则依据不同浓度有显著性促进或抑制作用。

碘过量对胰岛β细胞功能的影响及机制

目的探索碘过量暴露对小鼠胰岛素瘤细胞系β-TC-6胰岛素分泌功能影响及机制。方法β-TC-6细胞在对数生长期暴露于0、0.01、0.1、1、10和100 mmol/L碘24 h,采用四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率。细胞经0.01、1、和100 mmol/L碘干预24 h后,用5.6 mmol/L葡萄糖刺激细胞1 h,酶联免疫分析(ELISA)法检测上清胰岛素含量。蛋白印迹法(Western blot)检测GRP78、IRE1α、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,1~100 mmol/L碘处理组细胞存活率显著降低(P<0.05);1 mmol/L组细胞胰岛素分泌量显著增加(P<0.05),100 mmol/L组细胞胰岛素分泌量显著下降(P<0.05),1和10 mmol/L组GRP78、IRE1α和Bax蛋白表达量显著增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。5.6 mmol/L葡萄糖+0 mmol/L碘组、5.6 mmol/L葡萄糖+0.01 mmol/L碘组和5.6 mmol/L葡萄糖+1 mmol/L碘组分别与相应对照组比较,细胞胰岛素分泌量组间差异显著(P<0.05)。结论过量碘可降低β-TC-6细胞胰岛素分泌量,损害胰岛素分泌功能,其机制很可能与内质网应激和Bcl-2/Bax蛋白表达比例失衡密切相关。