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β-miR-33a特异调控HADHB基因3′UTR靶标位点验证
1
作者
崔志倩
芦春艳
+3 位作者
郭佳
赵尧璐
邢沈阳
赵志辉
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期282-286,共5页
为验证β-miR-33a与候选基因HADHB3′UTR是否存在特异性识别的靶标关系,本试验将β-miR-33amimics、β-miR-33ainhibitor及NC质粒分别转染至奶牛乳腺上皮细胞,通过Real-time(qPCR)验证β-miR-33a与HADHB基因mRNA水平表达量的关系。利用...
为验证β-miR-33a与候选基因HADHB3′UTR是否存在特异性识别的靶标关系,本试验将β-miR-33amimics、β-miR-33ainhibitor及NC质粒分别转染至奶牛乳腺上皮细胞,通过Real-time(qPCR)验证β-miR-33a与HADHB基因mRNA水平表达量的关系。利用PCR获得奶牛HADHB3′UTR 201bp DNA片段,将其克隆到pmiR-RB-REPORTTM双荧光素酶报告载体中,获得野生型载体,利用定点突变技术将HADHB3′UTR种子区-CAATGCA定点突变-CATGTAGC,获得突变型载体。将野生型载体和突变型载体分别与β-miR-33a-mimics组成双荧光素酶报告系统,转染至奶牛乳腺上皮细胞,48h后测定其荧光活性。结果显示,奶牛乳腺上皮细胞中转染的野生型与突变型载体的双荧光活性存在显著性差异(P<0.05),由此证明,在奶牛乳腺上皮细胞中β-miR-33a可以与HADHB3′UTR的靶位点-CAATGCA特异性结合。
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关键词
HADHB基因3’UTR
β-mir-33a
双荧光素酶报告基因
乳腺上皮细胞
原文传递
题名
β-miR-33a特异调控HADHB基因3′UTR靶标位点验证
1
作者
崔志倩
芦春艳
郭佳
赵尧璐
邢沈阳
赵志辉
机构
吉林大学动物科学学院
吉林大学农业实验基地
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期282-286,共5页
基金
吉林省省级产业创新专项资金资助项目(2016C032)
国家科技重大专项资助项目(2016ZX08009003-006-002)
+1 种基金
国家"863"计划资助项目(2013AA102505)
国家自然科学基金资助项目(31372278)
文摘
为验证β-miR-33a与候选基因HADHB3′UTR是否存在特异性识别的靶标关系,本试验将β-miR-33amimics、β-miR-33ainhibitor及NC质粒分别转染至奶牛乳腺上皮细胞,通过Real-time(qPCR)验证β-miR-33a与HADHB基因mRNA水平表达量的关系。利用PCR获得奶牛HADHB3′UTR 201bp DNA片段,将其克隆到pmiR-RB-REPORTTM双荧光素酶报告载体中,获得野生型载体,利用定点突变技术将HADHB3′UTR种子区-CAATGCA定点突变-CATGTAGC,获得突变型载体。将野生型载体和突变型载体分别与β-miR-33a-mimics组成双荧光素酶报告系统,转染至奶牛乳腺上皮细胞,48h后测定其荧光活性。结果显示,奶牛乳腺上皮细胞中转染的野生型与突变型载体的双荧光活性存在显著性差异(P<0.05),由此证明,在奶牛乳腺上皮细胞中β-miR-33a可以与HADHB3′UTR的靶位点-CAATGCA特异性结合。
关键词
HADHB基因3’UTR
β-mir-33a
双荧光素酶报告基因
乳腺上皮细胞
Keywords
3'UTR of HADHB gene
β-mir-33a
dual luciferase reporter gene
bovine mammary epithelial cells
分类号
S853.91 [农业科学—临床兽医学]
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
β-miR-33a特异调控HADHB基因3′UTR靶标位点验证
崔志倩
芦春艳
郭佳
赵尧璐
邢沈阳
赵志辉
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
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