哮喘患儿PBMC中β_2AR和IL-12基因mRNA表达及相互关系

目的探讨β2受体(β2AR)和IL-12基因mRNA表达与儿童哮喘的相关性,白三烯受体(CysLT1-Receptor)基因表达水平与IL-12、β2AR基因表达的关系,以及儿童哮喘发作程度与β2AR和IL-12基因表达的关系。方法提取哮喘儿童外周血白细胞,调取相关基因,对电泳结果通过电泳凝胶定位成像仪成像,应用1D-凝胶分析软件进行半定量分析。结果哮喘组患儿白细胞IL-12、β2AR表达明显低于正常组(P<0.01)。哮喘发作时IL-12基因表达与β2AR基因表达呈正相关(r=0.34,P=0.001),与CysLT1-Receptor基因表达呈负相关(r=-0.92,P=0.001);β2AR与CysLT1-Receptor呈负相关(r=-0.85,P=0.003)。IL-12基因表达与哮喘发作程度无关(P=0.16);β2AR基因的表达与哮喘发作程度呈负相关(P=0.003)。结论IL-12、β2AR和CysLT1-Receptor基因在哮喘儿童外周血单个核细胞(PBMC)中的表达存在相关性。IL-12基因表达与哮喘的发作程度无关,β2AR基因表达与哮喘的发作程度呈负相关。

β_2AR基因多态性与慢性阻塞性肺病易感性关系研究

目的研究β2肾上腺素受体(β2AR)基因多态性与我国汉族慢性阻塞性肺病(COPD)易感性之间关系。方法提取92例COPD患者及80例对照组基因组DNA,采用等位基因特异性多聚酶链反应法(Allele-spe-cific PCR)检测β2AR基因+46(A/G)位点和+79(C/G)位点多态性;统计分析各基因型和等位基因频率。结果β2AR基因+46(A/G)位点基因型和等位基因比较两组差异有显著性(P<0.05);+79(C/G)位点基因型及等位基因分布两组间无显著性差异(P>0.05)。结论β2AR基因+46位点(A/G)基因多态性可能与我国中部地区汉族COPD易感性有关。

β_2肾上腺素受体基因多态性与支气管哮喘的相关性研究

目的探讨β2肾上腺素受体(β2AR)基因多态性与支气管哮喘发病及其严重程度的相关性。方法采用扩增阻滞突变系统聚合酶链反应(ARMS-PCR)技术来检测β2AR基因16和27位点基因型在45例哮喘患者与他们的健康一级亲属(对照组)中的频率分布。结果(1)哮喘组16位点Gly/Gly基因型频率为31%,健康对照组中频率为11%,两者比较差异有显著性(P<0.01);而27位点两组各基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);(2)轻度哮喘患者16位点Gly/Gly基因型频率为9.5%,中重度哮喘患者频率为37.5%,两者比较差异有显著性(P<0.01),而27位点两组各基因型频率分布无显著性差异(P>0.05)。结论β2肾上腺素受体(β2AR)基因多态性与哮喘发病及其严重程度之间有一定的关系,可能是哮喘的易感基因之一。

猪β2肾上腺素能受体基因真核表达载体及突变体的构建及表达

试验旨在构建猪β_2肾上腺素能受体(β_2adrenergic receptor,β_2AR)基因及其突变体真核表达载体,并鉴定其在HEK293T细胞中的表达。通过猪基因组DNA克隆猪β_2AR基因,利用同源重组技术将其连接至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-β_2AR,加入c-myc标签后命名为myc-pcDNA3.1(+)-β_2AR。以真核表达载体为模板构建突变体myc-pcDNA3.1(+)-β_2AR-D130N、myc-pcDNA3.1(+)-β_2AR-C285S和mycpcDNA3.1(+)-β_2AR-D130N/C285S,并将构建的真核表达载体和突变体转染HEK293T细胞,利用Western blotting技术验证其表达。结果显示,猪β_2AR基因已正确重组入pcDNA3.1(+)载体中;经测序鉴定,猪β_2AR的第130位天冬氨酸成功突变为天冬酰胺,第285位半胱氨酸成功突变为丝氨酸。Western blotting检测结果证明所构建的表达载体均可在HEK293T细胞中表达。本研究成功构建了猪β_2AR野生型的真核表达载体及2个单点突变和1个双点突变的突变体,并验证其在HEK293T细胞中正常表达,为进一步研究猪β_2AR蛋白表达及其药理学活性奠定基础。