β4GalT1-CD200R1复合物在小胶质细胞炎性活化中的作用

目的:探讨β1,4-半乳糖基转移酶-1(β4GalT1)和CD200R1相互作用对小胶质细胞炎性活化的调节作用及其分子机制。方法:免疫共沉淀技术结合Western Blot法研究β4GalT1和CD200R1在体内外的相互作用;细胞免疫荧光技术观察两者定位。构建小胶质细胞-神经元共培养体系,阻断CD200-CD200R1结合,RT-PCR技术和ELISA试剂盒检测BV2细胞炎性因子i NOS、CD86、IL-1β、TNF-α的表达变化,LDH试剂盒检测神经元损伤情况。结果:β4GalT1和CD200R1有相互作用且存在共定位。CD200-CD200R1阻断剂增强LPS诱导的小胶质细胞炎性活化和神经元损伤,CD200R144号位突变体增强炎症因子释放和神经元损伤。CD200R144号位调节CD200-CD200R1结合,该突变体影响CD200-CD200R1的正常结合。结论:β4GalT1通过调节CD200R1第44号位的N-糖基化修饰,进而调节小胶质细胞的炎性活化及其介导的神经元损伤。

β4GalT1对胶质瘤鼠肿瘤标志物及生存率的影响

目的分析β4GalT1对胶质瘤鼠肿瘤标志物及生存率的影响。方法分别建立小鼠胶质瘤模型(Con)与β4GalT1慢病毒载体干扰的小鼠胶质瘤模型(LEN),分析2组模型鼠IDH1、MGMT、ki-67表达量与生存率。结果LEN组胶质瘤鼠IDH1、MGMT与ki-67表达量均低于Con组,差异有统计学意义(P<0.05);LEN组胶质瘤鼠生存率高于Con组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论β4GalT1敲低后可明显减少小鼠胶质瘤恶性程度,并能提升小鼠的生存率,具有借鉴意义。

β4GalT1基因点突变为GalNAcT对小鼠生理功能的影响

[目的]本文旨在研究β-1,4-半乳糖基转移酶1基因(β4GalT1)突变为N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因(GalNAcT)对小鼠生理功能的影响。[方法]以β4GalT1基因点突变的纯合子、杂合子和野生型小鼠为研究对象,观察、测定和记录小鼠的日常状态与繁殖情况,并采用单因素方差分析和多重比较对数据进行差异显著性分析,研究β4GalT1基因点突变为GalNAcT基因对小鼠生长发育、神经系统发育和雌小鼠繁殖能力的影响。以纯合子和野生型小鼠为研究对象,探讨β4GalT1基因点突变对小鼠肝脏中蛋白质糖基化的影响。[结果]通过对比不同周龄的纯合子和野生型小鼠的体质量和成年小鼠的主要器官质量,发现β4GalT1基因点突变对小鼠体质量和主要器官质量均无显著影响。通过对纯合子和野生型小鼠肝脏中N-链寡糖的比较可知,β4GalT1基因点突变改变了小鼠肝脏中N-链寡糖的结构。观察纯合子和野生型小鼠日常状态发现,纯合子小鼠比野生型小鼠反应迟滞,对外界刺激反应不敏感。通过悬尾试验,发现纯合子小鼠的静止时间极显著长于野生型小鼠(P<0.01)。对3种基因型小鼠进行亲本自交,发现纯合子雌小鼠受孕困难,或者受孕以后不能正常分娩,雌小鼠和子代小鼠均死亡。对比杂合子和野生型小鼠自交后代,纯合子小鼠平均每胎子代小鼠的数量极显著少于杂合子和野生型小鼠(P<0.01)。[结论]β4GalT1基因点突变改变了小鼠体内蛋白质糖基化修饰,且纯合子小鼠体内蛋白质N-糖基化的改变必将改变小鼠的生理机能。说明β4GalT1对小鼠生长发育、神经系统发育和雌小鼠繁殖能力等有重要的、不可替代的作用。

半乳糖基转移酶β4GalT1对膀胱上皮细胞迁移行为的影响

在肿瘤发生发展过程中常伴随着糖基化的异常,而糖类结构是糖基转移酶的催化所形成,所以以膀胱癌细胞株为模型研究β1,4-半乳糖基转移酶1(β1,4-galactosyltransferase 1,β4Gal T1)对细胞行为的影响。以人源正常膀胱上皮细胞HCV29和人源浸润性膀胱癌细胞YTS1为研究对象,通过凝集素荧光染色技术检测发现YTS1中末端乳糖胺结构含量升高,蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR技术检测发现YTS1中β4GalT1的表达显著高于HCV29。利用转化生长因子(transforming growth factor beta,TGF-β)诱导HCV29发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程,经检测发现,末端乳糖胺结构与β4GalT1的表达显著升高。HCV29过表达β4GalT1后,细胞迁移速度明显变快,而干扰YTS1细胞中的β4Gal T1后,细胞迁移速度明显变慢。由此表明,β4GalT1能促进膀胱细胞的迁移能力,但其对膀胱癌发生发展的影响有待深入研究。

昆虫细胞中共表达人糖基转移酶对重组蛋白SEAP表达的影响

杆状病毒-昆虫细胞表达系统有表达量高及蛋白翻译后修饰较完善等特点,但与哺乳动物相比其缺乏几种关键的糖基转移酶.许多研究表明将哺乳动物的糖基转移酶基因转入昆虫细胞中,能使得昆虫细胞表达蛋白的修饰得到有效改善.本研究通过RT-PCR克隆了人Ⅱ型N-乙酰葡萄糖胺转移酶(β-1,2-N-acetylglucosaminyltransferaseⅡ)和Ⅰ型β-1,4-半乳糖基转移酶(β-1,4-galactosyltransferase)基因,并将它们分别插入重组杆状病毒上,获得了表达GnT2和β4GalT1的重组杆状病毒.以具有糖基化修饰位点的人分泌型碱性磷酸酶(Secreted Alkaline Phosphatase,SEAP)为对象,将表达糖基转移酶的重组杆状病毒和表达SEAP的重组杆状病毒共感染细胞,Western blot分析结果表明共感染时所表达的SEAP蛋白条带分子量明显大于其单独表达时的分子量.结果表明重组病毒共感染对杆状病毒-昆虫细胞表达的SEAP有修饰作用.