JNK信号通路对胰岛βTc3细胞脂性凋亡的影响及吡格列酮的干预作用

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路对胰岛βTc3细胞脂性凋亡的影响及吡格列酮(PGZ)的干预作用.方法:采用游离脂肪酸(FFA)诱导小鼠βTc3细胞凋亡;以MTT法观察FFA对细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞化学和Western Blot法检测在FFA、特异性JNK抑制剂SP600125及PGZ作用下磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化c-jun(p-c-jun)的表达.结果:FFA对体外生长的βTc3细胞具有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,JNK阻断剂及PGZ可显著减少这一过程引起的凋亡;且FFA诱导βTc3细胞凋亡伴随着JNK信号通路中p-JNK和p-c-jun的升高;用SP600125预处理细胞后,可明显减少p-JNK和p-c-jun的活化;而PGZ未能抑制FFA引起的JNK活化.结论:JNK信号通路参与了FFA诱导的小鼠βTc3细胞凋亡;PGZ可明显抑制胰岛βTc3细胞凋亡,但这一过程可能没有通过JNK信号通路.

小檗碱的体外降糖作用

目的研究小檗碱能否通过刺激胰岛素分泌或直接作用于肝细胞而产生降糖作用。 方法检测HepG2细胞 2 4h培养液中葡萄糖的消耗量。另外检测 βTC3细胞胰岛素的释放量。 结果小檗碱 5～ 10 0 μmol/L可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加 32 %～ 6 0 % (P <0 .0 0 1) ,与 1mmol/L二甲双胍相比无显著差异 ;小檗碱的降糖效能随着培养液中葡萄糖浓度的升高而降低 ;胰岛素对小檗碱的降糖作用没有明显的影响。小檗碱没有刺激βTC3细胞胰岛素分泌的作用。 结论小檗碱能通过肝细胞发挥非胰岛素依赖的降糖作用 。

蜕皮甾酮对HepG2细胞葡萄糖消耗的影响

目的 探讨蜕皮甾酮体外降糖的作用特点或机制,即能否通过刺激胰岛素分泌而产生降糖作用。方法 检测HepG2细胞24 h培养液中葡萄糖的消耗量;另外测定βTC3细胞胰岛素的释放量。结果 蜕皮甾酮在1×10^-6～10^-4 mol·L^-1浓度范围内可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加（44%～77%）；蜕皮甾酮的降糖效能随着培养液中葡萄糖浓度的升高而降低；胰岛素对蜕皮甾酮的降糖作用没有明显的影响。蜕皮甾酮没有刺激βTC3细胞胰岛素分泌的作用。结论 蜕皮甾酮可通过肝细胞发挥非胰岛素依赖的降糖作用，但不能刺激胰岛素的分泌。

小檗碱对游离脂肪酸损伤的胰岛βTC3细胞的保护作用

目的:观察小檗碱对棕榈酸损伤的胰岛βTC3细胞是否具有保护作用,并筛查出小檗碱起保护作用的有效浓度及合适的作用时间。方法:以胰岛βTC3细胞为研究对象,用棕榈酸构建脂毒性模型,MTT法筛选小檗碱起保护作用的有效浓度及时间;流式细胞技术检测胰岛βTC3细胞凋亡情况。结果:10.001-1μmol/L小檗碱作用βTC3细胞24、48、72 h,对细胞增殖有不同程度促进作用(与对照组比较P<0.05);随着作用时间的延长,低浓度小檗碱对βTC3细胞的保护作用增加,而1μmol/L浓度保护作用下降,10μmol/L及以上浓度出现细胞毒性作用(与对照组相比P<0.01),并呈浓度依赖性。2棕榈酸(0.2-1.0 mmol/L)对βTC3细胞的损伤作用具有浓度及时间依赖性(与对照组比较P<0.05)。3棕榈酸处理βTC3细胞不同时间后,小檗碱治疗组较模型组的细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。结论:小檗碱对脂毒性损伤的胰岛βTC3细胞具有保护作用,且脂毒性作用时间越短,小檗碱的保护作用越好,随着脂毒性作用时间的延长,小檗碱的保护作用明显减弱。因此,建议临床上在脂代谢紊乱早期给予小檗碱干预以减轻甚至逆转游离脂肪酸导致的胰岛β细胞凋亡。

油酸对βTC3细胞PTEN mRNA表达的影响

研究油酸慢性作用对βTC3细胞PTEN（phosphotase and tensin homology deleted on chromosme ten）mRNA表达的影响，结果显示油酸增加PTEN的表达，使ATP敏感性K^＋通道开放，这可能是高脂损害胰岛功能的机制之一。

PTEN参与小檗碱保护脂毒性损伤的胰岛βTC3细胞

目的:探讨小檗碱保护棕榈酸诱导的胰岛βTC3细胞的可能机制,观察PTEN是否参与该过程,以及小檗碱对胰岛素分泌的影响。方法:用1.0 mmol/L棕榈酸制作胰岛βTC3细胞脂毒性损伤模型,给予小檗碱干预;放射免疫法检测胰岛素分泌,West-ern blot法进行PTEN、p-AKT、AKT、Bcl-2、Bax、活性Caspase3蛋白的检测。实验分3大组(对照组、棕榈酸组、棕榈酸+小檗碱治疗组),棕榈酸分别作用3个时间段(24、48、72 h)。结果:(1)放射免疫法胰岛素分泌测定结果显示:β细胞暴露于棕榈酸24 h后,5.6、16.7 mmol/L葡萄糖刺激的胰岛素分泌均较正常对照组显著减少(P<0.01);添加小檗碱干预后胰岛素分泌较棕榈酸组回升,但较对照组减少(P均<0.01)。(2)在棕榈酸处理的3个时间段内,与对照组相比,棕榈酸组的PTEN、Bax、Active-Caspase3蛋白表达水平显著升高,p-AKT、Bcl-2蛋白水平下降;小檗碱干预后PTEN、Bax蛋白表达水平下降,p-AKT、Bcl-2蛋白水平提高(P均<0.01)。结论:小檗碱可改善棕榈酸引起的胰岛素分泌减少,抑制脂毒性诱导的PTEN表达增加,减少促凋亡基因Bax、Active-Caspase3表达,并增加抑凋亡基因Bcl-2基因表达及AKT的活化,从而拮抗棕榈酸诱导的β细胞凋亡,保护β细胞功能。

山楂叶总黄酮对游离脂肪酸损伤的胰岛βTC3细胞的保护作用

目的:观察山楂叶总黄酮对棕榈酸损伤的胰岛βTC3细胞是否具有保护作用,并筛查出山楂叶总黄酮所起作用的有效浓度。方法:以胰岛βTC3细胞为研究对象,使用棕榈酸制作脂毒性模型,采用MTT法观察山楂叶总黄酮是否具有保护作用,并进一步筛查出有效浓度及时间;同时采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记(TUNEL)技术检测胰岛βTC3细胞的凋亡情况。结果:MTT结果显示10-100μg/ml的山楂叶总黄酮对棕榈酸损伤的胰岛βTC3细胞均有保护作用,其吸光度值明显比棕榈酸组高(P<0.05),并且50μg/ml的山楂叶总黄酮与棕榈酸共同处理胰岛βTC3细胞24小时具有最好的保护作用;TUNEL检测结果显示山楂叶总黄酮+棕榈酸组胰岛βTC3细胞的凋亡率比棕榈酸组低(P<0.01)。结论:山楂叶总黄酮对脂毒性损伤的胰岛βTC3细胞具有保护作用,并在10-100μg/ml浓度范围内成一定的剂量依赖效应。

羊栖菜联合姬松茸多糖对胰岛β细胞保护作用

探讨羊栖菜多糖、姬松茸多糖对高糖培养的胰岛β细胞的保护作用及其机制。将胰岛β细胞随机分为5组:正常对照组、模型组、SFPS组、ABP组、两药联合组。应用MTT法检测对胰岛β细胞增殖能力的影响,应用荧光显微镜检测胰岛β细胞凋亡情况,并用RT-PCR法检测bax、caspase-3基因表达量的变化。结果表明,SFPS、ABP能明显减轻高糖对胰岛βTc3细胞的生长抑制,抑制高糖诱导的胰岛β细胞凋亡,并明显降低bax、caspase-3基因表达(p<0.01),两药联合作用更明显,其作用机制可能与调控bax、caspase-3基因表达有关。

羊栖菜多糖对高脂培养的胰岛β细胞凋亡的影响

目的研究羊栖菜多糖(Sargassum fusiforme polysaccharide,SFPS)对在高脂培养的胰岛β细胞凋亡的影响及其分子机制。方法采用MTT法检测SFPS对胰岛β细胞增殖的影响,Hoechst 33258检测胰岛β细胞凋亡情况,反转录RCR法检测bax、caspase-3基因表达量的变化。结果与模型组比较,5%SFPS组和10%SFPS组胰岛βTc3细胞的生长抑制明显减轻(P<0.01),胰岛βTc3细胞的凋亡率明显降低(P<0.01),bax和caspase-3基因表达亦降低(P<0.01)。结论 SFPS能抑制高脂诱导的胰岛β细胞凋亡,其机制可能与调控bax和caspase-3基因表达有关。

二甲双胍对胰岛细胞脂毒性的保护作用

目的探讨二甲双胍(MF)在游离脂肪酸(FFA)诱导的胰岛细胞凋亡中的作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察FFA对小鼠βTc3细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞的凋亡率;免疫细胞化学和Western blot法检测p-JNK、p-c-jun在FFA、特异性JNK抑制剂(SP600125)阻断JNK信号转导通路情况下及MF作用下的表达。结果FFA对体外生长的βTc3细胞具有明显的抑制作用,并可诱导细胞凋亡;MF可显著减少这一过程中的细胞凋亡。细胞免疫化学及Western blot结果显示,FFA诱导βTc3细胞凋亡伴随着p-JNK和p-c-jun的升高而增加;用SP600125预处理βTc3细胞后,可以明显减少p-JNK和p-c-jun的活化,而MF没有能够抑制FFA引起的p-JNK活化。结论MF可以抑制FFA介导的小鼠βTc3细胞凋亡,但不是通过JNK信号转导通路发挥作用的。

胰岛素对βTC-3细胞胰岛素受体表达的作用

目的:观察外源性胰岛素对小鼠胰岛β细胞瘤细胞株βTC-3细胞胰岛素受体表达的影响。方法:采用免疫荧光细胞化学技术结合激光扫描共聚焦显微镜观察高浓度胰岛素(100 IU/ml)刺激不同时间(0 min、30 min、60 min、120 min、240 min),培养的βTC-3细胞胰岛素受体的表达,用Image pro plus软件对胰岛素受体的荧光强度进行了半定量分析。结果:与0 min比较,胰岛素孵育30 min、60 min、120 min、240 min时胰岛素受体荧光强度均明显下降(P<0.05)。结论:高浓度胰岛素孵育βTC3细胞后,可明显下调胰岛素受体的表达,这可能是高胰岛素血症导致胰岛素抵抗产生的机制之一。

决明子醇提物对胰岛β细胞凋亡的影响及其机制

目的研究决明子醇提物(Ethanol extraction from Semen Cassiae,ESC)对高脂培养的胰岛β细胞的保护作用,并探讨其作用机制。方法将胰岛β细胞随机分为4组:对照组(RPMI-1640完全培养基)、模型组(0.75 mmol/L棕榈酸)、低剂量ESC组(15 mg/L ESC+0.75 mmol/L棕榈酸)、高剂量ESC组(30 mg/L ESC+0.75 mmol/L棕榈酸),用相应培养基培养24 h。采用MTT法检测各组胰岛β细胞生长抑制率,应用荧光显微镜检测细胞凋亡率。采用RT-PCR检测bcl-2、caspase-3 mRNA的相对表达量。结果与模型组比较,低剂量ESC组和高剂量ESC组胰岛βTc3细胞抑制率和凋亡率明显降低(P<0.01)。与模型组比较,低剂量ESC组和高剂量ESC组胰岛βTc3细胞的bcl-2基因表达显著增加,caspase-3基因表达显著降低(P<0.01)。结论ESC可通过调控bcl-2和caspase-3基因表达,从而抑制高脂诱导的βTc3细胞凋亡。

小檗碱、齐墩果酸和大蒜新素对糖代谢作用的体外研究

目的 研究小檗碱、齐墩果酸和大蒜新素能否通过直接作用于肝细胞或刺激胰岛素分泌而产生降糖作用。方法 采用与人肝细胞表型相似的HepG2细胞 ,检测 2 4h培养液中葡萄糖的消耗量。采用能稳定分泌胰岛素的 βTC3细胞检测胰岛素的释放量。用MTT法监测细胞增殖的情况。结果 小檗碱可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加 6 9.1% (P <0 0 0 0 1) ,齐墩果酸和大蒜新素可使糖耗量轻度增高。齐墩果酸还使 βTC3细胞的胰岛素分泌量减少 2 5 %～ 2 9% (P <0 .0 1) ,小檗碱和大蒜新素对胰岛素分泌没有明显的影响。

羊栖菜多糖对高糖培养的胰岛β细胞保护作用的实验研究

探讨羊栖菜多糖(Sargassum fusiforme polysaccharide,SFPS)对高糖培养的胰岛β细胞保护作用及其机制。将胰岛β细胞随机分为5组:正常对照组、模型组、低剂量SFPS组、高剂量SFPS组、罗格列酮组。应用MTT法检测SFPS对胰岛β细胞增殖能力的影响,应用荧光显微镜检测胰岛β细胞凋亡情况,并用RT-PCR和Western blot检测Bax,Caspase-3基因表达量的变化。结果表明:SFPS能明显减轻高糖对胰岛βTc3细胞的生长抑制,抑制高糖诱导的胰岛β细胞凋亡,并明显降低Bax和Caspase-3基因表达(P<0.01)。其作用机制可能与调控Bax和Caspase-3基因表达有关。

JNK抑制剂SP600125对游离脂肪酸诱导β细胞凋亡的影响

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125在游离脂肪酸(FFA)诱导的胰岛β细胞凋亡中的作用。方法采用MTT法观察FFA对小鼠βTc3细胞生长的抑制作用,流式细胞术观察细胞凋亡率,免疫细胞化学和Western blot法检测p-JNK、p-c-Jun在FFA作用下及SP600125阻断JNK信号通路情况下的表达。结果 FFA可诱导体外生长的βTc3细胞凋亡,与对照组比较明显增加(P<0.05)。FFA诱导βTc3细胞凋亡过程中,p JNK和p c Jun蛋白显著增加(P<0.05);用SP600125预处理βTc3细胞后,p JNK和p-c-Jun蛋白含量较未处理组明显减少(P<0.05)。结论 FFA可诱导小鼠βTc3细胞凋亡,凋亡过程通过JNK途径实现。

肾素-血管紧张素系统对胰岛β细胞功能的影响及AT1R在其中的作用机制

目的研究血管紧张素Ⅱ对胰岛β细胞的分泌、增殖、凋亡、氧化应激和纤维化的作用。方法应用βTC3细胞株、Western印迹检测、实时定量PCR检测、共聚焦显微镜监测Furo3标记的细胞内游离钙离子荧光强度的变化和流式细胞仪检测细胞凋亡及活性氧簇（ROS）产生等方法，研究血管紧张素Ⅱ对β细胞功能的影响，并进一步通过RNA干扰技术减少β细胞中AT1R的表达，研究AT1R在其中的作用机制。结果βTC3细胞在高浓度葡萄糖刺激下胰岛素分泌增加4倍。高糖作用可引起细胞内Ca^2＋荧光强度急剧增加。血管紧张素Ⅱ急性刺激并不直接引起胰岛素分泌的改变，其对β细胞促分泌作用可能与其促增殖功能相关。血管紧张素Ⅱ部分是通过AT1R和蛋白激酶C介导的NAD（P）H途径在β细胞中引起氧化应激。RNAi减少AT1R的表达可以改善血管紧张素Ⅱ引起的细胞凋亡和纤维化。结论血管紧张素Ⅱ通过其1型受体在β细胞的激素分泌、增殖、氧化应激、凋亡和纤维化等过程中发挥着重要作用。