卡介苗与ESAT-6激活的γδT细胞表达抗原提呈细胞表型和功能的研究

目的:探讨卡介苗(BCG)与ESAT-6激活的人外周血γδT细胞是否具有抗原提呈细胞的表型和功能。方法:用Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC)后,经尼龙毛柱法分离获得T细胞。将T细胞分别用卡介苗与ESAT-6刺激扩增γδT细胞后用流式细胞仪分选纯化γδT细胞,并检测其抗原提呈细胞表型。PBMC用贴壁法制备单核细胞后,诱导培养分化为成熟DC细胞,用流式细胞仪检测其成熟程度。T细胞用CFSE标记后分别按四种方法培养:①与结核分枝杆菌分泌性抗原(Mtb-Sag)共同培养;②与Mtb-Sag孵育2小时后的卡介苗激活的γδT细胞共同培养;③与Mtb-Sag孵育2小时后的ESAT-6激活的γδT细胞共同培养;④与Mtb-Sag孵育2小时后的成熟DC细胞共同培养;培养后检测T细胞及CD4+T细胞的增殖情况。结果:卡介苗与ESAT-6激活的γδT细胞CD80、CD86、HLA-DR的表达水平都增加,且后者显著高于前者。卡介苗与ESAT-6激活的γδT细胞培养组的T细胞增殖总数及CD4+T细胞的增殖有所增加;而后者显著高于前者,与成熟DC细胞培养组的增殖情况相似。结论:用卡介苗与ESAT-6激活的人外周血γδT细胞都具有抗原提呈细胞的表型和抗原提呈作用;但后者显著高于前者。

人γδT细胞、CD3AK细胞和NK细胞对裸鼠移植人结肠癌的抑制作用及对肿瘤细胞凋亡的影响

目的 探讨人γδT细胞、CD3AK细胞和NK细胞对裸鼠移植人结肠癌的抑制作用及对肿瘤细胞凋亡的影响.方法 将人结肠癌细胞株（SW-116）接种于BALC /c裸鼠皮下,建立结肠癌裸鼠模型,随机分为4组,每组6只.设定建立模型为第1天,分别于第1天、第4天、第7天每组给予相应的治疗.A组：尾静脉注射RPMI 1640培养液;B组：注射NK细胞＋γδT细胞;C组：注射NK细胞＋CD3AK细胞;D组：注射NK细胞＋CD3AK细胞＋γδT细胞.并于第10天处死裸鼠,测量肿瘤体积,用Tunel法检测肿瘤细胞凋亡率.结果 24只裸鼠接种5×106结肠癌细胞后第4天,在接种部位均有肿瘤形成,皮下结节最大径为2～3 mm,成瘤率为100%.治疗组肿瘤体积增加小于对照组,第1次治疗后10天时测A、B、C、D组平均肿瘤体积分别为（86.78±7.19）、（52.80±5.59）、（54.05±6.53）、（43.16±7.40）mm3,各治疗组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,B、C组组间无显著差异（P〉0.05）,D组与B、C组相比有显著差异（P〈0.05）.Tunel检测结果显示,与对照组相比,治疗组肿瘤细胞的凋亡率升高（P〈0.05）,以D组为甚.结论 人的γδT细胞、CD3AK细胞和NK细胞能不同程度延缓裸鼠移植的人结肠癌瘤体生长,免疫治疗能提高肿瘤细胞的凋亡率.