咖啡因抑制辐照区和旁区细胞的γ-H2AX foci的形成

辐射诱导的旁效应不仅在体外实验存在,也在动物体内存在,这对辐射剂量的计算和辐射风险的评估有重要影响。咖啡因是一个模式辐射敏感剂,显著增强辐射的细胞毒性。咖啡因也显著增强辐射诱导的旁效应,咖啡因处理使未受辐照的旁细胞对损伤信号更加敏感,但其机理并不清楚。在正常人原代细胞AG1522中,分析了咖啡因处理对组蛋白H2AX磷酸化的影响,咖啡因显著减少α粒子辐射区和旁区γ-H2AX foci阳性细胞的比率和每个细胞γ-H2AX foci点数,表明咖啡因处理抑制了H2AX磷酸化,后者启动细胞对DNA双链断裂的修复,从而提示咖啡因增强辐射旁效应可能的机理,对辐射治疗具有重要意义。

RUVBL2基因knock-down对Rad51和γ-H2AX foci的影响

用脂质体转染的方法将特定的RUVBL2 si RNA序列转染到真核细胞,并鉴定其在人肺纤维细胞(MRC5 SV)中的表达,以确保RUVBL2基因的knock-down效果。用Rad51和γ-H2AX的特异性抗体进行免疫荧光染色,应用荧光显微镜观察计数Rad51和γ-H2AX foci的数量。Western blot法证实了si RNA以及转染的效率,确定了RUVBL2基因的存在有利于诱导DNA双链断裂(DSB)条件下Rad51和γ-H2AX被招募到DNA损伤位点。