构建重组乳酸乳球菌生产谷胱甘肽

以大肠杆菌染色体DNA为模板 ,分别扩增得到编码γ 谷氨酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶的基因gshA和gshB。将gshA和gshB基因克隆到质粒pNZ814 8中 ,电转化乳酸乳球菌NZ90 0 0 ,获得重组菌NZ90 0 0(pNZ32 0 3)。在添加 10mmol L谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸的M17培养基中培养该重组菌 ,当OD6 0 0 达到 0 4时用乳酸链球菌素诱导 4h ,胞内谷胱甘肽含量达到 35 8nmol mg蛋白 (胞内浓度相当于 14 0mmol L) ,这是在革兰氏阳性菌中生产谷胱甘肽的首例报道。

重组大肠杆菌催化合成谷胱甘肽的研究

利用PCR技术扩增编码γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSH )及谷胱甘肽合成酶(GSH )的基因,并进行了部分序列分析,分别构建了表达质粒pTrc-gsh 和pTrc-gsh ,它们在E.coliBL21中的稳定性很好。在E.coliBL21(pTrc-gsh )∶E.coliBL21(pTrc-gsh )=3∶1的情况下,谷胱甘肽的合成达3.31g/L,高于工程菌E.coliBL21(pTrc-gsh)催化合成的谷胱甘肽的量(2.51g/L)。利用E.coliBL21(pTrc-gsh )与E.coliBL21(pTrc-gsh )将γ-谷氨酰半胱氨酸的合成与谷胱甘肽的合成分步进行,谷胱甘肽的合成达3.78g/L,比利用E.coliBL21(pTrc-gsh)采用两步法合成的谷胱甘肽高42.1%,解决了GSH对GHI的反馈抑制,并降低了ADP对第二步反应的抑制程度。

糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中S腺苷蛋氨酸合成酶基因的表达及其意义

目的 比较正常大鼠和糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中基因表达的差异 ,探讨糖尿病性心肌病的发病机制。 方法 实验大鼠分为两组 :对照组和糖尿病性心肌病组。从心肌组织中抽提 m RNA,经逆转录分别用Cy3、Cy5荧光标记 ,获得两组动物来源的 c DNA探针。c DNA探针与基因表达谱芯片杂交 ,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。 结果 S腺苷蛋氨酸合成酶的表达水平在糖尿病性心肌病时明显上调。 结论 S腺苷蛋氨酸合成酶通过影响糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中高半胱氨酸的含量在糖尿病性心肌病发病机制中起重要作用。

红霉素对高氧暴露早产鼠肺组织谷胱甘肽与γ-GCS表达的影响

目的观察红霉素对高氧暴露下早产新生大鼠肺组织中的谷胱甘肽(GSH)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响,探讨红霉素对高氧肺损伤的干预作用。方法将孕第21天剖宫产生后1 d的新生SD大鼠随机分为4组:对照组、红霉素组、高氧组、红霉素高氧组。高氧组和红霉素高氧组持续暴露于常压氧舱中,对照组和红霉素组置于同一室常压空气中;红霉素组和红霉素高氧组每天尾静脉注射红霉素,高氧组和对照组注射生理盐水。四组分别于高氧暴露后第1、7、14天取肺组织标本,石蜡包埋切片行苏木精-伊红染色观察肺组织病理学变化,双抗体夹心酶联免疫吸附法分析GSH和γ-GCS的蛋白水平,半定量逆转录聚合酶链反应测定γ-GCS mRNA表达。结果高氧暴露后第1和7天,对照组、红霉素组、高氧组、红霉素高氧组四组间大鼠肺组织GSH、γ-GCS及γ-GCS mRNA表达的差异均有统计学意义(P<0.05)。其中,高氧组和红霉素高氧组的GSH、γ-GCS表达以及红霉素高氧组的γ-GCS mRNA表达均高于对照组和红霉素组,差异有统计学意义(P均<0.05)。第14天,四组间大鼠肺组织GSH、γ-GCS表达的差异无统计学意义(P均>0.05),而红霉素高氧组γ-GCS mRNA表达高于其余三组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论氧化爆发能导致GSH与γ-GCS的表达异常。红霉素可能通过上调γ-GCS活性,提高GSH抗氧化,在减轻高氧肺损伤过程中发挥一定抗氧化作用。

N-乙酰半胱氨酸对慢性肝损伤大鼠Nrf2及HO-1和γ-GCS表达的影响

目的观察小剂量N-乙酰半胱氨酸(NAC)注射液对慢性肝损伤大鼠核因子相关因子2(Nrf2)及下游分子血红素氧合酶1(HO-1)和γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的影响。方法雄性SD大鼠sc给予25%CCl4橄榄油溶液(1 m L·kg^(-1)),每周3次,连续4周。4周末,将造模成功的大鼠分别ip给予NAC 45,90和180 mg·kg^(-1)及阳性对照谷胱甘肽(GSH)54 mg·kg^(-1),每日1次连续4周。检测血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、GSH、羟脯氨酸(Hyp)含量或活性;HE染色法观察肝组织病理变化;免疫组化检测肝组织Nrf2,HO-1和γ-GCS蛋白表达。结果与正常对照组相比,模型组大鼠血清GPT,GOT,MDA和Hyp明显升高(P<0.01),Nrf2,HO-1和γ-GCS蛋白表达及SOD活性和GSH含量无明显变化;模型组肝细胞广泛脂肪变性,肝组织可见许多大小不等的圆形空泡,部分肝细胞水肿,汇管区伴炎症细胞灶性浸润;与模型组相比,NAC各治疗组大鼠血清GPT和GOT活性明显降低(P<0.01),肝组织SOD活性、GSH和Hyp含量下降(P<0.01,P<0.05),Nrf2,HO-1和γ-GCS蛋白表达增加(P<0.01,P<0.05)。与阳性对照组比较,NAC 45,90和180 mg·kg^(-1)组肝组织Hyp明显降低(P<0.01),NAC 45 mg·kg^(-1)组肝组织Nrf2蛋白表达明显升高(P<0.01)。与NAC 45 mg·kg^(-1)组比较,90和180 mg·kg^(-1)组Nrf2蛋白表达较低(P<0.01)。结论小剂量NAC可能通过调节Nrf2及下游因子HO-1和γ-GCS的表达发挥抗氧化应激作用进而发挥防治慢性肝损伤进展的目的。

人γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位基因E-box元件功能初步分析

目的:探讨人支气管上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因上游调控序列E-box元件的功能。方法:利用PCR法克隆人GCLC基因上游调控序列,PCR重叠延伸法对2个E-box元件分别和同时进行定点突变。扩增获得的突变体片段克隆入PMD18-T载体,DNA测序鉴定后,亚克隆入野生型GCLC-Luc荧光素酶报道载体。将3个突变体质粒和野生型质粒转染人肺泡上皮细胞A549和人支气管上皮细胞16HBE,检测转染后细胞荧光素酶活性值。结果:测序结果证实,成功将E-box1CACGGG突变为AGCGGG;E-box2CACGTG突变为CACGGA。GCLC-Luc、GCLC-mEbox1-Luc(突变E-box1)、GCLC-mEbox2-Luc(突变E-box2)、GCLC-mEbox12-Luc(突变E-box1和E-box2)转染A549细胞后荧光素酶活性值分别为(5197852±132206)U、(5455692±127431)U、(5315722±244197)U、(5174303±183179)U,转染16HBE细胞后荧光素酶活性值分别为(141157±18907)U、(126454±23724)U、(137315±22179)U、(132441±28970)U。经过统计学分析,各组荧光酶活性没有显著差别,均P>0.05。结论:E-box元件不参与基础状态下A549细胞和16HBE细胞GCLC基因转录调控。

深淹胁迫对三峡库区狗牙根谷胱甘肽代谢途径的影响

以三峡库区自然消落带野生狗牙根为研究对象,进行自然条件下不同水位深度(0、5、10、15、20、25、30 m)的深淹胁迫以及胁迫后恢复试验,对谷胱甘肽合成、循环代谢关键酶及物质含量进行分析。结果表明,深淹胁迫后,狗牙根可以通过增强谷胱甘肽合成及循环代谢关键酶:谷胱甘肽还原酶和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的活性,维持植物体内谷胱甘肽水平及氧化还原状态,从而抵御深淹造成的氧化伤害。深淹恢复生长30 d后,狗牙根谷胱甘肽、总谷胱甘肽含量、谷胱甘肽还原酶、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性恢复至未淹对照水平。从植物对深淹胁迫的生理响应上,表明狗牙根作为禾本科植物在遗传上具有一定的耐淹能力,可以作为三峡水库消落带植被恢复的物种。

腺病毒E1A蛋白抑制大鼠肺泡上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位表达的机制研究

目的:研究腺病毒E1A蛋白抑制大鼠肺泡上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)表达的机制。方法:构建稳定表达腺病毒E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞,将GCLC基因5’-上游调控序列不同长度的缺失体-萤火虫荧光素酶报道系统转染后分析转录活性的变化;检测AP-1、NF-κB、USF与GCLC基因调控序列的结合活性。结果:GCLC基因5’-上游调控序列报道系统检测结果显示大部分(9/11)缺失体的转录活性抑制,AP-1、NF-κB、USF与GCLC基因的结合活性增强,而对应的功能元件的转录活性降低。结论:腺病毒E1A蛋白通过抑制GCLC基因5’-上游调控序列的转录活性,扩大大鼠肺泡上皮细胞氧化应激时的氧化/抗氧化失衡,其机制可能涉及E1A对辅助转录因子的抑制。

血红素加氧酶1调节γ谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达在慢性阻塞性疾病大鼠肺组织中的作用

血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)是催化血红素降解酶类中最易被诱导的一种,增加HO-1表达有抗氧化的细胞保护作用;而γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma-glutamyl cysteine synthetase,γ-GCS)是肺组织中最重要的抗氧化酶之一,通过免疫组化、免疫印迹、逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术研究慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺内HO-1、γ-GCS mRNA及其蛋白质表达,并检测HO-1活性,同时利用HO-1诱导剂氯高铁血红素(hemin)和其活性抑制剂锡原卟啉(SnPP)对其进行干预,在整体水平探讨HO-1在COPD中对肺功能及γ-GCS表达的影响.结果显示,氯高铁血红素组肺功能较COPD组及SnPP组显著改善;氯高铁血红素组及SnPP组Ho-1 mRNA及其蛋白质的表达较COPD组升高;氯高铁血红素组HO-1的活性较COPD升高而Snpp组HO-1的活性较COPD组降低;氯高铁血红素组γ-GCS mRNA及其蛋白质表达水平高于SnPP及COPD组;线性回归分析显示,HO-1蛋白质表达水平和活性影响γ-GCS表达.结果表明,HO-1可通过诱导γ-GCS的表达在COPD中起保护作用;而HO-1可能通过酶活性依赖和非酶活性依赖两种途径上调γ-GCS基因表达.

盐酸氨溴索对吸烟大鼠肺内转化生长因子-β_1和γ-谷氨酰胺半胱氨酸合成酶表达的影响

目的观察盐酸氨溴索对吸烟大鼠气道上皮细胞和肺泡巨噬细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)和γ-谷氨酰胺半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响,探讨其在慢性阻塞性肺疾病抗氧化治疗中的作用。方法吸入香烟烟雾法建立大鼠模型,盐酸氨溴索灌胃吸烟大鼠,比较气道阻力、肺顺应性,测定气道上皮细胞、肺泡巨噬细胞TGF-β1、γ-GCS蛋白和mRNA的表达。结果氨溴索组较吸烟组肺顺应性增高,气道阻力降低(P<0.05)。吸烟组和氨溴索组气道上皮细胞和肺泡巨噬细胞TGF-β1和γ-GCS表达明显高于对照组(P<0.01);氨溴索组TGF-β1蛋白和mRNA表达均低于吸烟组(P<0.05),气道上皮γ-GCS蛋白以及肺泡巨噬细胞mRNA与吸烟组差异无统计学意义,而肺泡巨噬细胞γ-GCS蛋白表达高于吸烟组(P<0.05)。结论盐酸氨溴索改善吸烟大鼠肺功能,降低肺内TGF-β1表达,提高肺泡巨噬细胞γ-GCS蛋白含量,增强抗氧化能力。

支气管哮喘豚鼠BALF炎症细胞中PPARγ、Nrf2和γ-GCS-h表达的变化

目的:研究支气管哮喘急性发作豚鼠肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞中PPARγ、Nrf2和γ-GCS-h表达变化并探索PPARγ对Nrf2/γ-GCS-h作用。方法:40只健康雄性豚鼠随机化原则分成对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松组(C组)和罗格列酮组(D组),每组10只豚鼠,卵蛋白致敏法复制哮喘模型。收集BALF,行细胞计数和分类,离心,上清液行活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)浓度测定,细胞涂片原位杂交检测PPARγ、Nrf2和γ-GCS-hmRNA表达,细胞涂片免疫细胞化学检测PPARγ、Nrf2和γ-GCS-h蛋白表达。结果:B组嗜酸性粒细胞数(EOS)比例高于A组、C组和D组,差异显著(P<0.01),BALF中ROS和MDA浓度在B组中最高,4组间差异显著(均P<0.05);PPARγ、Nrf2和γ-GCS-hmRNA和蛋白在B组表达最低,4组表达差异显著(均P<0.01)。PPARγ与Nrf2/γ-GCS-h表达均呈正相关(均P<0.05);γ-GCS-h与Nrf2表达呈正相关(r=0.954,P<0.05);哮喘组PPARγ、γ-GCS-h和Nrf2表达均与浸润的嗜酸性粒细胞数呈负相关(均P<0.05)。结论:PPARγ和Nrf2/γ-GCS-h在卵蛋白致敏急性支气管哮喘模型BALF炎症细胞中表达均下降;PPARγ可上调Nrf2/γ-GCS-h表达,在抑制炎症反应和氧化应激中发挥重要作用,这可能为支气管哮喘防治开辟新途径。

PPAR-γ/PGC-1α对支气管哮喘豚鼠肺组织Nrf2/γ-GCS-h作用

目的:观察PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-h在豚鼠支气管哮喘肺组织中表达而探索PPAR-γ/PGC-1α对Nrf2/γ-GCS-h作用。方法:40只健康雄性豚鼠随机化原则分成对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松(C组)和罗格列酮治疗组(D组),每组10只豚鼠,卵蛋白致敏法复制哮喘模型。原位杂交检测PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-hmRNA表达,免疫组化和Western blot检测四种蛋白表达。结果:PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-h的mRNA哮喘组表达最低,四组表达差异有统计学意义(P均<0.01);免疫组化和Western blot显示PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-h的蛋白哮喘组表达几乎都呈阴性而且以核内表达为主,四组差异均有统计学意义(P均<0.01)。PPAR-γ表达与PGC-1α表达呈正相关,γ-GCS-h mRNA表达与PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2核内表达均呈正相关,Nrf2表达与PPAR-γ和PGC-1α表达均呈正相关。结论:PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-h在卵蛋白致敏急性支气管哮喘模型中表达下降;PPAR-γ/PGC-1α可通过上调Nrf2/γ-GCS-h表达提高组织的抗氧化能力,因而PPAR-γ/PGC-1α在哮喘的发病和防治可能起重要的作用。

核因子相关因子2调节大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达

红系衍生的核因子相关因子2(Nrf2)是调节抗氧化基因表达的关键转录因子.γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)是肺内主要的抗氧化基因,但Nrf2如何调节γ-GCS表达目前仍不清楚.该文采用香烟烟雾提取物(CSE)诱导大鼠气道上皮细胞为研究对象,探索Nrf2调节γ-GCS基因表达机制.细胞免疫荧光显示,Nrf2蛋白质在CSE处理1、3和6h组,主要在胞核中表达.细胞免疫化学与Western印迹显示,γ-GCS蛋白质在CSE1、3、6h组表达明显增强,其中Western印迹结果高于对照组(P<0.05);Nrf2胞核蛋白质表达增强.p-aPKCι/ζ蛋白质在CSE1、3h组表达增强,与对照组相比差异显著(P<0.05).RT-PCR结果表明,γ-GCSmRNA在CSE1、3、6h组表达明显高于对照组(P<0.05).γ-GCS活性在CSE1、3、6h组增高并高于对照组(P<0.05).GSH含量在CSE3、6h组明显高于对照组(P<0.05).预先加入aPKCι/ζ抑制剂RO813220,Nrf2胞浆蛋白质表达增强,GSH含量、p-aPKCι/ζ蛋白质、γ-GCS蛋白质与其mRNA和活性均明显低于CSE3h组(P<0.05).相关性分析显示Nrf2与γ-GCS、γ-GCS活性、p-aPKCι/ζ呈正相关,p-aPKCι/ζ与Nrf2、γ-GCS、γ-GCS活性呈正相关(P<0.05).以上结果表明,CSE可能通过aPKCι/ζ-Nrf2信号通路调节γ-GCS的表达水平和活性.

以乙酸为碳源生长菌体的两阶段培养生产L-半胱氨酸合成酶

假单胞菌F12能够将DL-2-氨基-△^2-噻唑啉4-羧酸（DL-2-amino-△^2-thiazoline-4-carboxylicacid，DL—ATC）转化为L-半胱氨酸。将该微生物转化过程分为以乙酸和氨为碳源和氮源的菌体生长阶段和利用DL—ATC诱导L-半胱氨酸合成酶产生阶段。考察了乙酸对菌体生长的影响以及菌体比生长速率对L-半胱氨酸合成酶诱导的影响。结果表明，当乙酸浓度大于4g／L时对菌体生长有显著抑制作用，乙酸的存在对L-半胱氨酸合成酶的诱导有抑制作用，菌体比生长速率较高时更有利于酶系的产生。在5L罐中进行的两阶段培养，最高体积酶活达到283U／mL，比优化前提高了150％，比分批培养提高了130％。

哮喘豚鼠肺、肝组织中还原型谷胱甘肽、γ谷氨酰半胱氨酸合成酶及其重链mRNA的表达

目的研究支气管哮喘(简称哮喘)豚鼠肺、肝组织中还原型谷胱甘肽(GSH)、γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)活性及其重链(γ-GCSh)mRNA表达的差异和变化。方法取健康雄性豚鼠30只,随机分为哮喘组(A组)、地塞米松治疗组(B组)及对照组(C组),每组10只。采用腹腔内注射联合雾化吸入卵清蛋白复制哮喘豚鼠模型,用生物化学反应比色法检测各组豚鼠肺、肝组织中还原型谷胱甘肽(GSH)、总谷胱甘肽(TGSH)和γ-GCS的活性,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组豚鼠肺、肝组织中γ-GCSh mRNA的表达。结果A组豚鼠与B组、C组比较肺内γ-GCS活性及γ-GCSh mRNA的表达明显升高,相应的总谷胱甘肽水平增加(P均<0.01),但GSH水平较对照组、治疗组下降(P<0.05);肝脏组织内γ-GCS活性、γ-GCSh mRNA的表达、TGSH及GSH浓度A、B、C三组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论哮喘豚鼠肺内γ-GCS、TGSH及γ-GCSh mRNA表达增高,并可能在抗氧化损伤中发挥重要作用,而TGSH、GSH、γ-GCS及γ-GCSh mRNA在哮喘豚鼠肝脏局部表达无变化。

谷胱甘肽与 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶在早产新生大鼠高体积分数氧肺损伤中的抗氧化作用

目的 通过研究高体积分数氧（高氧）暴露对早产新生大鼠肺组织谷胱甘肽（GSH）和 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的影响，探讨GSH 与γ-GCS在高氧肺损伤中的抗氧化作用。方法 出生1 d早产新生 SD大鼠随机分为2组：高氧组与空气组。高氧组持续暴露于常压氧舱中，氧体积分数 〉850 mL/L；空气组置于同一室常压空气中。2组分别于高氧或空气暴露后1、7、14 d提取肺组织标本。采取双抗体夹心ELISA 法分析肺组织匀浆中GSH 和γ-GCS的表达水平。采取二喹啉甲酸（BCA）方法检测GSH 水平的变化。采取半定量反转录-PCR测定γ-GCS mRNA水平的动态表达。结果 1.ELISA法和BCA法均检测出肺组织中GSH 蛋白表达结果示，与空气组比较，高氧组早产大鼠1、7 d肺组织中 GSH 蛋白水平的表达显著增强，14 d明显减弱，差异有统计学意义（P均〈0.05）。2.与空气组比较，高氧组早产大鼠1、7 d肺组织中 γ-GCS mRNA 和蛋白水平的表达均显著增强，差异有统计学意义（P均 〈0.05）；但14 d呈下降趋势，2组相比差异无统计学意义（P 〉0.05）。结论 氧化爆发诱导GSH 与γ-GCS的异常表达参与高氧肺损伤发病过程。高氧暴露可能通过上调γ-GCS活性，提高GSH 抗氧化，在减轻高氧肺损伤过程中发挥一定抗氧化作用。

硫化氢对氧化损伤心肌细胞保护作用研究

目的探讨硫化氢(H2S)对体外培养乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法用低浓度过氧化氢诱导原代培养乳鼠心肌细胞氧化损伤模型,观察细胞形态结构,测定培养介质中乳酸脱氢酶(LDH)活力、细胞内丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽(GSH)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(-γGCS)活力。结果过氧化氢对心肌细胞有明显的损伤作用,H2S可使培养介质中的LDH活力和MDA水平显著下降,能通过加强-γGCS活力显著增加细胞内GSH水平。结论H2S对过氧化氢致心肌细胞损伤有保护作用,其机制之一可能是通过增加抗氧化剂GSH的生成。

红霉素对高氧肺损伤早产鼠白细胞介素6、8及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的影响

目的探讨红霉素在早产鼠高氧肺损伤中对白细胞介素6(IL-6),IL-8及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的干预作用。方法 96只早产新生SD大鼠生后1 d分为四组:Ⅰ组空气暴露+生理盐水、Ⅱ组空气暴露+红霉素、Ⅲ组高氧暴露+生理盐水、Ⅳ组高氧暴露+红霉素,每组各24只。四组分别于高氧或空气暴露后1、7、14 d处死取肺组织做病理学检查。采取双抗体夹心酶联免疫吸附试验分析肺组织匀浆细胞因子IL-6、IL-8和γ-GCS的水平,并采取半定量逆转录聚合酶链反应测定γ-GCS mRNA的表达。结果Ⅰ、Ⅱ组肺组织无明显病理改变,Ⅲ组肺泡炎性改变及水肿较Ⅳ组更为明显。Ⅳ组γ-GCS水平在7、14 d较Ⅲ组降低,但是γ-GCS mRNA表达较γ-GCS mRNA均明显增强(P均<0.05)。Ⅲ组1、7、14 d IL-6及IL-8水平较Ⅰ组均显著增强(P均<0.05)。Ⅳ组IL-6水平在1、7、14 d与Ⅲ组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05),而IL-8水平仅在7、14 d较Ⅲ组明显下降(P均<0.05)。结论氧化爆发诱导的炎症介质IL-6及IL-8参与高氧肺损伤发病过程,红霉素可抑制其释放,影响γ-GCS活性从而提高谷胱甘肽抗氧化能力。

酶法生产L-半胱氨酸产酶培养基的研究

目的:找到能够高效合成L-半胱氨酸合成酶的培养基。方法:研究进行了假单胞菌F12在复合培养基和简单培养基合成L-半胱氨酸能力的对比及产酶过程分析。结果:简单培养基生长的菌体合成L-半胱氨酸能力较高,单位菌体产生L-半胱氨酸能力比复合培养基增大1倍;DL-2-氨基-△2-噻唑啉-4-羧酸(DL-ATC)诱导L-半胱氨酸合成酶的产生;葡萄糖的存在不利于产酶,后期酶的比生产速率为-0.11 U/mg DCW·h,对照中为4.04 U/mg DCW·h。结论:以DL-ATC为碳氮源的基本培养基最有利于产酶。

Bach1／Nrf2竞争性调控与慢性阻塞性肺疾病

氧化应激是慢性阻塞性肺疾病（COPD）的主要发病机制之一。谷胱甘肽（GSH）是肺内主要的抗氧化剂，γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）是GSH合成的限速酶。细胞核内Bach1和Nrf2（NF-E2-related factor 2）的平衡能够上调或下调抗氧化酶的基因表达。Keap1、PERK（PKR-like ER kinase）和糖原合成酶激酶3B也可以通过对Nrf2的调控影响γ-GCS的表达。因此Bach1／Nrf2竞争性调控对慢性阻塞性肺疾病的发病和治疗有重要作用。