非小细胞肺癌不同胸腔积液严重程度及预后患者lncRNA MEG3表达及其与Th17/CD4^(+)T细胞的关系

目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)不同胸腔积液严重程度及预后患者lncRNA MEG3表达及其与Th17/CD4^(+)T细胞的关系。方法:选取2020年1月至2022年12月福建医科大学附属泉州第一医院收治的104例NSCLC恶性胸腔积液患者作为研究对象,根据胸腔积液量分为3组:少量胸腔积液组(35例)、中量胸腔积液组(42例)、大量胸腔积液组(27例)。根据患者疾病实际发展转归分为预后良好组(29例未出现复发和转移)和预后不良组(75例出现复发和转移)。另选取同期于福建医科大学附属泉州第一医院治疗的60例肺炎良性胸腔积液患者作为对照组。实时荧光定量PCR检测两组胸腔积液中MEG3表达。收集受试者外周静脉血,流式细胞术检测外周血Th17细胞、CD4^(+)T细胞比例,并计算Th17/CD4^(+)T。对比各组患者lncRNA MEG3及外周血Th17、CD4^(+)T细胞水平。Logistic回归分析NSCLC胸腔积液及预后的影响因素。结果:NSCLC组胸腔积液lncRNA MEG3表达及CD4^(+)T细胞百分比低于对照组,Th17细胞百分比、Th17/CD4^(+)T高于对照组(P<0.05)。大量胸腔积液组lncRNA MEG3表达及CD4^(+)T细胞百分比低于少量胸腔积液组、中量胸腔积液组,中量胸腔积液组lncRNA MEG3表达及CD4^(+)T细胞百分比低于少量胸腔积液组,大量胸腔积液组Th17细胞百分比、Th17/CD4^(+)T高于少量胸腔积液组、中量胸腔积液组,中量胸腔积液组Th17细胞百分比、Th17/CD4^(+)T高于少量胸腔积液组(P<0.05)。预后不良组lncRNA MEG3表达及CD4^(+)T百分比低于预后良好组,而Th17细胞百分比、Th17/CD4^(+)T高于预后良好组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,lncRNA MEG3为NSCLC胸腔积液的保护因素,Th17/CD4^(+)T为危险因素(P<0.05);lncRNA MEG3为NSCLC预后的保护因素,Th17/CD4^(+)T为危险因素(P<0.05)。结论:NSCLC不同胸腔积液严重程度及预后患者lncRNA MEG3表达及Th17/CD4^(+)T不同,且lncRNA MEG3为NSCLC胸腔积液及预后的保护因素,Th17/CD4^(+)T为危险因素,可作为胸腔积液严重程度及预后诊断的有效生物标志物。

阻断DKK1通过促进CD4^(+)T细胞Th1型极化改善抗肿瘤免疫应答

目的:探讨恶性肿瘤中Dickkopf-1(DKK1)表达对CD4^(+)T细胞极化的影响及其作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。方法:利用生物信息学方法分析DKK1在多种类型肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平,分析DKK1表达与肿瘤患者预后及肿瘤微环境免疫浸润间的相关性。利用流式细胞术检测DKK1蛋白对CD4^(+)T细胞表型变化的影响。构建黑色素瘤B16F10细胞小鼠皮下移植瘤模型,观察阻断DKK1对小鼠移植瘤生长和移植瘤组织中免疫细胞浸润与表型的影响。结果:DKK1 mRNA表达水平在多种肿瘤组织中显著高于癌旁组织,DKK1高表达与多数肿瘤患者的不良预后相关且在多数肿瘤中DKK1对CD4^(+)T细胞抗肿瘤免疫应答功能有重要负性调节作用(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,DKK1蛋白刺激可显著降低CD4^(+)T细胞中T-bet、IFN-γ及CD107a表达水平(均P<0.01)。在小鼠皮下黑色素瘤模型中发现,阻断DKK1可以显著抑制小鼠移植瘤的生长(P<0.01),有效改善抗肿瘤免疫应答,表现为Th1细胞(T-bet+CD4^(+))占比显著升高(P<0.001),效应性CD8^(+)T细胞(CD44+CD62L-)占比显著升高(P<0.01),Th2细胞(GATA3^(+)CD4^(+))与Treg细胞占比显著下降(均P<0.01)。结论:阻断DKK1可有效促进CD4^(+)T细胞向Th1型极化,DKK1具有作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。

强直性脊柱炎患者外周血TLR4、JAK3基因表达与Th17/Treg失衡的关系

目的探究强直性脊柱炎患者外周血中Toll样受体4(TLR4)、Janus蛋白酪氨酸激酶3(JAK3)基因表达与辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡的关系。方法101例AS患者(AS组)按照AS疾病活动指数(BASDAI)评分分为AS稳定期(ASS)组(<4分)42例、AS活动期(ASA)组(≥4分)59例,另选同期于本院体检健康者为健康组50例。荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)中TLR4、JAK3 mRNA表达,检测血清Th17、Treg细胞比例,并计算Th17/Treg比值。结果AS组外周血PBMC中TLR4 mRNA、JAK3 mRNA表达高于健康组(P<0.05)。AS组外周血Th17比例及Th17/Treg高于健康组,Treg比例低于健康组(P<0.05)。较高水平TLR4 mRNA、JAK3 mRNA及Th17为AS的危险因素,较高水平Treg为AS保护因素。AS患者TLR4 mRNA、JAK3 mRNA分别与Th17比例及Th17/Treg呈正相关,与Treg比例呈负相关(P<0.05)。结论AS患者PBMC中TLR4、JAK3基因呈高表达且Th17/Treg呈失衡状态,TLR4、JAK3基因高表达与AS患者Th17/Treg失衡密切相关。

白芍总苷胶囊联合来氟米特对类风湿关节炎Th1/Th2细胞平衡和外周血单核细胞TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨白芍总苷胶囊联合来氟米特对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者辅助性T细胞(helper T cell,Th)1/Th2细胞平衡和外周血单核细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的影响。方法按照信封抽签法将锦州医科大学附属第一医院2021年4月至2023年12月期间接收的129例RA患者分为对照组(n=64,来氟米特片治疗)和观察组(n=65,白芍总苷胶囊联合来氟米特片治疗)。对比两组疗效、临床症状、病情评分、疾病相关指标、Th1/Th2细胞平衡和TLR4/NF-κB信号通路相关指标,同时观察两组不良反应发生情况。结果观察组的临床总有效率高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,观察组治疗2个月后晨僵时间缩短,关节肿胀数和关节压痛数减少,疼痛视觉模拟量表(visual analog scale of pain,VAS)评分和RA患者病情评价(disease activity score 28,DAS28)评分下降,C反应蛋白、红细胞沉降率、类风湿因子下降,Th2细胞升高,Th1细胞、Th1/Th2下降,TLR4信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)、NF-κB mRNA下降(P<0.05)。两组不良反应发生率对比无差异(P>0.05)。结论白芍总苷胶囊联合来氟米特治疗RA患者,可促进患者症状改善,提高临床治疗效果,可能与调节Th1/Th2细胞平衡和抑制外周血单核细胞TLR4/NF-κB信号通路激活有关。

CD4^(+)/CD8^(+)、Th17/Treg与老年慢性阻塞性肺疾病患者病情及近期预后的相关性

目的探讨CD4^(+)/CD8^(+)、辅助性T细胞17(helper T cells 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T,Treg)检测在老年慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者病情及预后评估中的价值。方法选择老年COPD患者288例(COPD组)和老年健康体检者70例(对照组)。比较COPD组和对照组CD4^(+)、CD8^(+)、Th17、Treg、CD4^(+)/CD8^(+)、Th17/Treg,比较COPD组不同病情患者CD4^(+)、CD8^(+)、Th17、Treg、CD4^(+)/CD8^(+)、Th17/Treg;COPD组患者随访6个月,比较不同预后患者临床资料。多因素Logistic回归分析老年COPD近期不良预后的影响因素,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析CD4^(+)/CD8^(+)、Th17/Treg预测老年COPD近期不良预后的临床价值。结果COPD组外周血CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、Treg含量均低于对照组,外周血CD8^(+)、Th17含量、Th17/Treg高于对照组(P<0.05);Ⅲ级组外周血CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、Treg含量低于Ⅰ级组、Ⅱ级组,外周血CD8^(+)、Th17含量、Th17/Treg高于Ⅰ级组、Ⅱ级组,Ⅱ级组外周血CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、Treg含量低于Ⅰ级组,外周血CD8^(+)、Th17含量、Th17/Treg高于Ⅰ级组(P<0.05);Pearson相关性分析显示,COPD患者CD4^(+)/CD8^(+)与病情分级呈负相关,Th17/Treg与病情分级呈正相关(P<0.05);预后不良组外周血CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、Treg含量低于预后良好组,外周血CD8^(+)、Th17含量、Th17/Treg、血清IL-6、CRP水平高于预后良好组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,CD4^(+)/CD8^(+)、Th17/Treg、IL-6、CRP是老年COPD患者近期不良预后的影响因素;ROC曲线分析显示,CD4^(+)/CD8^(+)、Th17/Treg预测老年COPD患者近期不良预后曲线下面积分别为0.813(95%CI:0.730~0.896)、0.852(95%CI:0.730~0.896)。结论CD4^(+)/CD8^(+)、Th17/Treg在老年COPD患者病情及近期预后评估中具有较高的临床价值。

过敏原对过敏性鼻炎患者外周血CD4^(+)Th1 IL-18、IL-18BPa和IL-18Rα表达的影响

目的探讨过敏原对健康人(healthy control,HC)和过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者外周血CD4^(+)Th1细胞表达IL-18、IL-18BPa和IL-18Rα蛋白水平及mRNA水平的影响。方法收集皮肤点刺试验阴性的鼻炎(AR^(-))、皮肤点刺试验阳性的鼻炎(AR^(+))患者和HC的外周血标本。流式细胞术检测过敏原对CD4^(+)Th1细胞表达IL-18、IL-18BPa和IL-18Rα蛋白水平的影响;qPCR检测过敏原对CD4^(+)T细胞表达IL-18、IL-18BPa和IL-18RαmRNA水平的影响。结果与HC相比,AR^(-)和AR^(+)患者外周血Th1细胞中IL-18蛋白的表达增加,IL-18BPa蛋白的表达减少;AR^(+)患者外周血Th1细胞中IL-18Rα蛋白的表达增加;过敏原可增强HC Th1细胞IL-18Rα蛋白的表达,并诱导AR^(+)患者和HC CD4^(+)T细胞IL-18、IL-18BPa和IL-18RαmRNA的表达。结论过敏原极可能通过促进外周血CD4^(+)Th1细胞表达IL-18和IL-18Rα进而参与AR发病。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨大黄素对急性胰腺炎大鼠Th17/Treg平衡及炎症反应的影响

目的研究大黄素(emodin,EMO)通过TLR4(Toll样受体4)/NF-κB(核转录因子κB)通路对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)大鼠Th17/Treg免疫失衡的调节及对炎症反应的影响。方法50只大鼠随机分正常对照组、模型组、阳性对照组、EMO低剂量组和EMO高剂量组,每组10只。采用牛磺脱氧胆酸钠构建急性胰腺炎大鼠模型,阳性对照组大鼠腹腔注射2×104 U/kg乌司他丁,EMO高、低剂量组腹腔注射大黄素混悬液50、25 mg/kg,模型组和对照组腹腔注射等量生理盐水。ELISA法检测血清淀粉酶、脂肪酶水平及炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平。Western-blot法检测TLR4、NF-κB的蛋白表达;流式细胞术检测Treg、Th17及其比例。结果与对照组比较,模型组血清淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、IL-1β水平上升(P<0.05)。与模型组比较,EMO低剂量组、EMO高剂量组以及阳性药组血清淀粉酶、脂肪酶TNF-α、IL-6、IL-1β水平下降(P<0.05)。与EMO低剂量比较,EMO高剂量组以及阳性对照组血清淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、IL-1β水平下降(P<0.05)。与对照组比较,模型组TLR4、NF-κB蛋白相对表达升高,Th17/Treg比例上升(P<0.05);与模型组比较,EMO低剂量组、EMO高剂量组以及阳性对照组TLR4、NF-κB蛋白相对表达降低,Th17/Treg比例下降(P<0.05)。与EMO低剂量相比,EMO高剂量组以及阳性对照组TLR4、NF-κB蛋白相对表达降低,Th17/Treg比例下降(P<0.05)。结论大黄素可以通过调控TLR4/NF-κB信号通路减轻急性胰腺炎大鼠的胰腺损伤,维持Th17/Treg平衡,改善免疫紊乱。

EGCG调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对特应性皮炎大鼠Th1/Th2平衡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对特应性皮炎(AD)大鼠的保护作用及潜在机制。方法 将SPF级SD大鼠分为对照(Control)组、AD模型(AD)组、AD+EGCG治疗(EGCG)组、AD+地塞米松阳性对照(DXM)组、AD+EGCG+TLR4激动剂(TLR4)组,每组18只。根据临床损伤严重程度计算皮肤损伤评分;ELISA检测炎症因子的表达;HE染色观察组织学变化;流式细胞仪分析Th1和Th2阳性细胞比例;Western blot检测TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白水平。结果 与Control组比较,AD组大鼠背部皮肤损伤程度较重,病理学损伤评分增加(P<0.05),白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)水平及Th1细胞百分比降低,白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)水平及Th2细胞百分比升高(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平升高(均P<0.05)。与AD组比较,EGCG组和DXM组大鼠皮肤损伤评分及皮肤损伤病理学评分降低,Th_1细胞百分比、IL-2、IFN-γ水平升高,IL-4、IL-13水平、Th_(2)阳性百分比、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平下降(均P<0.05)。与EGCG组比较,DXM组大鼠皮肤损伤评分及皮肤损伤病理学评分、Th_1、Th_(2)细胞百分比、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平差异无统计学意义(均P>0.05),TLR4组大鼠皮损评分及皮肤损伤病理学评分升高,皮损组织中Th_1细胞百分比降低,Th_(2)阳性百分比及TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平上调(均P<0.05)。结论 EGCG可以通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,维持Th1/Th2平衡来抑制炎症反应,进而降低AD的严重程度。

血清IgG4、Th17/Treg评估激素治疗AIP患者效果的价值

目的分析血清免疫球蛋白4(immunoglobulin 4,IgG4)、辅助性T细胞17(helper T 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)评估激素治疗自身免疫性胰腺炎(autoimmune pancreatitis,AIP)患者效果的价值。方法选取铜川市人民医院2021年4月至2023年9月收治的95例AIP患者,其中男55例,女40例,年龄(54.28±5.51)岁;48例有吸烟史,49例有饮酒史。治疗前,用流式细胞仪检测患者Th17、Treg,计算Th17/Treg,用酶联免疫吸附法检测AMY水平。所有患者均采用激素治疗。根据疗效将患者分为有效组(完全缓解、部分缓解)和无效组(治疗失败)。对比两组患者基础资料和血清学指标。分析血清IgG4、Th17/Treg评估激素治疗AIP患者效果的价值。采用t检验和χ^(2)检验。采用二元logistic逐步回归模型进行影响因素分析,绘制受试者操作特征曲线(ROC)评估预测效能。结果AIP患者激素治疗后,完全缓解43例,部分缓解30例,治疗失败22例,有效率为75.00%(73/95),无效率为23.16%(22/95)。有效组Th17/Treg和D-D、AMY、IgG4水平低于无效组[(1.05±0.14)比(2.21±0.34)、(0.23±0.05)mg/L比(0.52±0.12)mg/L、(296.56±15.74)U/L比(436.26±18.52)U/L、(2.47±0.41)g/L比(4.62±0.78)g/L],差异有统计学意义(t=23.475、16.556、35.005、17.091,均P<0.001)。二元logistic回归分析结果显示,Th17/Treg(OR=4.486,95%CI 1.533~13.125)、D-D水平(OR=3.333,95%CI 1.139~9.753)、AMY水平(OR=3.912,95%CI 1.337~11.445)、IgG4水平(OR=3.077,95%CI 1.052~9.003)是AIP患者激素治疗无效的影响因素(均P<0.05)。ROC分析显示,Th17/Treg、D-D、AMY、IgG4、四者联合预测AIP患者激素治疗无效的灵敏度分别为77.27%、63.64%、68.18%、72.73%、90.91%,特异度分别为76.71%、68.49%、69.86%、73.97%、91.78%。结论Th17/Treg、D-D、AMY、IgG4水平与AIP患者激素治疗无效相关,联合检测预测AIP患者激素治疗效果更为精准且高效。

食管癌来源外泌体通过E2F4对CD4+T细胞向Th17细胞分化的影响

目的:研究食管癌来源外泌体对CD4+T细胞向Th17细胞分化的可能作用机制。方法:分离人正常食管上皮细胞HEEC和人食管癌细胞Eca-109来源外泌体(即HEEC-Exo、Eca-109-Exo),同时构建稳定表达的sh-NC和sh-E2F4的Eca-109细胞株并分离其外泌体(即sh-NC-Exo、sh-E2F4-Exo)。应用所得的外泌体处理CD4+T细胞;此外,应用稳定表达sh-NC和sh-E2F4的Eca-109细胞株建立食管癌异种移植小鼠模型。流式细胞术检测CD4+T细胞中Th17细胞比例;qRT-PCR检测E2F转录因子4(E2F4)mRNA表达;Western blot检测E2F4、维甲酸相关核孤儿受体γt(ROR-γt)和IL-17蛋白表达;ELISA试剂盒检测IL-17的含量。结果:与PBS组相比,HEEC-Exo组CD4+T细胞中Th17细胞比例、ROR-γt蛋白的表达、IL-17含量以及E2F4mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与HEEC-Exo组相比,Eca-109-Exo组CD4+T细胞中Th17细胞比例、ROR-γt蛋白表达、IL-17含量以及E2F4 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。与Eca-109-Exo组相比,sh-NC-Exo组CD4+T细胞中Th17细胞比例、ROR-γt蛋白表达、IL-17含量以及E2F4 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与sh-NC-Exo组相比,shE2F4-Exo组CD4+T细胞中Th17细胞比例、ROR-γt蛋白表达、IL-17含量以及E2F4 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05)。与Eca-109组相比,sh-NC组小鼠肿瘤大小和E2F4、ROR-γt、IL-17蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与sh-NC组相比,sh-E2F4组小鼠肿瘤大小和E2F4、ROR-γt、IL-17蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:食管癌来源外泌体可能通过E2F4促进CD4+T细胞向Th17细胞分化,从而促进肿瘤生长。

牛蒡子苷元抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响

目的研究牛蒡子苷元抑制Toll样受体4(TLR4)/肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF6)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响。方法构建急性哮喘大鼠模型,随机分为5组(每组12只模型大鼠):模型组、牛蒡子苷元低、高剂量组、脂多糖(LPS,TLR4激活剂)组、牛蒡子苷元+LPS组,以12只Wistar正常大鼠作为对照组。分组处理后,观察各组大鼠哮喘症状并做评分、分类计数各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞、检测各组大鼠肺组织病理变化、血清IgE水平、BALF和血清中白细胞介素(IL)-4、干扰素γ(IFN-γ)水平、IFN-γ/IL-4及肺组织TLR4/TRAF6/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肺组织产生严重病理损伤,哮喘症状评分、WAt/Pbm、WAm/Pbm、BALF中巨噬细胞及淋巴细胞计数、血清IgE水平、BALF与血清中IL-4水平、肺组织TLR4、TRAF6表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05),BALF与血清中Th1型细胞因子IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4降低(P<0.05);与模型组相比,各牛蒡子苷元处理组中模型鼠的上述改变均被扭转,且高剂量牛蒡子苷元作用更强;LPS组大鼠各指标变化与牛蒡子苷元处理组相反,另外LPS可逆转高剂量牛蒡子苷元对大鼠各指标的作用。结论牛蒡子苷元可通过抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号激活而阻止哮喘大鼠气道炎症,促使Th1/Th2免疫平衡向Th1转移,改善大鼠气道重塑和肺损伤。

基于TLR4/NF-κB研究苗药黑骨藤对AGA大鼠Th17/Treg及相关细胞因子的影响

目的探究基于Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB研究苗药黑骨藤对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)及相关细胞因子的影响。方法在90只SPF级雄性健康大鼠中选取15只作为正常组,其余大鼠建立AGA模型,模成功后将大鼠随机分为模型组、秋水仙碱组、低剂量组、中剂量组、高剂量组各15只。低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予25、50、100 mg/kg苗药黑骨藤灌胃,秋水仙碱组使用0.1 mg/kg的秋水仙碱灌胃,正常组、模型组给予相同体积的生理盐水灌胃,持续给药7 d。观察各组Th17/Treg及相关细胞因子水平及TLR4、NF-κB蛋白表达量。结果与秋水仙碱组、中剂量组、低剂量组相比,高剂量组Th17、Th17/Treg及相关细胞因子水平及TLR4、NF-κB蛋白表达量明显较低,Treg明显较高(P<0.05)。结论苗药黑骨藤可通过下调TLR4、NF-κB蛋白表达量,抑制TLR4/NF-κB信号通路,减轻AGA炎症反应,降低Th17/Treg及相关细胞因子水平,起到治疗作用。

参芪地黄汤联合羟氯喹治疗IgA肾病的疗效观察及对Th1/Th2平衡的影响

目的:观察参芪地黄汤联合羟氯喹(HCQ)治疗气阴两虚型IgA肾病(IgAN)的临床疗效及其对Th1/Th2平衡的影响。方法:将42例气阴两虚型IgA肾病患者随机分成观察组和对照组,各21例,对照组给予口服HCQ,观察组在对照组基础上另予参芪地黄汤,两组均连续干预8周。比较两组患者的临床疗效和治疗前后中医症状评分、常规生化指标[血肌酐(SCr)、白蛋白(Alb)]、24 h尿蛋白定量(24 h-uPQ)、细胞因子[γ干扰素(INF-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)]及辅助性T淋巴细胞(Th)水平。结果:观察组临床总有效率(81.0%)高于对照组(57.1%)(P<0.05);治疗后两组患者各项中医症状评分均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P<0.05);治疗后两组患者SCr、24 h-uPQ、INF-γ、Th1和Th1/Th2水平均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P<0.05);治疗后两组患者Alb、IL-4、IL-10及Th2水平均较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05);结论:参芪地黄汤联合HCQ能明显改善气阴两虚型IgAN患者的临床症状,有效控制尿蛋白和延缓肾功能衰竭,调节免疫功能及缓解微炎症状态,临床疗效确切。

不同类型人乳头状瘤病毒感染者CD4+T细胞、CD8+T细胞、Th1/Th2因子水平分析

目的:探讨不同类型人乳头状瘤病毒(HPV)感染与外周血CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、Th1/Th2因子表达。方法:收集2021年7月-2022年6月就诊于本院的HPV感染者172例临床资料,均行HPV分型检测,并完成检测外周血CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、Th细胞因子,及白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)IL-4和IL-10。比较高危HPV感染与低危HPV感染者以及多重感染与单一感染外周血炎症因子差异。结果:172例HPV感染者中高危型HPV感染80.2%,低危型HPV感染19.8%;单一感染64.5%,多重感染35.5%。高危HPV感染以HPV 16最多,其次为HPV52、HPV58,低危HPV感染以HPV61最多。高危型HPV感染者外周血CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)比值和IL-2、IFN-γ水平均低于低危HPV感染者,CD8^(+)T细胞和血清IL-4、IL-10水平显著高于低危HPV感染者;多重感染者外周血CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)比值和IL-2、IFN-γ水平均低于单一感染者,CD8^(+)T细胞和血清IL-4、IL-10水平显著高于单一感染者(均P<0.05)。结论:不同类型HPV感染者CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞的表达存在差异,高危HPV感染者有着较低的CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、Th1细胞因子和较高的CD8^(+)T细胞、Th 2细胞因子表达,且多重感染者更为明显。

千金子二萜醇调控TGF-β/Smad4通路调节肾癌小鼠Th1/Th2免疫平衡

目的探究千金子二萜醇对肾癌小鼠Th1/Th2免疫平衡的影响及转化生长因子(TGF)-β/Smad4信号通路调控作用的可能机制。方法12只BALB/c小鼠随机分为模型组、实验组(模型+千金子二萜醇)和TGF-β/Smad通路抑制剂组(模型+LY2109761),通过接种肾癌Renca细胞构建肾癌小鼠模型。灌胃21 d后,取小鼠瘤块和脾脏组织并计算各组瘤块体积增长率,Western印迹检测小鼠脾脏TGF-βRⅡ和Smad4蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素(IL)-4和干扰素(IFN)-γ水平,RT-qPCR检测小鼠脾脏TGF-βRⅡ、Smad4、IL-4和IFN-γmRNA表达水平。结果与模型组相比,实验组肿瘤体积增长率、TGF-βRⅡ、Smad4 mRNA和蛋白表达显著降低,IL-4水平显著降低,IFN-γ水平显著升高,LY2109761组TGF-βRⅡmRNA表达显著升高,蛋白水平显著降低,Smad4蛋白表达水平显著降低(均P<0.05)。结论千金子二萜醇通过调控TGF-β/Smad4信号通路抑制肾癌模型小鼠的肿瘤生长,并调节Th1/Th2免疫平衡。

芍药汤加减对溃疡性结肠炎患者CD4^(+)T细胞平衡的影响及疗效分析

目的:观察芍药汤加减对轻、中度溃疡性结肠炎(UC)患者T细胞亚群中CD4^(+)T细胞中Th1/Th2、Th17/Treg信号通路相关细胞炎症因子的影响。方法:共纳入60例2019.09~2022.01至江苏省中医院消化内科就诊符合纳入标准的轻、中度UC患者作为研究对象,并分成芍药汤加减联合美沙拉秦组(即试验组)和美沙拉秦组(即对照组)各30例,共观察8周。记录治疗前后相关实验室指标如血浆炎症细胞因子(IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-17、IFN-γ、TNF-α)、CD4^(+)T细胞、部分梅奥评分和中医证候评分的变化。结果:(1)治疗疗效比较:试验组临床应答率为87%(26/30),高于对照组的60%(18/30)(P<0.05);试验组临床缓解率73%(22/30),高于对照组的47%(14/30)(P<0.05)。(2)CD4^(+)T细胞亚群及Th1/Th2、Th17/Treg信号通路相关细胞炎症因子比较:两组CD4^(+)T细胞比较未见差异(P>0.05),而细胞因子方面,治疗组在降低IL-6、IL-17、IFN-γ促炎症细胞因子和增加抑制性炎症细胞因子IL-10强于对照组(P>0.05)。(3)中医证候积分比较:在中医证候改善方面,试验组和对照组的总有效率分别为86.7%和66.7%,试验组高于对照组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:芍药汤加减辨证论治可以调节轻、中度UC大肠湿热证患者Th1/Th2、Th17/Treg平衡,同时可以帮助UC患者实现临床应答从而达到临床缓解,明显减轻UC患者症状及主要证候表现。

黄芪甲苷Ⅳ通过抑制TIM-1信号通路增加Th1/Th2细胞比率减轻IgA肾病小鼠肾损伤

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ(AS-Ⅳ)对IgA肾病(IgAN)小鼠1型辅助T(Th1)细胞/Th2细胞平衡的影响及其可能作用机制。方法建立BALB/c小鼠IgAN模型,造模成功小鼠随机分为模型组、AS-Ⅳ低、中和高剂量组各10只,另设对照组10只。AS-Ⅳ低、中和高剂量组小鼠灌胃(12.5、25、50)mg/kg AS-Ⅳ混悬液(生理盐水配制),对照组及模型组给予等量生理盐水。测定各组小鼠24 h尿蛋白(24 hUPr)含量和尿红细胞计数;测定小鼠血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)和白蛋白(ALB)水平;ELISA检测各组小鼠血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)和IL-10水平;流式细胞术检测小鼠外周血Th1/Th2细胞比率;HE染色观察小鼠肾组织病理学变化;反转录PCR和Western blot法分别检测小鼠肾组织中T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域1(TIM-1)、Toll样受体4(TLR4)的mRNA和蛋白表达。结果与模型组比较,AS-Ⅳ低、中和高剂量组小鼠第12周和第15周尿红细胞计数、24 h UPr、BUN、Scr、IL-4、IL-10水平、Th2细胞比例、TIM-1与TLR4 mRNA和蛋白表达水平均明显降低,ALB、IFN-γ水平、Th1细胞比例和Th1/Th2细胞比率升高,且以AS-Ⅳ高剂量组效果最佳。结论AS-Ⅳ通过抑制TIM-1信号通路,增加Th1/Th2细胞比率,抑制炎症反应,减轻IgAN小鼠肾损伤。

MBD2 promotes Th2 differentiation in ovalbumin-induced CD4+T cells

Introduction:Allergen-specific CD4+T cells play a central role in autoimmune disorders,allergies and asthma,with Th2-type immunity being the typical functional response of CD4+T cells.This study aimed to investigate the role of MBD2 in regulating Th2 cell differentiation.Methods:Splenic mononuclear cells were extracted from C57BL/6 mice,and CD4+T cells were isolated using magnetic beads and confirmed through flow cytometry.Lentivirus was employed to construct MBD2-silenced CD4+T cells.In vitro experiments were performed to treat splenogenic mononuclear cells and CD4+T cells with Ovalbumin(OVA),and Th2 cell ratios and IL-4 levels were assessed using flow cytometry and ELISA.Results:The purity of the isolated CD4+T cells was 95.73%,confirming successful isolation of primary CD4+T cells.Compared to the control group,the Th2 cell ratio exhibited an increase in the Th2-induced group.Treatment with 5-Aza(concentrations,1-100μM)promoted Th2 cell differentiation and increased IL-4 levels.Notably,when combined with Th2 induction and 10μM 5-Aza treatment,silencing MBD2 further amplified Th2 cell ratios and elevated IL-4 levels in cell supernatants.Furthermore,OVA(concentration,200μg/mL)induced the differentiation of CD4+T cells into Th2 cells and increased IL-4 secretion.Interestingly,silencing MBD2 significantly increased the Th2 cell ratio and IL-4 levels in OVA-treated CD4+T cells.Conclusion:In summary,OVA promoted CD4+T cell differentiation into Th2 cells and enhanced IL-4 levels.MBD2 was identified as a mediator of Th2 cell differentiation in splenic-derived CD4+T cells,influenced by OVA or 5-Aza treatment.

过敏性鼻炎患者外周血CD4^(+)2型辅助T(Th2)细胞中IL-18的表达升高

目的 探讨过敏性鼻炎(AR)患者外周血2型辅助T(Th2)细胞白细胞介素18(IL-18)、 IL-18结合蛋白亚型a(IL-18BPa)和IL-18受体α(IL-18Rα)的表达水平及过敏原对其表达的影响。方法 采用大籽蒿花粉过敏原粗提液(ASWE)和梧桐花粉过敏原粗提液(PPAE)、室尘螨过敏原粗提液(HDME)激发外周血单个核细胞和免疫磁珠分选后的CD4^(+)T细胞,流式细胞术检测上述标本CD4^(+)Th2细胞中IL-18、 IL-18BPa和IL-18Rα的表达,BioPlex检测血浆IL-4的水平,并分析其与IL-18+Th2细胞比例的相关性。结果 与正常对照相比,AR患者外周血CD4^(+)Th2细胞中IL-18+细胞的比例增加,IL-18的平均荧光强度(MFI)增强;IL-18Rα MFI降低。过敏原可直接诱导分选后的HC CD4^(+)Th2细胞表达IL-18和IL-18Rα, AR患者CD4^(+)Th2细胞表达IL-18Rα。AR患者血浆IL-4水平升高,并与IL-18+Th2细胞的比例相关。结论 过敏原可能通过诱导外周血CD4^(+)Th2细胞表达IL-18参与AR发病。

H3N2流感病毒HA保守Th表位对CD4^(+)T细胞活化及分化的影响

目的探讨H3N2病毒HA保守Th表位对CD4^(+)T细胞活化及分化的影响,为后续研究通用流感疫苗奠定基础。方法利用NetMHCⅡpan-4.0软件预测H3N2疫苗株A/Kansas/14/2017 HA的Th表位,以IC 50<500 nM为标准筛选阳性预测表位;采用SWISS-MODLE对A/Kansas/14/2017 HA进行同源建模,在3D模型上定位保守Th表位,根据表位的亲和力、保守性及核心序列的位置筛选高保守表位;合成6个非重叠的高保守Th表位,用保守Th表位体外刺激健康人外周血单核细胞,流式细胞术分析CD4^(+)T细胞表面分子CD69及细胞因子IFN-γ、IL-4的表达。结果在A/Kansas/14/2017 HA中共筛选到48个阳性预测Th表位,其中33个在H3-HA中是保守的;成功构建A/Kansas/14/2017 HA 3D模型,27个保守Th表位位于HA头部,其余6个位于杆部;人外周血PBMC经保守Th表位刺激后,CD69分子表达增加,细胞因子IFN-γ和IL-4合成增加。结论筛选到的6个H3N2 HA高保守Th表位具有免疫原性,可刺激CD4^(+)T细胞活化及分化。