细菌基因组结构:识别种系群的分子标志(英文)

目的 :评价细菌基因组结构作为种系标志在细菌亲缘关系识别中的应用。方法 :本研究选用 3个属的细菌 :Klebsiel la ,Neisseria以及Vibrio。为得到完整的基因组DNA ,整个提取的操作过程都在琼脂糖凝胶中进行。经proteinaseK除蛋白后 ,基因组DNA置于TE缓冲液中待用。内切酶Ⅰ CeuⅠ是本研究中主要的工具酶。酶切后的基因组DNA经脉冲场电泳分离。结果 :Klebsiella的所有菌株 (两个种 ,即Klebsiellapneumoniae和Klebsiellaoxytoca)都有一个共同的基因组结构 ,而这一“Klebsiella基因组结构”与Escherichiacoli或Salmonella的基因组结构很相似 ,其主要不同之处有 3点 :(1)有 8个rrn操纵子 (Escherichiacoli和Salmonella各有 7个 ) ;(2 )基因组较大 ;(3)Ⅰ CeuⅠE片段易位。以往学术界认为Neisseria具有高度易变和多态的基因组结构。而我们的研究结果表明 ,Neisseria的基本基因组结构是相对稳定的。我们比较研究了 30 0株N .meningitidis,结果仅仅发现了少数几个不同的基因组结构。其中Z2 4 91株代表 5 0 %的群体 (Ⅰ型基因组结构 ) ,MC5 8株代表 2 0 %的群体 (Ⅱ型基因组结构 ) ,N0 4 5株代表 17%的群体 (Ⅲ型基因组结构 )。已知Z2 4 91和MC5 8代表不同的种系群 。

体外连接法快速高效构建表达β-半乳糖苷酶的重组腺病毒载体

目的:采用体外连接法构建和制备重组腺病毒Adeno-X-LacZ,为构建具有治疗价值的重组腺病毒载体奠定基础。方法:PI-SceⅠ/I-CeuⅠ酶切pShuttle2-LacZ穿梭质粒,回收4.6 kb的LacZ基因表达盒,与经过相同酶切的Adeno-X病毒DNA连接,连接产物用SwaⅠ酶切,最终产物转化DH5α。重组质粒用PCR法和PI-SceⅠ/I-CeuⅠ酶切鉴定。pAdeno-X-LacZ用PacⅠ线性化后,用脂质体介导其转染至AD293细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒,采用CsC l密度梯度离心法纯化重组腺病毒Adeno-X-LacZ。采用X-gal染色观察Adeno-X-LacZ在AD293细胞内包装和HVSMC表达情况。结果:PCR扩增可见312 bp特异性条带,PI-SceⅠ/I-CeuⅠ酶切重组质粒后释放出4.6 kb LacZ基因表达盒。X-gal染色证实了在AD293细胞内成功扩增包装出重组腺病毒Ad-eno-X-LacZ和LacZ基因在HVSMC中得到有效表达。结论:体外连接法是一种快速、简便、高效的构建重组腺病毒质粒的方法,本研究为构建具有治疗价值的重组腺病毒奠定了基础,Adeno-X-LacZ为研究腺病毒介导的基因转移提供了一良好的对照载体。

鸡沙门菌基因组物理图

目的建立鸡沙门菌287/91株的基因组物理图,与鸡沙门菌SARB21以及鼠伤寒沙门菌LT2的基因组物理图进行比较,以找出同种细菌不同菌株之间以及近缘菌之间基因组的差异,进而探讨细菌基因组进化的一般规律。方法细菌基因组DNA用XhaⅠ、AvrⅡ和Ⅰ-CeuⅠ进行酶切,再用脉冲场凝胶电泳方法分离出DNA片段,通过Tn10插入等方法对这些片段进行精确排列。结果构建了鸡沙门菌287/91株的基因组物理图。与SARB21株的基因组物理图比较发现,二者相对于鼠伤寒沙门菌LT2有相似的插入和缺失片段。结论鸡沙门菌287/91株与SARB21株基因组很相似,其主要差异在于rrn操纵子DNA介导的同源性重组发生的具体部位不同,导致了基因组DNA片段的不同排列,因而造成二者不同的基因组结构。