P16、△NP63在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及相关性研究

目的探讨P16、△NP63蛋白在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达、意义及其相关性。方法采用免疫组化SP法检测42例宫颈鳞癌,90例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN),25例慢性宫颈炎组织石蜡切片中P16、△NP63蛋白的表达。结果(1)从慢性宫颈炎组织、CIN到宫颈鳞癌,P16、△NP63的表达均递增,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)P16蛋白表达与宫颈癌患者的年龄、临床分期及癌细胞分化程度无关,△NP63蛋白表达与宫颈癌患者年龄、临床分期无关,与癌细胞分化程度呈负相关,在分化程度差的肿瘤组织中表达增高(P<0.05)。(3)在CIN和宫颈鳞癌中,P16与△NP63蛋白表达呈正相关(rs=0.6226,P<0.01)。结论P16、△NP63参与了CIN、宫颈鳞癌的发生、发展,其免疫组化检测对宫颈癌的早期诊断有参考价值。

ΔNp63 mRNA在膀胱癌组织中的表达及意义

目的探讨ΔNp63 mRNA在膀胱移行细胞癌(TCCB)中的表达及意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测48例TCCB患者肿瘤组织、10例对照膀胱组织ΔNp63 mRNA的表达,并分析ΔNp63 mRNA表达与TCCB临床分期、病理分级等的关系。结果48例TCCB组织中ΔNp63 mRNA表达阳性率为75.0%(36/48),对照组膀胱组织中ΔNp63蛋白表达阳性率为0.0%(0/10),TCCB组ΔNp63 mRNA表达阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同临床分期肿瘤组织中ΔNp63 mRNA表达阳性率、各组间ΔNp63 mRNA表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。不同病理分级肿瘤组织中ΔNp63 mRNA表达阳性率、各组间ΔNp63mRNA表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论TCCB组ΔNp63mRNA表达水平均明显高于对照组,提示ΔNp63与TCCB的发生密切相关,其可能为TCCB发生的重要促进因素,ΔNp63 mR-NA表达水平和TCCB的临床分期、病理分级没有相关性,故ΔNp63在TCCB进展中的作用有待进一步研究。

△Np63基因沉默对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的探讨癌基因△Np63对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法通过将△Np63特异性短发夹RNA(△Np63-shRNA)和非特异性短发夹RNA(Control-shRNA)转染膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinom a of bladder,TCCB)5637细胞,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分别检测△Np63、p27kip1、p57kip2mRNA和蛋白的表达水平,WST-1法检测细胞增殖活性,利用流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果特异性的△Np63-shRNA能够有效地沉默△Np63并上调p27kip1和p57kip2的基因和蛋白水平,转染△Np63-shRNA的5637细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05),且明显促进了细胞的凋亡(P<0.05)。结论靶向△Np63基因的shRNA片段可以有效的抑制人膀胱癌5637细胞的增殖并促进其凋亡,其可能的机制是通过上调p27kip1和p57kip2的表达实现的。

子宫颈鳞状细胞癌中△Np63α、DPC4/Smad4和P21的表达及其临床意义

目的研究△Np63α、DPC4/Smad4和P21在子宫颈鳞状细胞癌中的表达情况。方法采用免疫组织化学ElivisionTMPlus法检测100例子宫颈鳞状细胞癌组织、40例子宫颈上皮内瘤变(CIN)和40例正常子宫颈组织中△Np63α、DPC4/Smad4和P21蛋白的表达情况。分析三者在子宫颈鳞状细胞癌的发生发展中的相互作用,及其与子宫颈鳞状细胞癌发生、发展和预后的关系。结果从正常子宫颈组织到子宫颈上皮内瘤变及子宫颈鳞状细胞癌,△Np63α和DPC4/Smad4的表达逐渐下降,P21的表达逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01);同时,三者的表达均与肿瘤的分化程度、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.01)。另外,△Np63α与DPC4/Smad4的表达呈正相关关系(r=0.581,P<0.05);而DPC4/Smad4和△Np63α的表达与P21的表达均成负相关(r=-0.449,r=-0.254,P均<0.05)。同时,生存分析显示:△Np63α和DPC4/Smad4阳性表达组5年生存率显著高于其阴性表达组,差异有显著性(P<0.001);而P21阳性表达组则显著低于阴性表达组,差异有显著性(P<0.05)。结论△Np63α、DPC4/Smad4和P21的表达与子宫颈癌组织的发生发展、转移和预后等均有关;联合检测三者的表达情况,对子宫颈鳞状细胞癌的进展及预后判断有重要意义。

宫颈癌前病变中ΔNP63与HPV16 E7表达的研究

目的:研究宫颈上皮内瘤变中ANP63和HPV16 E7 mRNA的表达情况,寻找用于临床评估CIN病变进展趋势的生物学标志物。方法:收集临床71例薄层液基细胞标本,采用SP免疫组化法检测细胞中ANP63的蛋白表达,RT-PCR法检测残留标本中HPV16 E7的mRNA转录情况。结果:1．ANP63定位于异常鳞状上皮细胞和腺细胞,在CIN中表达高于炎症组(P< 0．05);2．HPV16 E7在CIN中表达明显高于炎症组(P<0．05);3．CIN中ANP63与HPV16 E7的检测结果具有较好的一致性。结论:ANP63可作为CIN的生物学标志物辅助细胞学筛查;ANP63可间接反映HPV16 E7的转录情况,有利于临床评估高危型病毒HPV16的致瘤能力。

喉鳞癌中ΔNp63和ΔNp73的表达及临床意义

目的通过研究喉鳞癌中ΔNp63和ΔNp73的表达及与患者各临床病理参数的关系,探讨其在喉鳞癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化二步法,检测40例喉鳞癌及相应癌旁组织中ΔNp63和ΔNp73的表达情况。结果ΔNp63和ΔNp73在喉鳞癌组织中的阳性表达率分别为85%(34/40)和82.5%(33/40)。喉癌组织中ΔNp63和ΔNp73的表达显著高于相应癌旁组织(P<0.001)。ΔNp63在喉癌组织中的表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05);而与患者性别、临床分期、有无淋巴结转移等无关。ΔNp73在喉癌组织中的表达与患者性别、肿瘤分化程度、临床分期、有无淋巴结转移等无关(P>0.05)。喉癌组织中ΔNp63和ΔNp73的表达无显著相关性(r=0.16,P>0.05)。结论ΔNp63和ΔNp73可能作为癌基因维持肿瘤细胞干细胞样的增殖特性,在喉鳞癌的发生、发展中发挥重要作用,并可能成为喉癌成瘤机制研究中的重要靶点。

人膀胱癌荷瘤鼠中shRNA沉默ΔNp63基因对肿瘤的抑制和cyclin D_1表达的影响

目的利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默ΔNp63基因的表达,研究其对人膀胱癌裸鼠皮下移植模型的抑瘤作用,同时检测ΔNp63基因被抑制后对细胞周期素D1(cyclin D1)表达的影响。方法建立人膀胱癌裸鼠皮下移植模型,构建ΔNp63基因特异性shRNA(short hairpin)表达质粒,将表达质粒转染荷瘤鼠瘤体。将符合实验条件的15只裸鼠分为3组:ΔNp63-shRNA组、Control-shRNA组与生理盐水组,每组5只。观察各组肿瘤生长情况、瘤组织超微结构的改变,检测ΔNp63基因和蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)和cyclin D1蛋白表达的变化。结果转染质粒8周后,ΔNp63-shRNA组与生理盐水组瘤体积有显著性差异(P<0.01),抑瘤率为74.44%,Control-shRNA组与生理盐水组体积无显著性差异(P>0.05)。病理结果显示ΔNp63-shRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞核分裂象减少,可见大量肿瘤细胞坏死和凋亡、炎症细胞浸润。RT-PCR结果显示ΔNp63-shRNA组ΔNp63基因表达降低。免疫组化结果显示ΔNp63、PCNA、cyc-lin D1蛋白表达均降低。结论ΔNp63特异性shRNA质粒表达载体沉默ΔNp63基因后,可显著抑制人膀胱癌裸鼠肿瘤的生长,ΔNp63可能通过抑制cyclin D的表达而抑制肿瘤的细胞增殖。

P16^(INK4A)、ΔNP63与Brn-3a作为宫颈上皮内瘤变标志物的研究

目的:探讨肿瘤抑制基因P16INK4A、凋亡相关基因异构体ΔNP63和细胞转录因子Brn-3a在各级宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的TCT标本中的表达及其作为CIN生物标志物的可行性和临床意义。方法:利用SP免疫组化法检测71例TCT标本中P16INK4A和ΔNP63的表达;用RT-PCR法检测各标本中Brn-3a mRNA的转录,分析它们与CIN病理分级的关系。结果:各级病理学诊断中P16INK4A与ΔNP63阳性率分别为炎症(4.76%/4.76%),CINⅠ(89.47%/84.21%),CINⅡ(100%/100%),CINⅢ(100%/100%),各级CIN与炎症的P16INK4A和ΔNP63阳性率之间,差异有极显著性(P<0.001),各级CIN的阳性率之间,差异无统计学意义(P>0.05)。Brn-3a的表达阳性率分别为炎症(0%),CINⅠ(5.26%),CINⅡ(50%),CINⅢ(90.48%),CINⅢ的Brn-3a阳性率明显高于与炎症、CINⅠ组(P<0.01),炎症与CINⅠ、CINⅡ与CINⅢ比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:P16INK4A、P63与Brn-3a可作为CIN的标志物,辅助细胞学筛查,Brn-3a可能成为间接反映CIN发展的生物学指标。

△NP63和HSP27在宫颈癌的表达及意义

目的 探讨宫颈癌中△NP63和HSP27的表达及意义。方法 应用免疫组化SP法检测20例慢性宫颈炎上皮、30例宫颈上皮不典型增生和50例宫颈癌中△NP63和HSP27蛋白的表达。同时对35例宫颈鳞状上皮细胞癌进行mRNA杂交。结果 宫颈癌中△NF63蛋白表达率76％;HSP27蛋白表达率74％;表达率及强度明显高于慢性宫颈炎及轻、中度不典型增生上皮(P<0.05),与重度不典型增生差异不显著(P>0.05)。宫颈腺癌中△NP63无表达。HSP27表达率低(1/3)。在宫颈鳞状细胞中△NP63蛋白和mRNA的表达率及强度,低分化高于中、高分化,与临床分期密切相关;HSP27蛋白和mRNA的表达率及强度,中、高分化高于低分化,与临床分期无相关性。结论△NP63、HSP27可能与宫颈鳞状细胞癌的发生及预后有关。

ΔNp63在早孕小鼠子宫内膜表达规律的研究

目的：初步探讨p53基因家族新成员——截断型 p63(ΔNp63)在小鼠生殖中的作用。方法：收集动情周期各期和早孕2 d、3 d、4 d、5 d小鼠子宫内膜,共8组,每组10只小鼠。运用RT-PCR技术检测ΔNp63 mRNA的表达规律；免疫组织化学SP法检测小鼠子宫内膜中ΔNp63蛋白的表达情况。结果：1)RT-PCR：动情前期ΔNp63 mRNA明显高表达；动情间期和动情期表达减弱；动情后期表达极低；早孕期间小鼠子宫内膜ΔNp63 mRNA表达较未孕组高,并逐渐增强,孕5 d达高峰。2)免疫组织化学：ΔNp63蛋白在间质细胞胞浆表达,表达规律基本上与mRNA水平的表达规律相似。结论：ΔNp63在动情前期高表达,可能与子宫内膜间质细胞增殖、生长有关；在早孕期间高表达,说明它很可能进一步促进间质细胞分裂,顺利转化成蜕膜细胞,进而有利于提高窗口期子宫的容受性。

ΔNp63在胃癌组织中的表达及其与生物学行为的关系

采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测36例胃癌及36例正常胃组织中ΔNp63 mRNA的表达情况,分析其与胃癌患者各临床病理指标的关系。结果ΔNp63 mRNA在胃癌组织中的阳性表达率及表达水平均显著高于正常胃组织(P均<0.05)。在中、低分化胃癌组织中的阳性表达率和表达水平也显著高于高分化胃癌组织(P均<0.05)。认为在胃癌组织中存在ΔNp63的过表达,可能与胃癌的发生、发展有关。

ΔNp63蛋白在骨肉瘤中表达的意义

目的 :研究ΔNp6 3蛋白在骨肉瘤中的表达 ,探讨其在骨肉瘤发生、发展中的可能作用。方法 :应用免疫组化S P法检测 2 8例骨肉瘤石蜡标本中ΔNp6 3蛋白的表达情况。 结果 :在 2 8例骨肉瘤中仅有 1例高分化骨肉瘤出现弱阳性反应 ,还有 1例骨肉瘤ΔNp6 3表达为阴性 ,二者癌旁组织呈阳性反应 (+)。对照组的 15例骨软骨瘤中 ,共有 3例阳性 ,其中 2例为 (+) ,另 1例为强阳性 (+++)。结论 :ΔNp6 3在骨软骨瘤和骨肉瘤的癌旁正常组织中呈阳性或强阳性反应 ,推测 p6 3可能具有肿瘤抑制基因功能。

△Np63在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨p53基因家族新成员截短型p63(△Np63)在食管鳞癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR法检测50例食管鳞癌及50例正常食管组织中△Np63 mRNA的表达情况,分析其与食管鳞癌患者各临床病理指标的关系。结果△Np63 mRNA在食管鳞癌组织中的阳性表达率(74.0%)及表达水平(1.036±0.157)均显著高于正常食管组织(40.0%,0.954±0.110),并且其在食管鳞癌组织中的阳性表达率及表达水平与分化程度和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论在食管鳞癌组织中存在△Np63的过表达,并且这种表达可能与食管鳞癌的浸润、转移有关。

ΔNp63基因对TCCB 5637细胞侵袭作用的影响

目的:研究ΔNp63基因对TCCB5637细胞侵袭功能的影响。方法:针对ΔNp63基因的不同靶点设计并化学合成具有阳性转染率的siRNA,用脂质体法转染TCCB 5637细胞,并根据转染的方式将实验分组为:空白对照组、空载体组、阴性质粒组和干扰质粒组;采用实时荧光定量PCR、Western blot检测各组中ΔNp63的mRNA、蛋白的表达;采用激光共聚焦显微镜对转染干扰质粒前后的ΔNp63蛋白进行定位;采用细胞计数法及MTT法来检测ΔNp63基因对TCCB 5637细胞侵袭能力和异质粘附能力的影响。结果:ΔNp63蛋白定位于TCCB 5637细胞的细胞核区域;与空白对照组比较,空载体组和阴性质粒组TCCB5637细胞中ΔNp63的mRNA、蛋白的表达水平无明显变化(P>0.05);平均细胞穿越数和异质粘附性无明显变化(P>0.05);而干扰质粒组TCCB5637细胞中ΔNp63的mRNA、蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),平均细胞穿越数明显增加(P<0.05),异质粘附性明显下降(P<0.05)。结论:ΔNp63基因能明显促进TCCB5637细胞的侵袭能力。

食管鳞癌△Np63基因的检测

目的: 探讨△Np63基因作为食管鳞癌检测指标的可能性. 方法: 50例新鲜食管鳞癌组织,未经放疗或化疗,癌旁组织15例,用免疫组化和RT PCR方法检测组织和外周血△Np63表达情况. 食管癌患者外周血标本21例,用RT PCR方法检测了△Np63mRNA表达情况,胃腺癌12例和10例健康人外周血作为对照. 结果: 食管鳞癌组织△Np63蛋白和mRNA表达明显高于癌旁组织,分别是96%和60% (P<0. 01). 食管癌21例外周血检测中△Np63 mRNA阳性率38%,而胃腺癌和健康人外周血中未见表达. 结论: 食管鳞癌的发生和△Np63过度表达有关,△Np63mRNA外周血检测可以作为一个食管鳞癌的肿瘤标志物.

结肠癌患者ΔNp63和NF-κB的表达及意义

目的探讨结肠癌患者N末端截短型p63基因(ΔNp63)和核转录因子κB(NF-κB)的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测结肠癌患者ΔNp63和NF-κB的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)和Western blot检测ΔNp63和NF-κB信使核糖核酸(m RNA)和蛋白的表达;采用半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性检测试剂盒检测凋亡蛋白Caspase-3表达。结果与对照组比较,结肠癌患者ΔNp63蛋白表达升高35.57%,NF-κB蛋白表达升高58.93%,差异有统计学意义(P<0.05);结肠癌患者ΔNp63和NF-κB m RNA和蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);结肠癌患者Caspase-3活性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结肠癌患者ΔNp63和NF-κB呈过度表达状态;ΔNp63和NF-κB的过表达在结肠癌发生、发展机制中可能起到重要作用。

皮肤良、恶性增殖性疾病中△Np63的检测

目的观察△Np63在皮肤良、恶性增殖性疾病中的表达,并探讨其意义。方法应用免疫组化SP法检测30例脂溢性角化症、30例日光性角化病、30例基底细胞癌及10例正常皮肤组织中△Np63的表达,并采用Image-Pro Plus6.0(IPP)图像分析软件定量测定每个视野中阳性表达的平均光密度值。结果△Np63在脂溢性角化症组表达的平均光密度为0.0391±0.0169,日光性角化病组为0.0262±0.0184;基底细胞癌组为0.0498±0.0222;正常皮肤组为0.0056±0.0019。△Np63在各组的阳性表达差异有统计学意义(P<0.05),它除在脂溢性角化症及基底细胞癌组的表达差异无统计学意义(P>0.05)外,余组内两两比较的差异也均有统计学意义(P均<0.05);但是它在不同部位的脂溢性角化症、日光性角化病和基底细胞癌中的表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论再次印证了△Np63是未分化上皮来源肿瘤的标记物。

子宫内膜、正常早孕和自然流产蜕膜组织中△Np63的表达

目的观察△Np63蛋白在自然流产蜕膜组织中的表达,探讨△Np63在胚泡植入和早期妊娠维持中的作用。方法收集自然流产的蜕膜27例组织(其中胚胎停止发育23例、习惯性流产1例及不全流产3例),正常早孕蜕膜66例,非妊娠期子宫内膜组织57例(其中增生期33例,分泌期24例),用SP免疫组化染色法观察△Np63的表达。结果△Np63广泛表达于腺上皮和间质细胞中。增生期和分泌期子宫内膜中△Np63主要表达在腺上皮,蜕膜组织中△Np63在间质蜕膜细胞中的有较强的表达。流产组△Np63蛋白阳性率为55.6%,明显低于增生期的90.9%、分泌期的87.5%及正常早孕组的86.4%(P<0.05)。△Np63高表达率在分泌期组及流产组分别为16.7%和11.2%,明显低于增生期的63.6%和正常早孕组的57.6%(P<0.01)。结论△Np63可能参与子宫内膜的生理周期变化,并与子宫内膜向早孕蜕膜组织转化及维持早孕关系密切。

p40(△Np63)和p63在乳腺肌上皮细胞诊断中的价值

目的研究p40(△Np63)在不同乳腺病变中肌上皮细胞的表达情况,探讨p40(△Np63)在乳腺肌上皮细胞诊断中的价值。方法应用免疫组化En Vision法检测正常乳腺组织、腺病、普通性导管增生、非典型导管增生、导管原位癌及浸润性导管癌中p40(△Np63)和p63的表达,并比较两者间的差异。结果 p40(△Np63)和p63均表达于正常乳腺组织、腺病、普通性导管增生、非典型导管增生和导管原位癌中的肌上皮细胞,p40(△Np63)和p63在这些病变的肌上皮细胞的阳性率相同,差异不显著(P>0.05);在浸润性导管癌中均未见p40(△Np63)和p63的表达。仅p40(△NP63)的表达强度略高于p63,但有轻度的背景染色。结论 p40(△Np63)可作为诊断乳腺肌上皮细胞的标记物,与p63具有相同的染色效果。

结肠癌中高表达delta Np63基因和蛋白的临床意义

了解结肠癌组织中delta Np63基因和蛋白的表达情况,探讨其表达变化的临床价值和意义.采用RT-PCR(reverse transcriptase-polymerase chain reaction)的方法检测delta Np63基因的表达,Western blot检测deltaNp63蛋白的表达.结肠癌组织中delta Np63基因和蛋白的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05).并且与肿瘤病理分级和临床分期密切相关(P<0.05).这一结果提示delta Np63基因可能在结肠癌疾病进展中发挥重要作用.