子宫颈鳞状细胞癌中△Np63α、DPC4/Smad4和P21的表达及其临床意义

目的研究△Np63α、DPC4/Smad4和P21在子宫颈鳞状细胞癌中的表达情况。方法采用免疫组织化学ElivisionTMPlus法检测100例子宫颈鳞状细胞癌组织、40例子宫颈上皮内瘤变(CIN)和40例正常子宫颈组织中△Np63α、DPC4/Smad4和P21蛋白的表达情况。分析三者在子宫颈鳞状细胞癌的发生发展中的相互作用,及其与子宫颈鳞状细胞癌发生、发展和预后的关系。结果从正常子宫颈组织到子宫颈上皮内瘤变及子宫颈鳞状细胞癌,△Np63α和DPC4/Smad4的表达逐渐下降,P21的表达逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01);同时,三者的表达均与肿瘤的分化程度、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.01)。另外,△Np63α与DPC4/Smad4的表达呈正相关关系(r=0.581,P<0.05);而DPC4/Smad4和△Np63α的表达与P21的表达均成负相关(r=-0.449,r=-0.254,P均<0.05)。同时,生存分析显示:△Np63α和DPC4/Smad4阳性表达组5年生存率显著高于其阴性表达组,差异有显著性(P<0.001);而P21阳性表达组则显著低于阴性表达组,差异有显著性(P<0.05)。结论△Np63α、DPC4/Smad4和P21的表达与子宫颈癌组织的发生发展、转移和预后等均有关;联合检测三者的表达情况,对子宫颈鳞状细胞癌的进展及预后判断有重要意义。

△Np63α在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨原癌基因△Np63α在食管鳞癌中的表达及与临床预后的相关性。方法应用免疫组织化学SABC法检测304例食管鳞癌组织中△Np63α表达水平及与临床病理的相关性。结果食管鳞癌组织中△Np63α阳性表达为40％（122／304例）；与癌旁组织比较，差异有统计学意义（P=0．034）。△Np63α表达水平与淋巴结转移、分化程度、浸润深度、TNM分期、VEGF表达均明显相关（P=0．001）。多因素统计分析提示△Np63α阳性是食管鳞癌预后的独立危险因素（P=0．001）。结论△Np63α阳性表达与肿瘤的复发、转移密切相关。

P16、△NP63在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及相关性研究

目的探讨P16、△NP63蛋白在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达、意义及其相关性。方法采用免疫组化SP法检测42例宫颈鳞癌,90例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN),25例慢性宫颈炎组织石蜡切片中P16、△NP63蛋白的表达。结果(1)从慢性宫颈炎组织、CIN到宫颈鳞癌,P16、△NP63的表达均递增,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)P16蛋白表达与宫颈癌患者的年龄、临床分期及癌细胞分化程度无关,△NP63蛋白表达与宫颈癌患者年龄、临床分期无关,与癌细胞分化程度呈负相关,在分化程度差的肿瘤组织中表达增高(P<0.05)。(3)在CIN和宫颈鳞癌中,P16与△NP63蛋白表达呈正相关(rs=0.6226,P<0.01)。结论P16、△NP63参与了CIN、宫颈鳞癌的发生、发展,其免疫组化检测对宫颈癌的早期诊断有参考价值。

ΔNp63 mRNA在膀胱癌组织中的表达及意义

目的探讨ΔNp63 mRNA在膀胱移行细胞癌(TCCB)中的表达及意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测48例TCCB患者肿瘤组织、10例对照膀胱组织ΔNp63 mRNA的表达,并分析ΔNp63 mRNA表达与TCCB临床分期、病理分级等的关系。结果48例TCCB组织中ΔNp63 mRNA表达阳性率为75.0%(36/48),对照组膀胱组织中ΔNp63蛋白表达阳性率为0.0%(0/10),TCCB组ΔNp63 mRNA表达阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同临床分期肿瘤组织中ΔNp63 mRNA表达阳性率、各组间ΔNp63 mRNA表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。不同病理分级肿瘤组织中ΔNp63 mRNA表达阳性率、各组间ΔNp63mRNA表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论TCCB组ΔNp63mRNA表达水平均明显高于对照组,提示ΔNp63与TCCB的发生密切相关,其可能为TCCB发生的重要促进因素,ΔNp63 mR-NA表达水平和TCCB的临床分期、病理分级没有相关性,故ΔNp63在TCCB进展中的作用有待进一步研究。

宫颈癌前病变中ΔNP63与HPV16 E7表达的研究

目的:研究宫颈上皮内瘤变中ANP63和HPV16 E7 mRNA的表达情况,寻找用于临床评估CIN病变进展趋势的生物学标志物。方法:收集临床71例薄层液基细胞标本,采用SP免疫组化法检测细胞中ANP63的蛋白表达,RT-PCR法检测残留标本中HPV16 E7的mRNA转录情况。结果:1．ANP63定位于异常鳞状上皮细胞和腺细胞,在CIN中表达高于炎症组(P< 0．05);2．HPV16 E7在CIN中表达明显高于炎症组(P<0．05);3．CIN中ANP63与HPV16 E7的检测结果具有较好的一致性。结论:ANP63可作为CIN的生物学标志物辅助细胞学筛查;ANP63可间接反映HPV16 E7的转录情况,有利于临床评估高危型病毒HPV16的致瘤能力。

△Np63基因沉默对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的探讨癌基因△Np63对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法通过将△Np63特异性短发夹RNA(△Np63-shRNA)和非特异性短发夹RNA(Control-shRNA)转染膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinom a of bladder,TCCB)5637细胞,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分别检测△Np63、p27kip1、p57kip2mRNA和蛋白的表达水平,WST-1法检测细胞增殖活性,利用流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果特异性的△Np63-shRNA能够有效地沉默△Np63并上调p27kip1和p57kip2的基因和蛋白水平,转染△Np63-shRNA的5637细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05),且明显促进了细胞的凋亡(P<0.05)。结论靶向△Np63基因的shRNA片段可以有效的抑制人膀胱癌5637细胞的增殖并促进其凋亡,其可能的机制是通过上调p27kip1和p57kip2的表达实现的。

喉鳞癌中ΔNp63和ΔNp73的表达及临床意义

目的通过研究喉鳞癌中ΔNp63和ΔNp73的表达及与患者各临床病理参数的关系,探讨其在喉鳞癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化二步法,检测40例喉鳞癌及相应癌旁组织中ΔNp63和ΔNp73的表达情况。结果ΔNp63和ΔNp73在喉鳞癌组织中的阳性表达率分别为85%(34/40)和82.5%(33/40)。喉癌组织中ΔNp63和ΔNp73的表达显著高于相应癌旁组织(P<0.001)。ΔNp63在喉癌组织中的表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05);而与患者性别、临床分期、有无淋巴结转移等无关。ΔNp73在喉癌组织中的表达与患者性别、肿瘤分化程度、临床分期、有无淋巴结转移等无关(P>0.05)。喉癌组织中ΔNp63和ΔNp73的表达无显著相关性(r=0.16,P>0.05)。结论ΔNp63和ΔNp73可能作为癌基因维持肿瘤细胞干细胞样的增殖特性,在喉鳞癌的发生、发展中发挥重要作用,并可能成为喉癌成瘤机制研究中的重要靶点。

人膀胱癌荷瘤鼠中shRNA沉默ΔNp63基因对肿瘤的抑制和cyclin D_1表达的影响

目的利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默ΔNp63基因的表达,研究其对人膀胱癌裸鼠皮下移植模型的抑瘤作用,同时检测ΔNp63基因被抑制后对细胞周期素D1(cyclin D1)表达的影响。方法建立人膀胱癌裸鼠皮下移植模型,构建ΔNp63基因特异性shRNA(short hairpin)表达质粒,将表达质粒转染荷瘤鼠瘤体。将符合实验条件的15只裸鼠分为3组:ΔNp63-shRNA组、Control-shRNA组与生理盐水组,每组5只。观察各组肿瘤生长情况、瘤组织超微结构的改变,检测ΔNp63基因和蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)和cyclin D1蛋白表达的变化。结果转染质粒8周后,ΔNp63-shRNA组与生理盐水组瘤体积有显著性差异(P<0.01),抑瘤率为74.44%,Control-shRNA组与生理盐水组体积无显著性差异(P>0.05)。病理结果显示ΔNp63-shRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞核分裂象减少,可见大量肿瘤细胞坏死和凋亡、炎症细胞浸润。RT-PCR结果显示ΔNp63-shRNA组ΔNp63基因表达降低。免疫组化结果显示ΔNp63、PCNA、cyc-lin D1蛋白表达均降低。结论ΔNp63特异性shRNA质粒表达载体沉默ΔNp63基因后,可显著抑制人膀胱癌裸鼠肿瘤的生长,ΔNp63可能通过抑制cyclin D的表达而抑制肿瘤的细胞增殖。

ΔNp63蛋白在骨肉瘤中表达的意义

目的 :研究ΔNp6 3蛋白在骨肉瘤中的表达 ,探讨其在骨肉瘤发生、发展中的可能作用。方法 :应用免疫组化S P法检测 2 8例骨肉瘤石蜡标本中ΔNp6 3蛋白的表达情况。 结果 :在 2 8例骨肉瘤中仅有 1例高分化骨肉瘤出现弱阳性反应 ,还有 1例骨肉瘤ΔNp6 3表达为阴性 ,二者癌旁组织呈阳性反应 (+)。对照组的 15例骨软骨瘤中 ,共有 3例阳性 ,其中 2例为 (+) ,另 1例为强阳性 (+++)。结论 :ΔNp6 3在骨软骨瘤和骨肉瘤的癌旁正常组织中呈阳性或强阳性反应 ,推测 p6 3可能具有肿瘤抑制基因功能。

ΔNp63在早孕小鼠子宫内膜表达规律的研究

目的：初步探讨p53基因家族新成员——截断型 p63(ΔNp63)在小鼠生殖中的作用。方法：收集动情周期各期和早孕2 d、3 d、4 d、5 d小鼠子宫内膜,共8组,每组10只小鼠。运用RT-PCR技术检测ΔNp63 mRNA的表达规律；免疫组织化学SP法检测小鼠子宫内膜中ΔNp63蛋白的表达情况。结果：1)RT-PCR：动情前期ΔNp63 mRNA明显高表达；动情间期和动情期表达减弱；动情后期表达极低；早孕期间小鼠子宫内膜ΔNp63 mRNA表达较未孕组高,并逐渐增强,孕5 d达高峰。2)免疫组织化学：ΔNp63蛋白在间质细胞胞浆表达,表达规律基本上与mRNA水平的表达规律相似。结论：ΔNp63在动情前期高表达,可能与子宫内膜间质细胞增殖、生长有关；在早孕期间高表达,说明它很可能进一步促进间质细胞分裂,顺利转化成蜕膜细胞,进而有利于提高窗口期子宫的容受性。

ΔNp63在胃癌组织中的表达及其与生物学行为的关系

采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测36例胃癌及36例正常胃组织中ΔNp63 mRNA的表达情况,分析其与胃癌患者各临床病理指标的关系。结果ΔNp63 mRNA在胃癌组织中的阳性表达率及表达水平均显著高于正常胃组织(P均<0.05)。在中、低分化胃癌组织中的阳性表达率和表达水平也显著高于高分化胃癌组织(P均<0.05)。认为在胃癌组织中存在ΔNp63的过表达,可能与胃癌的发生、发展有关。

△Np63在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨p53基因家族新成员截短型p63(△Np63)在食管鳞癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR法检测50例食管鳞癌及50例正常食管组织中△Np63 mRNA的表达情况,分析其与食管鳞癌患者各临床病理指标的关系。结果△Np63 mRNA在食管鳞癌组织中的阳性表达率(74.0%)及表达水平(1.036±0.157)均显著高于正常食管组织(40.0%,0.954±0.110),并且其在食管鳞癌组织中的阳性表达率及表达水平与分化程度和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论在食管鳞癌组织中存在△Np63的过表达,并且这种表达可能与食管鳞癌的浸润、转移有关。

p40(△Np63)和p63在乳腺肌上皮细胞诊断中的价值

目的研究p40(△Np63)在不同乳腺病变中肌上皮细胞的表达情况,探讨p40(△Np63)在乳腺肌上皮细胞诊断中的价值。方法应用免疫组化En Vision法检测正常乳腺组织、腺病、普通性导管增生、非典型导管增生、导管原位癌及浸润性导管癌中p40(△Np63)和p63的表达,并比较两者间的差异。结果 p40(△Np63)和p63均表达于正常乳腺组织、腺病、普通性导管增生、非典型导管增生和导管原位癌中的肌上皮细胞,p40(△Np63)和p63在这些病变的肌上皮细胞的阳性率相同,差异不显著(P>0.05);在浸润性导管癌中均未见p40(△Np63)和p63的表达。仅p40(△NP63)的表达强度略高于p63,但有轻度的背景染色。结论 p40(△Np63)可作为诊断乳腺肌上皮细胞的标记物,与p63具有相同的染色效果。

子宫内膜、正常早孕和自然流产蜕膜组织中△Np63的表达

目的观察△Np63蛋白在自然流产蜕膜组织中的表达,探讨△Np63在胚泡植入和早期妊娠维持中的作用。方法收集自然流产的蜕膜27例组织(其中胚胎停止发育23例、习惯性流产1例及不全流产3例),正常早孕蜕膜66例,非妊娠期子宫内膜组织57例(其中增生期33例,分泌期24例),用SP免疫组化染色法观察△Np63的表达。结果△Np63广泛表达于腺上皮和间质细胞中。增生期和分泌期子宫内膜中△Np63主要表达在腺上皮,蜕膜组织中△Np63在间质蜕膜细胞中的有较强的表达。流产组△Np63蛋白阳性率为55.6%,明显低于增生期的90.9%、分泌期的87.5%及正常早孕组的86.4%(P<0.05)。△Np63高表达率在分泌期组及流产组分别为16.7%和11.2%,明显低于增生期的63.6%和正常早孕组的57.6%(P<0.01)。结论△Np63可能参与子宫内膜的生理周期变化,并与子宫内膜向早孕蜕膜组织转化及维持早孕关系密切。

△Np63在喉癌中的表达及意义

目的:探讨喉癌中△Np63蛋白表达及其与临床病理的关系。方法:应用免疫组化SP法检测喉癌和正常喉黏膜中△Np63蛋白的表达。结果:喉癌中△Np63的阳性表达率为75.0%,正常喉粘膜中的阳性表达率为15.0%,组间比较差异具有显著性(P<0.01)。阳性表达率与组织学分级有关(P<0.05)。结论:△Np63可能与喉癌的发生、分化和预后有关,可以作为喉鳞癌和腺癌鉴别诊断的依据。

肾细胞癌组织中△Np63和MDM2蛋白的表达及其临床意义

目的探讨△Np63和MDM2蛋白在肾细胞癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭与转移的关系。方法应用免疫组织化学SP法,检测76例肾细胞癌和14例正常肾组织中△Np63和MDM2蛋白的表达。结果肾癌组织与正常肾组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异有显著性（F=28.34、22.57,q=6.471～12.529,P〈0.05）;不同病理类型的肾癌组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异均无显著性（q=0.093～2.169,P〉0.05）;不同临床分期肾癌组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异有显著性（F=24.59、10.82,q=4.694～11.971,P〈0.05）。△Np63和MDM2蛋白的表达存在着显著相关性（rs=0.513,P〈0.05）。结论△Np63和MDM2蛋白可以作为反映肾细胞癌侵袭和转移潜能的生物学指标。

△Np63(p40)和p63在前列腺基底细胞中的表达

目的探讨△Np63(p40)和p63在前列腺各种病变基底细胞中的表达情况。方法应用免疫组化En Vision法检测良性前列腺增生症、单纯性萎缩、前列腺基底细胞增生、腺病、高级别前列腺上皮内瘤变和前列腺癌中△Np63(p40)和p63的表达。结果细针穿刺活检标本中,p40和p63均表达于所有良性前列腺病变中的基底细胞,p40与p63的表达分布基本一致,但p40染色略强于p63。TURP标本中,p40与p63在所有良性前列腺病变中的基底细胞表达,表达模式与表达强度与细针穿刺活检标本相同。20例前列腺癌中,p40和p63表达均阴性。结论△Np63(p40)也是一种很好的前列腺基底细胞标记物,可与p63联合应用于前列腺癌的诊断和鉴别诊断。

食管癌中△Np63与p33蛋白表达的意义

目的探讨食管癌发生发展过程中△Np63、p33蛋白的表达及其与食管癌病理特征的关系。方法采用免疫组织化学S-P方法检测51例食管癌组织中及其正常黏膜组织中△Np63和p33蛋白的表达。结果1)在食管癌组织及其正常黏膜中△Np63蛋白的表达差异具有统计学意义(P<0.05);2)在食管癌组织及其正常黏膜中p33蛋白的表达差异具有统计学意义(P<0.05);3)△Np63与p33蛋白都与食管癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05),但与食管癌的大体分型无关(P>0.05),二者无明显相关性。结论△Np63蛋白可能参与食管癌的发生、发展,且为食管癌发生的早期事件,△Np63可作为判断肿瘤预后评估和诊断的标志物。p33蛋白与食管癌的发生发展密切相关,可作为肿瘤诊断的标志物。

子宫颈癌细胞中STAT3对ΔNp63α的转录调控机制研究

目的探讨ΔNp63α在子宫颈癌细胞株中的转录调控机制。方法通过生物信息学分析ΔNp63α可能转录调控因子,构建ΔNp63α启动子报告基因质粒,在HEK293T及子宫颈癌细胞中通过报告基因检测ΔNp63α及细胞信号转导与转录激活因子(STAT3)对ΔNp63α转录水平的调控。通过STAT3的激活剂及抑制剂,检测子宫颈癌细胞株中ΔNp63α的蛋白表达情况。通过Western blot检测ΔNp63α的表达水平对子宫颈癌细胞株中P-STAT3的表达影响。结果 (1)成功构建了含ΔNp63α启动子的质粒并通过酶切及测序验证;(2)荧光素酶报告基因检测系统显示ΔNp63α、STAT3均可以激活ΔNp63α启动子的表达;(3)Western blot结果显示:STAT3激活剂及抑制剂分别可以激活或抑制ΔNp63α蛋白的表达水平;(4)Western blot结果显示:ΔNp63α蛋白的过表达或沉默可以抑制子宫颈癌细胞株中STAT3的磷酸化,而对正常细胞株HEK293T没有相应的调控作用。结论子宫颈癌细胞株中STAT3可以正性调控ΔNp63α的表达,而ΔNp63α的表达上调负反馈抑制STAT3的磷酸化,推测ΔNp63α可能通过与STAT3的复杂调控机制影响肿瘤细胞的恶性生物学行为。

膀胱移行细胞癌组织中ΔNp63的表达及意义

目的研究△Np63在膀胱移行细胞癌(TCCB)组织中的表达及意义。方法采用RT-PCR方法对36例膀胱移行细胞癌及10例正常膀胱粘膜上皮组织中△Np63mRNA的表达情况进行检测和比较。结果28例膀胱移行细胞癌组织(77.78%),1例正常膀胱粘膜上皮组织(10.00%)△Np63mRNA呈阳性表达,膀胱移行细胞癌组ΔNp63mRNA的阳性率明显高于正常组,差异有显著性(P<0.01)。ΔNp63mRNA在不同临床分期和病理分级的阳性表达差异无显著性(P>0.05)。结论ΔNp63mRNA在膀胱移行细胞癌中高表达,可能与膀胱移行细胞癌的发生有关。