海马胆碱能神经刺激肽通过活化3型毒蕈碱受体促进INS-1细胞胰岛素释放

目的明确海马胆碱能神经刺激肽(HCNP)对INS-1细胞胰岛素分泌影响,并对其可能作用的毒蕈碱样胆碱能受体途径进行分析。方法 INS-1细胞随机分为3组:对照组、HCNP组、HCNP+佛波酯(PMA)组。对照组给予RPMI 1640液培养,HCNP组给予人工合成HCNP(50 pg/ml)与RPMI 1640液共培养,HCNP+PMA组予人工合成HCNP与RPMI 1640液共培养后,行胰岛素释放前18 h加入PMA(10 nmol/L);应用放射免疫方法检测各组不同浓度葡萄糖培养液中胰岛素含量。实时定量PCR检测对照组、HCNP组HCNP前体蛋白(HCNP-pp)、胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)、3型毒蕈碱样受体(3-typemuscarinic receptor,M3R)基因水平表达情况。结果浓度为3.3 mmol/L葡萄糖,三组间胰岛素含量无明显差异。浓度为5.6mmol/L、16.7 mmol/L葡萄糖作用下,HCNP组胰岛素含量均高于对照、HCNP+PMA组,差异具有统计学意义。HCNP组INS-1细胞HCNP-pp、ChAT、M3R三者mRNA含量均高于对照组,差异具有统计学意义。结论 HCNP通过提高ChAT活性,推测影响乙酰胆碱合成,进一步活化M3R,促进胰岛素分泌,PMA可阻断此作用。

诱导HO-1表达对慢性间歇性缺氧下INS-1细胞凋亡的影响

目的了解诱导HO-1表达对慢性间歇性缺氧下INS-1细胞凋亡的影响。方法通过不同浓度CoPP作用于慢性间歇性缺氧下INS-1细胞,观察胰岛素水平、HO-1及Caspase-3水平,采用RT-PCR检测HO-1、Caspase-3mRNA表达。结果随着CoPP浓度增高,胰岛素、HO-1表达逐渐增高,而Caspase-3逐渐降低,而CoPP浓度达到40umol/L时作用最强(P<0.05)。结论慢性间歇性缺氧下诱导INS-1细胞HO-1表达,抑制凋亡相关蛋白Caspase-3,在一定程度上对细胞起保护作用。