HPLC法同时测定健腰密骨片浸膏粉中5种指标成分

目的:建立健腰密骨片浸膏粉的多成分定量分析方法,为评价浸膏粉中间体的质量提供依据。方法:采用HPLC法,以乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相,梯度洗脱,测定健腰密骨片浸膏粉中5种成分的含量。结果:木兰花碱、丹酚酸B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ5种成分在各自质量浓度范围内呈良好线性关系,r≥0.9997;5种化合物的平均回收率分别为100.47%、104.37%、95.38%、95.93%、96.66%。该方法的专属性、重复性均良好。结论:该分析方法准确、重复性好,可作为健腰密骨片浸膏粉的质量控制方法。

密骨胶囊通过NF-κB和AKT-mTOR信号通路对肌少症的作用机制

目的 利用网络药理学和小鼠C2C12肌细胞体外细胞实验,研究密骨胶囊治疗肌少症的主要活性成分和潜在作用机制。方法 从TCMSP等网络数据库对密骨胶囊的中药成分进行活性成分和主要靶点的收集,并从GeneCards等数据库中对肌少症的疾病基因进行搜索,交集预测密骨胶囊作用于肌少症的靶点和通路。体外实验对小鼠C2C12肌细胞进行培养及诱导分化。用密骨胶囊含药血清预处理细胞,再用TNF-α炎症因子进行刺激,造成肌细胞萎缩。免疫印迹法和聚合酶链式反应法证明其对肌细胞内NF-κB通路和AKT-mTOR通路中相关蛋白表达情况。结果 在密骨胶囊对肌肉的作用中,核心靶点为MTOR、ESR1、EGFR、SIRT1、CTNNB1、VEGFA、ALB、IL6、TP53、TNF、AKT1,可能干预HIF-1、AGE-RAGE、TNF、PI3K-AKT-mTOR等信号通路。密骨胶囊含药血清干预后C2C12肌细胞增粗,降低MuRF1 mRNA表达。免疫印迹实验结果中,密骨胶囊含药血清降低TNF-α刺激的Atrogin-1蛋白量,抑制iκbα磷酸化降解,减少蛋白降解。密骨胶囊含药血清减少TNF-α对p-AKT、p-4EBP1的抑制,增加蛋白合成。结论 通过网络药理学和体外实验验证,密骨胶囊可能对肌少症有防治作用。密骨胶囊抑制NF-κB通路,减缓肌蛋白降解。密骨胶囊激活AKT-mTOR通路,促进肌细胞内蛋白合成。

密骨胶囊调控ERK1和p38对骨质疏松大鼠骨形成的影响

目的过观察密骨胶囊对骨质疏松大鼠骨形成标志物表达及细胞外调节蛋白激酶1(extracellular regulated protein kinase 1,ERK1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38)表达,探讨密骨胶囊促骨形成的作用机制。方法选取3月龄清洁级健康雌性Wistar大鼠,采用切除卵巢手术建立骨质疏松模型。模型成功后,将卵巢切除大鼠随机分为模型组(OVX)和密骨胶囊组,同时将假切大鼠作为对照组。显微CT(micro-CT)扫描分析大鼠胫骨体积骨密度和骨微结构参数;荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)方法检测骨内骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)、Ⅰ型胶原a1(collagen typeⅠalpha 1,COL1a1)、ERK1和p38 mRNA表达。结果micro-CT结果显示,大鼠卵巢切除后,模型组体积骨密度、骨体积分数、骨小梁厚度和骨小梁数量均明显低于对照组(P<0.05),骨小梁分离度明显大于对照组(P<0.05);密骨胶囊组体积骨密度、骨体积分数和骨小梁厚度均明显增加(P<0.05),骨小梁数量增加,但与模型组比较无统计学意义。密骨胶囊可上调骨质疏松大鼠骨内骨形成标志物mRNA表达,包括BALP、BMP2、COL1α1,亦可上调股骨内ERK1和p38 mRNA的表达。结论密骨胶囊可以升高骨质疏松大鼠骨密度,改善部分骨微结构,上调骨形成标志物的表达,其作用机制可能与调控ERK1、p38表达有关。

密骨胶囊对乳腺癌芳香化酶抑制剂相关骨丢失患者骨密度及骨代谢的影响

目的观察密骨胶囊联合钙尔奇D对乳腺癌芳香化酶抑制剂治疗相关骨丢失(aromatase inhibitors-associated bone loss,AIBL)患者骨密度(bone mineral density,BMD)及骨代谢的影响。方法将符合入选标准的70例AIBL患者随机分为对照组和实验组,两组各35例。对照组给予来曲唑+钙尔奇D,实验组在对照组的基础上加服密骨胶囊。2组均治疗12个月。检测治疗前后患者L 2 L 4、大粗隆、左股骨颈骨密度变化,血清代谢指标钙(calcium,Ca)、25-羟基维生素D 3(25-hydroxy vitamin D 3,25-OH D 3)及骨转换标志物Ⅰ型胶原交联C-末端肽(typeⅠcollagen carboxy-terminal peptide,CTX)、Ⅰ型胶原交联N-末端肽(typeⅠcollagen aminoterminal peptide,NTX)、1型原胶原氨基端前肽(procollagen type 1 N-terminal prope-ptide,P1NP)的水平,并评价用药的安全性。结果与治疗前比较,实验组治疗后L 2 L 4、大粗隆及左股骨颈BMD值升高,对照组降低,两组比较均有统计学意义(P<0.05),且两组变化值比较,差异均有统计学意义(P<0.001);与治疗前比较,两组的25-OH D 3均较前升高,与同组治疗前比较差异均有统计学意义(P<0.05),实验组血清25-OH D 3升高程度优于对照组,治疗前后两组变化值比较,差异有统计学意义(P<0.001);与治疗前相比,治疗后两组血清骨转换标志物β-CTX、NTX较前降低,P1NP较前升高,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),实验组血清β-CTX、NTX和P1NP变化程度大于对照组,治疗前后两组变化值比较,差异有统计学意义(P<0.001)。治疗期间,两组患者均未出现明显的不良反应;两组患者血清雌二醇(E 2)治疗前后及组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论密骨胶囊联合钙尔奇D可增加乳腺癌AIBL患者的BMD,改善骨代谢。

补肾填髓密骨方联合地舒单抗治疗骨折不愈合1例

介绍运用补肾填髓密骨方联合地舒单抗(Denosumab)治疗老年女性骨折不愈合1例。补肾填髓密骨方在骨舒康颗粒(GSK)的基础上去黄瓜子、木耳加用续断、牛膝、鹿衔草、龟甲胶、鹿角胶益肾填髓、益气活血,改善患者肾虚等症状;地舒单抗可与核因子-kB受体活化因子配体(Receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)结合,抑制破骨细胞的形成、功能和存活,从而减少骨吸收,增加骨皮质和骨小梁的骨量和强度,中西医结合治疗,标本兼治,结果患者BMD、T值均有所增加,β-CTX、PINP、25羟维生素有所下降,骨折不愈合、肾虚疼痛等症状也得到改善。

HPLC法测定密骨胶囊中淫羊藿苷含量

建立测定密骨胶囊中淫羊藿苷含量的方法。样品用甲醇超声提取 30 m in,在 C1 8柱上以甲醇 -水 -醋酸 (45∶5 0∶ 5 )为流动相 ,在波长 2 70 nm处检测。淫羊藿苷含量测定的线性范围为 0 .0 5 0 9～ 0 .8144μg,线性回归方程为Y=1479.437+4 5 5 0 5 1.2 13X,r=0 .9999,平均回收率为 98.95 % ,RSD为 2 .44 %。该法简便、准确、重现性好 ,可作为密骨胶囊质量控制的方法。

密骨片对绝经后骨质疏松症骨密度、血清骨保护蛋白及其配体水平和骨代谢指标的影响

目的观察密骨片治疗绝经后骨质疏松症患者骨密度(BMD)、血清骨保护蛋白(OPG)和骨保护蛋白配体(OPGL)水平及骨代谢指标的变化。方法将年龄48～65岁的192名自然绝经的妇女进行骨密度测定,对其中160例骨质疏松妇女进行随机分组,其中密骨片组54例,仙灵骨葆组53例,乐力钙组53例;其余BMD正常32例作为对照组。各组均于用药前、后12、24周,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清OPG与OPGL水平、骨碱性磷酸酶(sBAP)、骨钙素(sOC)、Ⅰ型胶原交联C端肽(sCTx)和尿Ⅰ型胶原交联N端肽(uNTx),用双能X线吸收法(DEXA)测定腰椎正位、股骨颈、Ward’s三角和大粗隆的BMD。结果治疗24周后,密骨片组和仙灵骨葆组BMD均有不同程度的提高,OPGL、sBAP、sOC均有明显升高,而OPG、sCTx、uNTx/Cr明显下降,乐力钙组和对照组变化不明显。结论密骨片治疗绝经后骨质疏松症疗效较显著,与仙灵骨葆相仿。单纯服用钙剂不能治疗绝经后骨质疏松症,且继续骨流失。

密骨颗粒联合阿仑膦酸钠维D3片治疗老年性骨质疏松症的多中心临床研究

目的探讨密骨颗粒联合阿仑膦酸钠维D3片治疗骨质疏松症的临床疗效与安全性。方法随机将受试者分为试验组(n=109)和对照组(n=75),试验组给予密骨颗粒联合阿仑膦酸钠维D3片,对照组给予阿仑膦酸钠维D3片,疗程为12个月。分别于治疗前、治疗后6、12个月时行骨代谢、骨密度(bone mineral density,BMD)、血常规、肝肾功能等检查,并记录VAS与SF-36评分,观察受试者的不良反应。结果①12个月后,试验组和对照组受试者的腰椎BMD分别增加3.70%和4.18%,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05);髋部BMD分别下降0.89%和17.02%,对照组下降更明显(P<0.05);②12个月,试验组和对照组受试者的PTH分别增加44.29%和72.03%,25(OH)D分别下降11.83%和9.29%,β-CTX分别下降32.25%和20.0%,PINP分别下降36.70%和58.95%,BGP分别下降22.82%和27.24%,ALP分别下降20.43%和25.97%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05);③两组受试者治疗后腰痛VAS评分均下降(P<0.05),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗9、12个月后试验组SF-36PCS及MCS功能评分高于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05);④两组均未出现严重不良反应。结论密骨颗粒联合阿仑膦酸钠维D3片治疗骨质疏松症可以降低骨转换速度,同时还可以促进成骨,提升腰部骨密度,保持髋部骨密度,降低骨流失,降低患者躯体疼痛,改善生活质量。未出现不良反应与肝肾功能损害,具有较好的安全性。

比较密骨胶囊与维生素D_3对糖皮质激素性骨质疏松模型骨量、骨强度影响的研究

目的：比较性地研究密骨胶囊与维生素Ｄ３对糖皮质激素性骨质疏松模型骨量、骨强度的影响。方法；采用１２月龄ＳＤ雄性大鼠４６只，随机分为空白对照组１４只、地塞米松组１６只、密骨胶囊组８只、维生素Ｄ３组８只。地塞米松的剂量是０．２５ｍｇ／１００ｇ体重／次（每周两次）；密骨胶囊浸膏的剂量是０．１６６ｇ／１００ｇ体重／次（每天一次）；维生素Ｄ３的剂量是０．２５Ｕ／１００ｇ体重／次（第一周每天一次，一周以后每周三次）。各组施行相应处理，１８周以后分别测定各组大鼠全身骨密度、股骨抗弯强度。结果：密骨胶囊既能部分地恢复模型大鼠已经丢失的骨量（高于地塞米松组ｐ＜０．０５，低于空白对照组ｐ＜０．０５），又能部分地回升模型大鼠已经降低的骨强度（高于地塞米松组ｐ＜０．０５，低于空白对照组ｐ＜０．０５）；维生素Ｄ３也能部分地恢复模型大鼠已经丢失的骨量（高于地塞米松组ｐ＜０．０５，低于空白对照组ｐ＜０．０５），亦能部分地回升模型大鼠已经降低的骨强度（高于地塞米松组ｐ＜０．０５，低于空白对照组ｐ＜０．０５），但回升能力比较密骨胶囊有下降趋势。结论：密骨胶囊是一种具有开发潜力的抗糖皮质激素性骨质疏松的中药复方．

密骨胶囊延缓原发性骨质疏松症骨量丢失的Ⅲ期临床试验

目的确证密骨胶囊维持或升高原发性骨质疏松症骨矿密度的临床有效性。方法采用随机、阳性药物平行对照、双盲单模拟、多中心的试验设计方法,将480例原发性骨质疏松症(肝肾亏虚)患者随机分为试验组(360例)和对照组(120例);试验组口服密骨胶囊,对照组口服仙灵骨葆胶囊及模拟剂。两组疗程均为6个月,分别观察L2-L4、股骨颈、大粗隆和Ward三角部位骨矿密度值的变化情况。结果试验组维持或升高骨矿密度的总有效率为95.49%,对照组为95.80%,组间差异无统计学意义(P>0.05)。试验组治疗后股骨颈和Ward三角部位骨矿密度值显著升高,与基线水平比较差异有统计学意义(P<0.05);L2-L4和大粗隆部位治疗前后无明显变化;对照组治疗后Ward三角部位骨矿密度值显著升高,与基线水平比较差异有统计学意义(P<0.05),其他3个部位骨矿密度值变化均无统计学意义(P>0.05)。组间治疗后比较,各部位骨矿密度值差异均无统计学意义(P>0.05)。结论密骨胶囊可通过维持腰椎骨矿密度、升高髋部骨矿密度,有效治疗原发性骨质疏松症。

密骨打老儿丸含药血清对共育体系中成骨细胞和破骨细胞功能的影响

目的:观察密骨打老儿丸(Migu-Dalaoer pill,MDP)含药血清在成骨-破骨细胞共同培养体系中对成骨细胞(osteoblasts,OB)增殖和破骨细胞(osteoclasts,OC)骨吸收功能的影响。方法:利用分段酶消化法从胎鼠颅骨中分离出OB,取1日龄SD大鼠四肢股骨和胫骨分离培养OC,建立培养上清相通但2种细胞间互不接触的成骨-破骨细胞共育模型。实验分为不同浓度(低、中、高)的MDP含药血清组和对照组进行比较,以细胞增殖(MTT法)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性代表OB的成骨活性,以抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistantacid phosphatase,TRAP)活性和骨吸收陷窝数目代表OC的破骨能力进行测定。结果:与对照组相比,中、高浓度MDP含药血清在成骨-破骨细胞共同培养体系中6和7 d能显著提高OB数目和ALP活性(P<0.01)。与对照组相比,中、高浓度MDP含药血清在成骨-破骨细胞共同培养体系中6和7 d能显著降低OC骨吸收陷窝的数目和分泌TRAP的活性(P<0.01)。结论:密骨打老儿丸含药血清在共育体系中能够促进OB增殖和骨形成,同时抑制OC骨吸收功能。

正交设计法研究密骨胶囊水煎工艺

目的 :优选密骨胶囊水煎工艺的最佳条件。方法 :用正交设计法以方中君药淫羊藿药材的主要成分淫羊藿苷的总量为指标对水煎工艺进行筛选。结果 :优选出密骨胶囊水煎工艺 ,重复试验结果满意。结论 :密骨胶囊水煎工艺的最佳条件为 A2 B2 C2 D2 ,即加 10倍量水选浸泡 4 0 min,再煎煮 2次 ,煎煮 90

密骨打老儿丸对去卵巢大鼠骨质疏松的影响

目的探讨密骨打老儿丸(淫羊藿、骨碎补、菟丝子、补骨脂等)防治去卵巢大鼠骨丢失和骨质量降低的作用。方法 60只雌性大鼠,随机分为5组:假手术组、模型组、雌二醇组和密骨打老儿丸低、高剂量组。假手术组仅行假手术,其余4组行卵巢切除术。术后1周分别灌胃给予17β-雌二醇和密骨打老儿丸低、高剂量,连续给药3个月。测定血钙、血磷和血清碱性磷酸酶(ALP)以及尿钙(u-Ca)、尿磷、尿脱氧吡啶酚(D-Pyr)和尿肌酐(Cr)。之后处死动物,取出股骨、腰椎和胫骨,分别测定股骨密度,骨钙、骨磷,腰椎生物力学性能,胫骨组织形态计量学参数。结果与假手术组相比,模型组血清ALP、u-Ca、D-Pyr/Cr显著增加,股骨密度、腰椎生物力学参数(弹性载荷、最大载荷、断裂载荷、刚度)、胫骨上段静态参数(包括骨组织总面积、骨小梁面积、骨小梁周长)、动态参数(标记周长百分数、骨形成率)均降低。与模型组比较,密骨打老儿丸低、高剂量和雌二醇组均可使血清ALP、u-Ca、D-Pyr/Cr排出量降低,股骨密度、腰椎生物力学参数、胫骨上段静态参数、动态参数均增加。结论密骨打老儿丸能抑制由于去卵巢雌激素缺乏引发的骨转换增强,提高骨密度,增强腰椎抗压生物力学性能。

密骨打老儿丸对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎和肾脏维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨密骨打老儿丸(打老儿丸加淫羊藿、骨碎补、补骨脂、菟丝子等)对去卵巢骨质疏松大鼠生化指标的影响。方法 72只SD雌性大鼠,随机分为6组:假手术组、模型组、维生素D3(2 mg/kg)组和密骨打老儿丸小、中、大剂量组。假手术组仅行假手术,其余5组分别行卵巢切除术。术后1周分别灌胃给予密骨打老儿丸和维生素D33个月。采用酶联免疫吸附法检测血清1,25-二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)水平。测定股骨骨密度,采用实时荧光RT-PCR测定第2腰椎和肾脏组织维生素D受体(VDR)mRNA表达。结果与假手术组相比,模型组股骨骨密度、血清和肾脏1,25(OH)2D3、腰椎和肾脏组织VDR mRNA表达均下降。与模型组比较,密骨打老儿丸中、大剂量组和维生素D3组均可使股骨骨密度、血清和肾脏1,25(OH)2D3、腰椎和肾脏组织VDR mRNA表达增加。结论密骨打老儿丸和维生素D3显著提高去卵巢大鼠腰椎和肾脏组织VDR mRNA表达,促进肠钙吸收与成骨细胞活性,增强骨质量。

密骨片对PMOP的骨密度、MMP-2及骨代谢指标的影响

目的：观察密骨片（Migutablet）治疗绝经后骨质疏松症的血清基质金属蛋白酶-2（MMP-2）水平及骨密度（BMD）、骨代谢指标的变化。方法：将年龄55～62岁的192名自然绝经的妇女进行骨密度测定，骨质疏松妇女160例随机分为：密骨片（MG）组68例，仙灵骨葆（XLGB）组50例，钙剂组42例；绝经后正常妇女32例作为正常组。各组均于用药前后12，24周，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定的血清MMP-2水平、骨碱性磷酸酶（sBAP）、骨钙素（sOC）、I型胶原交联C端肽（sCTx）和尿Ⅰ型胶原交联N端肽（uNTx），用双能X线吸收法（DEXA）测定腰椎正位，股骨颈，Ward’s三角和大粗隆的骨密度（BMD）。结果：经治疗后，密骨片组和仙灵骨葆组骨密度均有不同程度的提高，而钙剂组和正常组骨密度均下降；密骨片组和仙灵骨葆组的sBAP，sOC均有明显升高，而MMP-2，sCTx，uNTx明显下降，钙剂组和正常组变化不明显。结论：密骨片治疗绝经后骨质疏松症疗效显著，与仙灵骨葆相仿。单纯服用钙剂不能治疗绝经后骨质疏松症，且继续骨流失。

密骨胶囊和健脾方对切卵大鼠小肠及腓肠肌中VDR mRNA表达的影响

目的:观察密骨胶囊、健脾方对大鼠小肠、腓肠肌中维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)mRNA表达的影响,探讨补肾、健脾不同功效的中药复方,是否对机体不同组织器官VDR mRNA的表达存在一定选择性。方法:复制切卵大鼠骨质疏松模型,随机分为假切组、模型组、密骨胶囊组和健脾方组,术后12周开始灌胃,灌胃12周后取材。测定骨密度、子宫重量、腓肠肌重/体重,同时对大鼠小肠、腓肠肌中VDR mRNA进行半定量。结果:密骨胶囊能提高切卵大鼠骨密度(P<0.05),提高腓肠肌重/体重(P<0.05),上调小肠和腓肠肌中VDR mRNA的表达(P<0.01);健脾方能维持大鼠骨密度(P>0.05),上调腓肠肌中VDR mRNA的表达(P<0.01);密骨胶囊、健脾方均无增加子宫重量作用。结论:密骨胶囊和健脾方能通过上调切卵大鼠小肠和腓肠肌中VDR mRNA的表达,而起到治疗骨质疏松症的作用。

密骨胶囊治疗原发性骨质疏松症(肝肾不足证)的临床研究

目的:评价密骨胶囊治疗原发性骨质疏松症(肝肾不足证)的临床疗效及安全性。方法:采用随机双盲对照的临床试验方法,将48例原发性骨质疏松症(肝肾不足证)患者,随机分为密骨胶囊治疗组及阳性药物(仙灵骨葆)对照组。两组疗程为六个月,运用双能X线骨密度仪(DEXA)检测治疗前后腰椎及髋部骨密度变化;观察患者治疗前后临床症状变化及血钙、磷、碱性磷酸酶变化。结果:主症方面:统计学处理,两组相比较无显著性差异,说明两组疗效相当,密骨胶囊对原发性骨质疏松症有治疗作用。次症方面:组间比较试验药(密骨胶囊)与对照药(仙灵骨葆)相比差异无统计学意义,两组疗效相当;从组内比较来看,治疗六个月后,经统计学处理,绝大多数疗效指标P<0.05,差异有统计学意义。说明试验药(密骨胶囊)治疗后较治疗前有良好的治疗作用,且在治疗Ward三角骨密度测量值及测量值占峰值百分比方面,中医证候总分的改善方面明显优于对照组。结论:密骨胶囊在目前的口服剂量疗程范围内,治疗骨质疏松疗效确切,安全,无毒副作用,是一种治疗骨质疏松症安全、有良好疗效的中药新药。

基于中医学“治未病”理论研究密骨颗粒治疗骨量减少的多中心临床试验

目的探讨密骨颗粒治疗骨量减少的有效性及临床应用的安全性。方法采用实用性随机对照方法,将6家分中心分为试验组和对照组,试验组给予密骨颗粒,对照组给予钙尔奇D,疗程为12个月,治疗前、治疗后6、12月时行骨代谢、骨密度、血常规、肝肾功能等检查,并记录VAS与SF-36评分,观察患者的不良反应。结果①两组患者腰椎BMD值治疗前后无变化;试验组髋部BMD在治疗12月时优于对照组(P <0.05)。②两组患者骨代谢比较,PTH、β-CTX、BGP、S-Ca与治疗前比较均有上升(P <0.05),组间比较差异无统计学意义(P> 0.05);25-羟维生素D(25-Hydroxyvitamin D,25-OH-D)治疗6、12月均有下降(P <0.05);PINP试验组无变化,对照组在治疗后6、12月均有下降(P <0.05);ALP两组治疗前后均无变化(P>0.05);试验组S-P在治疗后12月时升高(P <0.05),对照组无明显变化(P> 0.05)。③两组患者治疗后6、9、12月腰痛VAS评分均下降(P <0.05),组间比较差异均无统计学意义(P> 0.05)。试验组在治疗9、12月后患者的SF-36PCS及MCS功能评分高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);④两组均未出现严重不良反应。结论密骨颗粒可以增加髋骨骨量,减少骨量丢失,降低患者躯体疼痛,提高患者的生活质量,并且有较好的安全性。

不同剂量健腰密骨片对骨形成和小鼠骨髓间充质干细胞中BMP-7表达的影响

目的探讨不同剂量健腰密骨片对小鼠椎体和骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs)成骨分化过程中骨形态发生蛋白-7(bone morphogenic protein-7,BMP-7)表达的影响。方法选取1月龄昆明小鼠48只,雌雄各半,按体质量随机分为健腰密骨片高、中、低剂量组及生理盐水4组,灌胃8周后取材。用Micro-CT扫描分析L4腰椎,免疫组化染色观察不同剂量健腰密骨片对椎体BMP-7表达的影响;分离培养获得各组小鼠原代骨髓间充质干细胞(BMSCs),利用碱性磷酸酶(ALP)染色、实时荧光定量RT-PCR法检测BMSCs成骨分化过程中BMP-7的表达情况。结果与生理盐水组比较,健腰密骨片高剂量组能够改善小鼠椎体三维结构,促进椎体BMP-7蛋白的表达;健腰密骨片高剂量组能够明显增加BMSCs中ALP活性,上调成骨基因BMP-7 mRNA的表达量(P<0.05)。结论健腰密骨片高剂量组能够明显提高小鼠椎体骨量,促进BMSCs成骨分化,上调椎体和BMSCs成骨分化过程中BMP-7表达,从而促进骨形成。

补肾法对IL-1诱导的破骨细胞性骨吸收及破骨细胞MMP-9的影响

用从出生２４小时的乳鼠长骨中分离出来的破骨细胞，从１月龄大鼠长骨中分离出来的骨髓基质细胞，建立破骨细胞培养和破骨细胞、骨髓基质细胞培养系。在白细胞介素１（ＩＬ１α）作用的同时，加入不同剂量的密骨片药液，分别与牛骨片共同培养２０小时。计数骨片形成的陷窝数及测算吸收陷窝面积。并采用原位杂交技术，研究密骨片对破骨细胞基质金属蛋白酶９（ＭＭＰ９）ｍＲＮＡ表达的调控。结果显示，在基质细胞存在的条件下，ＩＬ１可使骨吸收性增强２～４倍，ＭＭＰ９ｍＲＮＡ呈高表达。密骨片则可对抗ＩＬ１对基质细胞的影响，间接地抑制破骨细胞活性，使ＭＭＰ９ｍＲＮＡ表达降低，减少骨吸收。