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Cricket Grb-AST_7 Gene Concatemer Constructed by "Self Template-primer" PCR
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作者 查笑君 马伯军 +1 位作者 潘建伟 黄俊生 《Plant Diseases and Pests》 CAS 2010年第2期45-48,共4页
[Objective] Grb-AST7 concatemer including 17 copies of Grb-AST7 was constructed by "self template-primer" PCR. [Method] Two primers of which were synthesized based on the amino acid sequence of Gryllus bimaculatus’... [Objective] Grb-AST7 concatemer including 17 copies of Grb-AST7 was constructed by "self template-primer" PCR. [Method] Two primers of which were synthesized based on the amino acid sequence of Gryllus bimaculatus’ Grb-AST7. [Result] Through splicing, a length of 570 bp, containing 17 copies of the Grb-AST7 gene repeats were obtained. Appropriate primer splicing conditions were as follows:splice time 20 min, 25 μl PCR system, containing 2 μl template. [Conclusion] The results laid foundation for the future studies on Grb-AST7 gene expression and bio-activity analysis. 展开更多
关键词 Grb-AST7 "self template-primer" pcr Concatemer
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Identification of Self-Incompatibility Genotypes in Some Sand Pears (Pyrus pyrifolia Nakai) by PCR-RFLP Analysis 被引量:4
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作者 GU Qing-qing ZHANG Qing-lin +2 位作者 HU Hong-jü CHEN Qi-liang LUO Zheng-rong 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2009年第2期154-160,共7页
The identification of self-incompatibility genotype (S-genotype) will be useful for selection of pollinizers and design of crossing in cultivar improvement of sand pear. This paper reported the identification of sel... The identification of self-incompatibility genotype (S-genotype) will be useful for selection of pollinizers and design of crossing in cultivar improvement of sand pear. This paper reported the identification of self-incompatibility genotypes of seven Chinese and two Japanese sand pear cultivars using PCR-RFLP analysis and S-RNase sequencing. The Sgenotypes of these cultivars were determined as follows: Huali 1 S1S3, Shounan S1S3, Xizilti S1S4, Qingxiang S3S7, Sanhua S2S7, Huangmi (Imamuranatsu) S1S6, Huali 2 S3S4, Baozhuli S7S33, Cangxixueli S5S15. S-RNase alleles (S1 to S9) in sand pear could be identified effectively by PCR-RFLP analysis. 展开更多
关键词 Pyrus pyrifolia Nakai self-incompatibility genotype S-allele S-RNASE pcr-RFLP crossing experiment
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利用PCR构建多拷贝HIV-1 TAR序列的串联体 被引量:6
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作者 阴彬 白龙川 袁建刚 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2001年第1期85-87,共3页
建立“自身引物—模板”PCR方法 ,并应用此方法成功地扩增了多拷贝HIV 1TAR片段的同向串联体。此方法简便 ,省力 ,可用于多拷贝基因探针、多拷贝反义基因片段、多拷贝抗原表位的扩增和克隆。
关键词 自身引物-模板 串联板 聚合梅链反应 HIV-1TAR 多拷贝基因探针
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加入自我延伸过程的融合PCR程序 被引量:3
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作者 刘亮伟 杨海玉 +1 位作者 胡瑜 李相前 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第18期96-98,共3页
比较了加入自我延伸过程的融合PCR程序与传统PCR在扩增融合基因的扩增效果,自我延伸程序(94℃×1min,52℃×1min,72℃×1min)扩增2次,分别用不同的延伸时间:1min、2min、3min、5min,发现用2min、3min、5min延伸时间扩增出... 比较了加入自我延伸过程的融合PCR程序与传统PCR在扩增融合基因的扩增效果,自我延伸程序(94℃×1min,52℃×1min,72℃×1min)扩增2次,分别用不同的延伸时间:1min、2min、3min、5min,发现用2min、3min、5min延伸时间扩增出的融合基因条带比传统PCR显著亮一些,而用延伸时间为1min时,两种程序扩增出融合基因条带的亮度相近,说明自我延伸程序中的延伸时间是影响融合基因扩增量的关键因素。加入自我延伸过程的融合PCR扩增程序为:94℃×5min,(94℃×1min,52℃×1min,72℃×5min)×2次循环,(94℃×1min,52℃×1min,72℃×1min)×30次,4℃store。 展开更多
关键词 自我延伸过程 融合pcr 延伸时间 融合基因
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模糊PID控制用于PCR芯片实验室温控系统 被引量:3
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作者 徐平 余威 +1 位作者 王健桦 姚骏恩 《华东理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第2期267-270,共4页
介绍了一种采用自校正模糊PID控制算法的PCR芯片实验室温度控制系统。该系统将模糊推理控制与PID控制相结合,利用PCR芯片上溅射的Pt电阻获取温度信号,通过PID精确输出控制在芯片背面直接制备的微加热器和外加的半导体致冷器件,实现了PC... 介绍了一种采用自校正模糊PID控制算法的PCR芯片实验室温度控制系统。该系统将模糊推理控制与PID控制相结合,利用PCR芯片上溅射的Pt电阻获取温度信号,通过PID精确输出控制在芯片背面直接制备的微加热器和外加的半导体致冷器件,实现了PCR芯片的高精度快速变温控制,可用于近场光学显微镜实时探测PCR扩增反应过程中荧光信号的近场分布,为实现高灵敏度DNA定量检测提供了必要条件。 展开更多
关键词 pcr芯片 自校正模糊控制 PID控制 近场光学显微镜
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自身淬灭探针荧光定量PCR检测淋病奈瑟菌 被引量:3
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作者 陈茶 黄彬 +1 位作者 罗进勇 尹一兵 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2008年第5期313-314,320,共3页
目的利用自身淬灭探针技术建立敏感、特异、快速、价廉且能广泛应用的淋病奈瑟菌荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-CPPB作为标准品,自行设计自身淬灭探针,建立、优化定量PCR体系,并进行方法学评价及临床应用。结果所建... 目的利用自身淬灭探针技术建立敏感、特异、快速、价廉且能广泛应用的淋病奈瑟菌荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-CPPB作为标准品,自行设计自身淬灭探针,建立、优化定量PCR体系,并进行方法学评价及临床应用。结果所建立方法的线性检测范围为101~109拷贝/μL,灵敏度为10拷贝/μL,特异性为100%。天间变异系数(CV)为2.38%,批内CV为1.32%,批间CV为2.75%。该方法比培养方法更快速、灵敏。结论以自身淬灭探针技术为平台的淋病奈瑟菌荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,对淋病的早期快速诊断有较高价值。 展开更多
关键词 淋病奈瑟菌 自身淬灭探针 荧光定量pcr
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透明导电玻璃(ITO)基材自加热传感静态芯片聚合酶链反应(PCR) 被引量:3
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作者 吴志勇 田晓溪 +2 位作者 渠柏艳 陈坤 方芳 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第12期2259-2263,共5页
利用商品化ITO玻璃导电层的温阻效应,无需任何微加工手段,实现了自加热和传感的芯片温度自动程序控制,最大程度地减小了传感滞后对温度控制稳定性的影响,温度控制的稳定性达到了0.2℃,升温速度最快可达20℃/s以上,在冷却风扇辅助下降温... 利用商品化ITO玻璃导电层的温阻效应,无需任何微加工手段,实现了自加热和传感的芯片温度自动程序控制,最大程度地减小了传感滞后对温度控制稳定性的影响,温度控制的稳定性达到了0.2℃,升温速度最快可达20℃/s以上,在冷却风扇辅助下降温速度最快达到了8℃/s.芯片温控单元的引线从传统的两对(一对用于传感,一对用于加热)减少为一对.通过在该芯片上直接构建多个开放微池反应器的方法成功地实现了λDNA 157 bp片段的并行扩增.将该芯片置于倒置荧光显微镜样品台上,以蓝色(575 nm)发光二极管为光源,以光电倍增管为检测手段检测了dsDNA和SYBR GreenⅠ嵌合物的荧光强度随温度的实时变化曲线. 展开更多
关键词 氧化铟锡(ITO)玻璃 自加热传感温控 静态芯片聚合酶链反应 原位实时荧光监测 发光二极管
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基于虚拟仪器的PCR芯片智能温控系统开发 被引量:2
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作者 李丽娜 柳洪义 许时扬 《计算机工程与设计》 CSCD 北大核心 2009年第5期1223-1227,1298,共6页
采用检测电路与加热电路分时交替工作的方式,利用精密恒流源以电阻值测温度值。采用基于模糊切换的Bang-Bang控制、自适应模糊控制、微分先行PID控制相结合的分段复合控制策略,应用虚拟仪器技术,开发了PCR芯片智能温度控制系统。实验结... 采用检测电路与加热电路分时交替工作的方式,利用精密恒流源以电阻值测温度值。采用基于模糊切换的Bang-Bang控制、自适应模糊控制、微分先行PID控制相结合的分段复合控制策略,应用虚拟仪器技术,开发了PCR芯片智能温度控制系统。实验结果表明,此温度控制系统可对被控对象进行精确有效的控制,充分满足了使用要求。 展开更多
关键词 聚合酶反应 虚拟仪器 恒流源 自适应模糊控制 微分先行PID控制 模糊切换
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利用DDRT-PCR鉴定芸芥自交不亲和系与自交亲和系的差异表达cDNA(英文)
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作者 范惠玲 白生文 +1 位作者 李华清 孙万仓 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期44-50,共7页
芸芥与芸薹属植物具有亲缘关系,也是芸薹属植物的重要育种资源。自交亲和性是芸芥的一种重要变异性状。为了探明芸芥自交亲和基因的表达器官,并分离与自交亲和性有关的WNA片段,以芸芥的一对近等基因系,自交亲和系(SC)与自交不亲和... 芸芥与芸薹属植物具有亲缘关系,也是芸薹属植物的重要育种资源。自交亲和性是芸芥的一种重要变异性状。为了探明芸芥自交亲和基因的表达器官,并分离与自交亲和性有关的WNA片段,以芸芥的一对近等基因系,自交亲和系(SC)与自交不亲和系(SI)为试材,利用差异显示RT-PCR技术分别对开花前和开花后的叶片、花药和柱头进行鉴定。结果表明,不论开花前还是开花后,芸芥自交亲和系与自交不亲和系的叶片或花药间的扩增带型是一样的,但在近等基因系的柱头间得到了差异表达条带。这证明芸芥自交亲和基因不是组成型表达,而是组织特异性表达,柱头是其唯一的表达器官。在开花前的自交亲和系中共得到了2条cDNA片段,一条小于100bp,另一条为750~1000bP,在开花后的自交亲和系中得到了1条300bp的cDNA片段。据分析这3条cDNA片段可能与芸芥的自交亲和性密切相关。在开花前的自交不亲和系中共得到了2条cDNA片段,一条为500bp,另一条为750bp,同时在开花后的自交不亲和系中得到了1条500~600bp的cDNA片段。这些cDNA片段可以用来区分芸芥的自交亲和系与自交不亲和系,还可用于克隆自交亲和基因。 展开更多
关键词 芸芥 自交亲和系 自交不亲和系 DDRT-pcr
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“自身模板引物”PCR法构建蟋蟀神经肽Grb-AST_7基因串联体
10
作者 查笑君 马伯军 +1 位作者 潘建伟 黄俊生 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第13期6683-6685,共3页
[目的]通过改进的"自身模板引物"PCR法构建Grb-AST7基因串联体。[方法]根据蟋蟀神经肽Grb-AST7氨基酸序列设计合成2条引物,运用改进的"自身模板引物"PCR法进行拼接。[结果]通过拼接,获得了全长570bp、含17个拷贝的G... [目的]通过改进的"自身模板引物"PCR法构建Grb-AST7基因串联体。[方法]根据蟋蟀神经肽Grb-AST7氨基酸序列设计合成2条引物,运用改进的"自身模板引物"PCR法进行拼接。[结果]通过拼接,获得了全长570bp、含17个拷贝的Grb-AST7基因串联体。拼接条件以拼接时间20min,25μlPCR体系中含2μl模板引物较合适。[结论]该研究为下一步进行Grb-AST7基因表达及其生物学活性分析奠定了基础。 展开更多
关键词 Grb-AST7 “自身模板引物”pcr 基因串联体
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新疆杏品种自交不亲和S-RNase基因PCR扩增体系的优化
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作者 姜新 冯建荣 +2 位作者 姜俊卿 王大江 刘月霞 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2010年第4期418-421,共4页
以3个新疆杏品种的叶片为试材,以其叶片基因组DNA为模板,分别对PCR扩增体系中的10×Buffer(含Mg2+)、dNTP、上下游引物、TaqDNA聚合酶和退火温度5个因素设计6个梯度,研究了新疆杏品种自交不亲和S-RNase基因PCR扩增条件,建立其优化的... 以3个新疆杏品种的叶片为试材,以其叶片基因组DNA为模板,分别对PCR扩增体系中的10×Buffer(含Mg2+)、dNTP、上下游引物、TaqDNA聚合酶和退火温度5个因素设计6个梯度,研究了新疆杏品种自交不亲和S-RNase基因PCR扩增条件,建立其优化的PCR扩增体系。研究结果表明:其扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性45s,52℃退火45s,72℃延伸2min,35个循环后72℃延伸10min,25μL反应体系10×Buffer(含Mg2+)2.5μL,dNTP0.08mmol/L,上下引物0.16μmol/L,DNA80ng,DNA聚合酶1μL,此为最优的反应体系。 展开更多
关键词 自交不亲和 S-RNASE基因 体系优化
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自身猝灭探针定量PCR检测HCV方法的建立
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作者 蓝锴 许颂霄 +2 位作者 单幼兰 陈茶 罗进勇 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期13-15,共3页
目的建立自身猝灭荧光探针定量PCR技术检测HCV方法。方法构建重组质粒pMD18-T-HCV5′NCR作为标准品,并通过Sigma在线软件设计自身猝灭探针,优化定量PCR体系,并进行方法学评价。结果建立了自身猝灭荧光探针的定量PCR方法,线性为10^1-... 目的建立自身猝灭荧光探针定量PCR技术检测HCV方法。方法构建重组质粒pMD18-T-HCV5′NCR作为标准品,并通过Sigma在线软件设计自身猝灭探针,优化定量PCR体系,并进行方法学评价。结果建立了自身猝灭荧光探针的定量PCR方法,线性为10^1-10^10copies/μl;灵敏度达50copies/μl;批内CV为6.1%,批间CV为6.5%,日间CV为6.8%;特异性为100%,与其他肝炎病毒无交叉反应。与紫外定量方法比较,结果差异无显著性,且高度相关。结论以自身猝灭荧光探针建立的HCV荧光定量PCR检测方法,灵敏度高、特异性强,为新型试剂盒的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 荧光定量pcr 自身猝灭探针
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自组装短肽K_2I_4K_2在PCR中提高Taq DNA聚合酶热稳定性 被引量:1
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作者 李萌萌 徐晓帆 +2 位作者 陈振银 张慧楠 罗忠礼 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第7期879-885,共7页
目的设计自组装短肽K_2I_4K_2作为新型表面活性剂来稳定Taq DNA聚合酶,探索其对Taq DNA聚合酶在高温下的半衰期以及对PCR扩增效率的影响,探讨其在PCR中应用的可行性。方法圆二色仪检测短肽K_2I_4K_2在不同理化条件下的二级结构;原子力... 目的设计自组装短肽K_2I_4K_2作为新型表面活性剂来稳定Taq DNA聚合酶,探索其对Taq DNA聚合酶在高温下的半衰期以及对PCR扩增效率的影响,探讨其在PCR中应用的可行性。方法圆二色仪检测短肽K_2I_4K_2在不同理化条件下的二级结构;原子力显微镜检测其自组装形成的纳米结构特征;紫外可见光谱检测其对Taq酶在高温下半衰期的影响;普通PCR验证其在PCR中应用的可行性;RT-q PCR检测其对Taq酶扩增效率的影响。结果短肽K_2I_4K_2在盐离子溶液中能自组装形成纳米纤维结构,且在高温下拥有稳定的二级结构;短肽K_2I_4K_2使得Taq在95℃下的半衰期增加了约1.6倍;短肽K_2I_4K_2组装24 h后大大增加了Taq酶的扩增效率。结论短肽K_2I_4K_2较为显著地增加了Taq DNA聚合酶的热稳定性,能够很好地应用于PCR反应系统中。 展开更多
关键词 自组装短肽 纳米纤 Taq酶半衰期 pcr扩增效率
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基于荧光自淬灭引物的沙门氏菌新型荧光定量PCR方法的开发
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作者 丰敏 李舒婷 +5 位作者 张洋子 粟元 朱龙佼 曹际娟 刘海燕 许文涛 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期285-292,共8页
沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌,由沙门氏菌引起的食源性疾病位居榜首。荧光定量聚合酶链式反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是一种准确、可靠的用于核酸定量的扩增技术,常用的荧光探针法使得扩增... 沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌,由沙门氏菌引起的食源性疾病位居榜首。荧光定量聚合酶链式反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是一种准确、可靠的用于核酸定量的扩增技术,常用的荧光探针法使得扩增体系复杂、引物合成成本高。为了简化FQ-PCR的扩增体系,减少标记基团的修饰,拟通过单标记的荧光自淬灭引物实现新型荧光定量聚合酶链式反应(innovative FQ-PCR,IFQ-PCR)用于模板DNA的定量检测。根据沙门氏菌特异性基因设计单标记发卡型荧光自淬灭引物,并将其应用于FQ-PCR实现了沙门氏菌的检测。设计的自淬灭引物探针一体化,只需单标记,无需额外探针或染料的加入,简化了扩增体系,降低了检测成本;同时引物的发卡结构提高了检测特异性。在最优的引物浓度(0.4μmol/L)下,沙门氏菌在10^(1)-10^(5) CFU/mL的浓度范围内其浓度的对数值与循环阈值(cycle threshold,CT)值之间呈现良好的线性关系,R^(2)高达0.99,检测限低至2 CFU/mL,并且在1.5 h内即可完成扩增检测,方法的稳定性符合要求。因此,一种基于荧光自淬灭引物的IFQPCR方法被开发出来并实现了沙门氏菌的简便、快速、灵敏、特异、低成本的检测。 展开更多
关键词 荧光定量pcr 荧光自淬灭引物 沙门氏菌 定量检测
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辣椒组织总RNA两种提取方法比较及qRT-PCR验证 被引量:1
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作者 牛西强 罗潇云 +1 位作者 胡能兵 黄先忠 《安徽科技学院学报》 2021年第6期42-47,共6页
目的:探索提取高质量的辣椒不同组织总RNA的方法,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术验证。方法:以1年生辣椒(Capsicum annuum)的根、下胚轴、茎、叶、顶端分生组织、花和果实为实验材料,比较改良Trizol Reagent试剂法和RNAprep Pure... 目的:探索提取高质量的辣椒不同组织总RNA的方法,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术验证。方法:以1年生辣椒(Capsicum annuum)的根、下胚轴、茎、叶、顶端分生组织、花和果实为实验材料,比较改良Trizol Reagent试剂法和RNAprep Pure试剂盒法对辣椒组织总RNA的提取效果。以改良Trizol Reagent试剂法提取的辣椒不同组织总RNA为模板,反转录成cDNA的第一条链;通过RT-PCR和qRT-PCR,研究甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的扩增和自我修剪基因(SELF-PRUNING,CaSP)的组织表达。结果:Trizol Reagent提取的总RNA,28 S和18 S条带较亮,OD_(260)/OD_(280)比值为1.82~2.07;RNAprep Pure提取的总RNA,28 S和18 S条带较暗,OD_(260)/OD_(280)比值为1.93~2.15;Trizol Reagent提取的总RNA能扩增出CaGAPDH基因片段,目的基因CaSP在不同组织中表达水平不同,在根和花中表达更高。结论:Trizol Reagent提取的总RNA,完整性和纯度均较好,得率也较高,能满足后续的分子实验要求。Trizol Reagent试剂法是提取高质量辣椒不同组织总RNA的较好方法。 展开更多
关键词 辣椒 总RNA 基因表达 QRT-pcr 自我修剪基因
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新疆杏品种SFB基因的克隆及实时定量表达 被引量:10
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作者 王大江 冯建荣 +3 位作者 刘月霞 姜新 曹晓艳 赵宝龙 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期60-65,共6页
以新疆杏27个品种花粉为材料,进行转录水平SFB基因的克隆与测序;选取冬杏、苏陆克、库尔勒托拥3个杏品种,对其进行花粉离体培养,分析SFB基因在不同时期的表达特性。结果表明,在27个品种中扩增出4种大小不同的条带,引物组合1在26个品种... 以新疆杏27个品种花粉为材料,进行转录水平SFB基因的克隆与测序;选取冬杏、苏陆克、库尔勒托拥3个杏品种,对其进行花粉离体培养,分析SFB基因在不同时期的表达特性。结果表明,在27个品种中扩增出4种大小不同的条带,引物组合1在26个品种中扩增出条带,其中品种贝新纳尔,赛买提的片段大小为447 bp;大优佳的片段大小为446 bp,其余品种的大小为434 bp。引物组合2在品种托乎提中扩增出大小为660 bp大小的条带。序列比对显示27个品种的SFB基因为20种基因序列,与其他物种SFB基因序列比对显示20种基因序列均为新SFB基因序列,在GenBank上的登录号为:HQ148064-HQ148083;SFB基因在3个杏品种花粉离体培养不同培养时期均有表达,其表达丰度的变化趋势一致,呈先增后减的趋势,均在培养24 h时表达丰度最高,但是每个品种的表达峰值不同。 展开更多
关键词 自交不亲和 SFB基因 实时定量pcr
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Pseudomonas putida GM6多聚磷酸盐激酶(ppk)基因的克隆及表达 被引量:9
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作者 管莉菠 蔡天明 +3 位作者 李波 何健 李顺鹏 崔中利 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期727-733,共7页
以一株高效聚磷菌Pseudomonas putidaGM6为研究材料。为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphos-phate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约... 以一株高效聚磷菌Pseudomonas putidaGM6为研究材料。为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphos-phate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约528 bp)。随后采用快速染色体步移方法(Self-formed adap-tor PCR,SEFA-PCR)技术扩增片段的上下游基因序列,将三个序列拼接,用OMIGA软件分析其ORFs,推测ppk基因全长为2 220 bp(GenBank accession number DQ133537)。构建的多聚磷酸盐激酶表达菌株E.coliBL21(DE3)/pET29a-ppk经IPTG诱导后3 h时,明显出现分子量约为81 kDa的表达产物。且表达菌株在12 h时的磷去除率高达80%(对照菌株的磷去除率仅为18%),远高于已报道的40%的去除率。这表明ppk基因在E.coli中的过量表达,导致了E.coli菌体中poly-P的大量聚集,从而大大去除了培养基中的磷酸盐。 展开更多
关键词 多聚磷酸盐激酶 ppk全基因及上下游序列 快速染色体步移方法(SEFA—pcr)
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灵芝漆酶基因转录Cu^(2+)诱导特性及其启动子的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 欧阳翔 吴婧 +2 位作者 丁一新 李玉祥 赵明文 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期36-40,共5页
以Cu2+为诱导物检测了灵芝漆酶同工酶基因的转录特性,并对其启动子进行了克隆及序列分析。研究发现:灵芝漆酶基因在Cu2+的作用下表达量出现明显差异,其中以在发酵液中添加3.0 mmol.L-1Cu2+、诱导时间为6 d时,漆酶基因的mRNA表达量最高... 以Cu2+为诱导物检测了灵芝漆酶同工酶基因的转录特性,并对其启动子进行了克隆及序列分析。研究发现:灵芝漆酶基因在Cu2+的作用下表达量出现明显差异,其中以在发酵液中添加3.0 mmol.L-1Cu2+、诱导时间为6 d时,漆酶基因的mRNA表达量最高。根据GenBank中已报道的灵芝漆酶基因的序列信息,经PCR扩增获得了灵芝漆酶5′端长879bp的基因特异序列,进而通过self-formed adaptor PCR(SEFA-PCR)方法,扩增得到灵芝漆酶基因起始密码子上游长832bp的启动子序列。分析表明,该启动子区域除分布有TATA-box、CAAT-box及GC-box等基本的转录起始元件外,还存在多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括4个MRE元件、4个STRE元件、11个HSE元件和5个氮因子结合位点等。 展开更多
关键词 灵芝 漆酶 半定量RT—pcr self-formed ADAPTOR pcr 转录调控
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丽江市古城区首次证实一起鼠间鼠疫疫情 被引量:12
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作者 谭红丽 郭英 +4 位作者 杨文艳 陈福美 张福新 张正飞 王鹏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1086-1088,共3页
目的对丽江市古城区的一起鼠间鼠疫进行判定。方法对1份干燥自毙大绒鼠标本进行鼠疫反相间接血凝抑制试验(RIHA)、聚合酶链式反应(PCR)及实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测。结果该标本经免疫学检测、PCR及RT-PCR检测均为阳性。结论确认丽江... 目的对丽江市古城区的一起鼠间鼠疫进行判定。方法对1份干燥自毙大绒鼠标本进行鼠疫反相间接血凝抑制试验(RIHA)、聚合酶链式反应(PCR)及实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测。结果该标本经免疫学检测、PCR及RT-PCR检测均为阳性。结论确认丽江市古城区鼠间鼠疫疫情。 展开更多
关键词 鼠疫 实时荧光定量pcr 自毙鼠 丽江市古城区
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11个中国杏品种S-RNase基因的检测与序列分析 被引量:13
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作者 吴俊 谷超 +4 位作者 张绍铃 张树军 宋宏峰 赵习平 刘铁铮 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期37-42,共6页
以11个未知基因型的中国杏品种为试材,根据李属植物S-RNase基因保守区设计2对引物组合检测各品种S-RNase基因,共获得22条等位扩增片段,电泳检测表明所有品种的扩增条带集中在300-1100bp的范围内,且表现出一定的长度多态性。序列分析进... 以11个未知基因型的中国杏品种为试材,根据李属植物S-RNase基因保守区设计2对引物组合检测各品种S-RNase基因,共获得22条等位扩增片段,电泳检测表明所有品种的扩增条带集中在300-1100bp的范围内,且表现出一定的长度多态性。序列分析进一步确定22个S-RNase基因为10个不同的等位基因,其中6个为首次发现,根据Gen-Bank中已登陆的杏S-RNase基因的顺序,分别命名为S19、S20、S23、S24、S25、S26,序列登陆号为:EF185300、EF185301、EU037262、EU037263、EU037264、EU037265。推导氨基酸序列的同源分析表明,杏的S-RNase与李属植物的S-RNase表现较高的同源性,为59.3%-100%;与苹果和梨的S-RNase同源性较低,为19.6%-31.6%。试验确定11个中国杏品种资源的自交不亲和基因型分别为:‘大果杏’S19/S20,‘张公园’S24/S25,‘二红’S9/S11,‘黄口外’S11/S26,‘植丸子’S11/S17,‘宇宙红’、‘大丰’S17/S23,‘超仁’、‘虹桥’S8/S11,‘冀光’、‘中华大杏梅’S8/S9;部分品种的田间杂交授粉座果与花粉管荧光显微镜观察证实了所鉴定基因型的可靠性。 展开更多
关键词 自交不亲和性 S-RNASE 等位pcr扩增 基因型
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