唐宋禅宗语录“VP-neg”式疑问句研究

唐宋时期流传下来的众多禅宗语录,是中古汉语研究方面的重要资料。其完整独特的自身体系,程度较高的口语化特点等,均对汉语史的共时及历时研究颇有助益。文章着眼于禅宗语录所见疑问句中的“VP-neg”式疑问句,试图在厘清该类问句基本结构形式的基础上,依据句末否定词“neg”的虚化程度对该类问句作出划分,并分析导致句末否定词虚化的具体原因。

中古汉语VP-neg式疑问句句末否定词的虚化问题

VP-neg是中古汉语反复问句的主要形式,对句末否定词Neg的虚化问题学术界存在不同看法。文章系统考察中古时期这一语法现象,结论是:1否定式问句末尾的否定词已经虚化;2带反诘语气副词的反诘问句末尾的否定词一般已经虚化;3选择问句里选择项末的否定词已经虚化;4带测度副词的测度问句末尾的否定词已经虚化;5带疑问语气副词“宁”的反复问句末尾的否定词没有虚化;6除前四种情况,反复问句“VP不”中的“不”没有虚化。

唐以前的VP-Neg-VP式反复问句

本文考察唐以前文献中的VP-Neg-VP式反复问句,认为《睡虎地秦墓竹简》之后,包孕句中存在VP-Neg-VP结构,汉译佛经存有一些合格的VP-Neg-VP式反复问句,因此这一句式在唐以前的发展并未中断。

汉语方言“VP-Neg”问句的类型及分布

"VP-Neg"问句是汉语方言里一种重要的正反问句。根据否定词的不同及问句的结构,"VP-Neg"问句可以分为"VP+一般否定词"、"VP+复合否定词"、"肯定词+VP+特殊否定词"三类。问句的形式与语义之间存在一对一和一对多的关系。作为汉语方言中常用形式,"VP-Neg"问句的地域分布广泛。有的方言里,"VP-Neg"问句在用法上有着特殊的表现。

黄冈方言的“VP-neg?”及其相关句式

“VP-neg?”是黄冈方言使用频率较高的一种特殊问句类型。“VP-neg?”有两种基本句式:“VP冇(没有)?”和“VP不?”。“VP冇(没有)?”句式在黄冈境内用法较为一致。“VP不?”在各县市方言中的运用大致分为三种情形,其差异主要表现在“VP不?”式和语气词的结合上,构成的方式不同,其语义倾向和语用意义也存在一定的差异。黄冈方言“VP不”和语气词的结合,表现为或连用或拼合,最终“不”逐渐虚化为语气词“呗”,其种种不同的用法,反映了黄冈方言“VP不?”句式由正反问句向是非问句演变的轨迹。

VPS13A基因双位点纯合突变致舞蹈病-棘红细胞增多症1例并文献复习

舞蹈病-棘红细胞增多症(chorea-acanthocytosis,ChAc)是一种罕见的常染色体隐性遗传病,其临床特征较为复杂,可累及运动、神经、精神及内分泌等多个系统,常伴有头颈部不自主运动、进行性舞蹈样运动障碍、认知能力下降等临床表现,极易与麦克劳德综合征、类亨廷顿病2型、泛酸激酶相关的神经退行性等疾病相混淆[1];液泡蛋白分类同源物13A(vacuolar protein sorting homolog 13A,VPS13A)基因编码蛋白chorein对于维持细胞膜正常结构及神经元细胞功能具有重要作用,其突变与CHAc发病相关。现将南昌大学第一附属医院诊治的1例VPS13A基因双位点纯合突变致ChAc患者报告如下。

龙川客家话的“F-(neg)-VP”型正反问句

龙川客家话正反问句常见的有两种类型:一种是"阿唔VP"型,一种是"唔VP-(PRT)",特点是发问词中由"阿"和否定词"唔"构成,麻布岗等镇保留了"阿"和否定词"唔"作为发问词,回龙、龙母、老隆等镇两者合音,通衢等镇合音后脱落否定词韵尾,但在部分常用发问词中依然保留。"阿唔VP"的句子结构和语法功能与广受学术界关注的吴方言"阿VP"问句相同,但龙川话的"阿唔VP"与选择问句"VP啊唔VP"关系密切,有可能是选择问句删去左边的动词而成。"阿唔VP"是属于否定词前置构成的正反问句,是汉语方言正反问句的一种新类型,可称为"F-(neg)-VP"。

客家话“K-neg-VP”正反问句的性质和形成机制

“K-neg-VP”正反问句主要见于赣粤交界地带的客家话,K的主要形式有“阿”“还”,由于“阿[a]”“还[xa]”常与否定词“唔[m]”合音为“暗[an]”“咸[xam]”,故该句式包括“阿-neg-VP”“还-neg-VP”和“暗VP”“咸VP”四种类型。本文通过考察汉语史的相关语料和山东方言“是不VP”正反问句的旁证,判断“K-neg-VP”与“可VP”没有类型学上的关系,而是源于中古问句“还VP不VP”的左肯定项删除,删除的动因与疑问句的句法要求以及“还”的语义有关。

湖北罗田方言的“VP-neg”式正反问句

罗田方言的“VP—neg”式正反问句主要有两种：“VP-有？”和“VP-不？”式，这类格式是罗田方言使用频率极高的一种特殊句式，其中否定词“有”“不”一般都可以放置于各类语句末尾形成正反问句，但“VP-有？”和“VP-不？”式各自都蕴含着丰富的体貌特征，因而使用起来有不同的分布特点。

山萘酚调控VPS9D1-AS1/miR-377-3p对人宫颈癌细胞系SiHa增殖和凋亡的影响

目的探讨山萘酚调控长链非编码RNAVPS9D1反义RNA 1(VPS9D1-AS1)/miR-377-3p对人宫颈癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法将人宫颈癌细胞系SiHa分为对照组、山萘酚低、中和高剂量组(5、10和20μmol/L山萘酚)、si-NC组(转染si-NC)、si-VPS9D1-AS1组(转染si-VPS9D1-AS1)、山萘酚+pcDNA-VPS9D1-AS1组(20 mg/L山萘酚+转染pcDNA-VPS9D1-AS1)、山萘酚+anti-miR-377-3p组(20 mg/L山萘酚+转染anti-miR-377-3p)。RT-qPCR、MTT法和集落形成实验分别测定VPS9D1-AS1、miR-377-3p表达、细胞活性和集落形成;流式细胞测量术、划痕试验、Transwell小室法和Western blot分别测定细胞凋亡、迁移、侵袭和Bax及Bcl-2表达;荧光素酶活性检测分析VPS9D1-AS1对miR-377-3p的靶向作用。结果与对照相比,低、中和高剂量山萘酚降低SiHa细胞中VPS9D1-AS1表达水平,集落形成数、细胞活性、Bcl-2蛋白表达水平、迁移距离和侵袭细胞数,且提高了miR-377-3p表达水平、凋亡率和Bax蛋白表达水平;作用均呈浓度依赖性(P<0.05)。SiHa细胞中沉默VPS9D1-AS1后,miR-377-3p表达水平、凋亡率和Bax蛋白表达水平高于si-NC组,且集落形成数、Bcl-2蛋白表达水平、细胞活性、迁移距离和侵袭细胞数低于si-NC组(P<0.05)。VPS9D1-AS1能靶向miR-377-3p。山萘酚处理的SiHa增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响能被过表达VPS9D1-AS1或抑制miR-377-3p所逆转。结论山萘酚通过靶向miR-377-3p下调VPS9D1-AS1,减轻宫颈癌细胞系增殖、迁移和侵袭,以及加速凋亡。

共表达鹅细小病毒VP3-gIL2重组乳酸杆菌的构建及其口服免疫评价

笔者拟构建共表达鹅细小病毒(GPV)VP3和鹅白细胞介素-2(IL-2)的分泌性重组乳酸杆菌,评价口服表达融合蛋白GPV VP3-gIL2的重组乳酸杆菌的免疫效果。通过酶切将VP3基因和IL-2基因连接,并在其5′端连入乳酸杆菌的信号肽基因SP,亚克隆到乳酸杆菌整合表达载体pMJ67,电转化入干酪乳杆菌L.CECT5276,SDS-PAGE和Western blot法鉴定重组菌GPVVP3-gIL2融合蛋白的表达活性。将重组乳酸杆菌口服免疫雏鹅后检测血清GPV抗体、小肠黏液sIgA和脾淋巴细胞增殖情况,评价其免疫效果。结果表明,酶切和测序结果表明成功构建重组表达载体pMJ-SP-GPVVP3-gIL2,PCR证实质粒pMJ-SP-GPVVP3-gIL2成功整合到乳酸杆菌基因组;Western blot表明重组乳酸杆菌分泌表达的融合蛋白GPVVP3-gIL2能与GPV阳性血清特异性结合;淋巴细胞增殖试验表明口服重组菌后能特异地刺激脾淋巴细胞增殖,且在第4、5、6周明显高于GPV VP3组和gIL2组;重组乳酸杆菌口服免疫雏鹅可以产生抗VP3蛋白抗体,且具有中和活性的抗体显著高于GPV VP3组;小肠黏液sIgA细胞生成的数量自第2周较GPV VP3组和疫苗组显著上升。动物攻毒试验结果显示GPV VP3-gIL2融合蛋白免疫组能够获得85%的保护率,表明所构建的重组乳酸杆菌口服后对GPV的攻击具有较好的免疫保护作用。本试验成功构建能稳定表达GPV VP3-IL2融合蛋白的口服乳酸杆菌工程菌,为研究其作为口服疫苗奠定了基础。

共表达口蹄疫病毒VP1-2A基因与猪IL-2重组腺病毒的构建及其免疫效果研究

构建共表达口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因和猪白细胞介素2(IL-2)基因的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。将FMDV VP1-2A基因和猪IL-2基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中,在受体菌中与腺病毒骨架载体pAdenoVatorΔE1/E3同源重组。重组腺病毒质粒转染HEK-293A细胞,得到重组腺病毒rAd5VP1-2A-Po IL-2。MTT法检测重组IL-2的生物活性。用rAd5VP1-2A-poIL-2免疫接种小鼠,同时设免疫单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1和空腺病毒的对照组。通过检测淋巴细胞增殖功能,特异性抗体分泌,IL-4和IFN-γ的表达水平衡量rAd5VP1-2A-poIL-2对小鼠特异性免疫应答的影响。结果显示,成功获得了rAd5VP1-2A-poIL-2,MTT法检测重组IL-2具有生物学活性。小鼠免疫试验结果显示,与rAd5VP1免疫组相比,rAd5VP1-2ApoIL-2免疫既能增强重组病毒诱导小鼠淋巴细胞增殖的能力,又能提高重组病毒诱导小鼠特异性抗体的水平。细胞因子检测结果显示,串联IL-2能促进重组病毒诱导Th1和Th2的分化。研究结果说明,rAd5VP1-2A-poIL-2可望成为口蹄疫的候选疫苗。

传染性法氏囊病病毒上海超强毒株VP2-4-3基因真核表达质粒的构建与表达

应用Long and Accurate—PCR(LA-PCR)技术,扩增克隆了鸡传染性法氏囊病病毒上海超强毒(wIB-DV)的VP2—4—3基因。应用粘性末端连接策略,将VP2-4-3基因克隆人真核表达载体pALTER-MAX。经酶切鉴定,表明VP2-4-3基因为正向插入,位于CMV启动子下游。该真核表达质粒在脂质体的介导下转染Vero细胞,经特异性抗IBDV抗体的免疫荧光检测,发现在细胞内有特异蛋白表达。

共表达口蹄疫病毒VP1-2A与猪IFN-α的重组腺病毒增强小鼠免疫功能

目的构建串联表达口蹄疫病毒VP1-2A和猪干扰素-α的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法将FMDV VP1-2A基因和α干扰素基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体中,得到的阳性穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组。重组腺病毒质粒感染HEK293A细胞,获得重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。用rAd5VP1-2ApoIFN-α免疫BALB/c小鼠,同时设注射单独表达FMDV VP1的重组腺病毒(rAd5VP1)和空腺病毒的对照组。通过ELISA检测血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a及细胞因子IL-4、IFN-γ的表达水平;MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果成功构建了共表达FMDV VP-2A和IFN-α的重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。小鼠免疫实验结果显示,与单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1相比,重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能增强特异性IgG、IgG1和IgG2a的分泌,促进IL-4和IFN-γ的分泌,并能增强小鼠淋巴细胞增殖功能。结论重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能明显增强小鼠特异性免疫应答。

汉语正反同义构式的认知研究--以“VP之前”与“没有VP之前”为例

构式语法与概念整合理论可用于分析以"VP之前"与"没有VP之前"为例的正反同义构式,包括:①"没有VP之前"构式的形成与构式义;②"没有VP之前"构式的生成机制,也就是"VP之前"与"没有VP之前"可以互换的认知理据;③正反同义构式语用动机及互换问题。"没有VP之前"是由语义相似的"没有VP"与"VP之前"两个正反结构进行概念整合而成,因此,"没有VP之前"与"VP之前"能够互换;二者的语义和语用功能差异则导致了各自使用的差别。

肥大细胞对重组口蹄疫病毒VP1-VP4蛋白的模式识别效应

为研究肥大细胞对重组口蹄疫病毒VP1-VP4蛋白的模式识别作用,将VP1-VP4蛋白负载经TLR2/TLR4抑制剂、甘露糖受体抑制剂或清道夫受体抑制剂预处理的小鼠肥大细胞系P815,在不同时间点观察其脱颗粒现象,并用ELISA检测细胞上清液中TNF-α的含量。结果显示,清道夫受体抑制剂处理组在负载VP1-VP4蛋白15和30min时P815细胞脱颗粒数目均极显著低于重组VP1-VP4蛋白组(P<0.001)。在负载VP1-VP4蛋白24h时,各抑制剂处理组的TNF-α含量均极显著低于VP1-VP4蛋白组(P<0.001),其中以甘露糖受体抑制剂处理组含量最低。这表明小鼠肥大细胞系P815主要通过清道夫受体识别FMDV VP1-VP4并引起脱颗粒现象的发生,而甘露糖受体和TLR2/TLR4识别FMDV VP1-VP4则是引起P815细胞分泌TNF-α的主要模式识别机制,其中以甘露糖受体的作用最强。

IL-15基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用

为弄清犬白介素-15(cIL-15)能否增强犬细小病毒VP2DNA疫苗的免疫原性,本研究首先通过RT-PCR方法从犬脾脏淋巴细胞中扩增全长cIL-15cDNA基因,并构建其与Myc-His-tag融合和非融合的表达载体:pcDNA-cIL-15/MH和pcDNA-cIL-15。将pcDNA-cIL-15/MH载体转染HEK293T细胞,确定构建的表达载体能否介导cIL-15进行分泌表达。利用过去构建的VP2表达载体和pcDNA-cIL-15载体共免疫小鼠,用ELISA检测免疫后小鼠血清中的抗体滴度,并用MTT检测小鼠淋巴细胞的增殖活性和用ELISA测定淋巴细胞干扰素-γ和IL-4的表达。结果显示,构建的cIL-15表达载体能够介导cIL-15在真核细胞中的分泌表达。用VP2和cIL-15表达载体共免疫小鼠,抗体水平明显高于VP2载体单免疫组(P<0.01)。当免疫35d时,共免疫组淋巴细胞的刺激指数、干扰素-γ和IL-4的表达水平均明显高于VP2载体单免疫组(P<0.05)。结果表明,cIL-15可明显增强VP2DNA疫苗的免疫原性。

一步法扩增克隆IBDV上海超强毒VP2-4-3基因

分离、纯化了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒 (vvIBDV)上海株SH95的病毒核酸dsRNA ,应用随机引物将RNA反转录成cDNA ,以此为模板一步扩增出A片段前体融合蛋白基因即VP2 4 3基因 ,将其克隆入 pGEM T载体 ,并进行序列分析 ,其与超强毒株HK4 6的核苷酸序列的同源性达 98% ,整个基因有 5个氨基酸差异 ,同源性达99.5 1% (10 0 7/ 10 12 )。

AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因和牛α-干扰素基因的融合表达

将AsiaⅠ型口蹄疫病毒YNBS/58株VP1基因和去信号肽的牛α-干扰素基因共同亚克隆于原核表达载体 pET-28a中,转化 BL21 后经 IPTG诱导,实现了重组融合蛋白 VP1-BoIFN -α在大肠埃希氏菌 BL21 中的高效表达,表达产物经 SDS-PAGE 和 Western blotting 分析,重组的VP1-BoIFN-α蛋白分子质量约为 46 ku,与预期大小相符。薄层扫描分析显示,重组蛋白 VP1-BoIFN-α的表达量占菌体总蛋白的30%,且以包涵体的形式存在。包涵体提取物用 8 mol/L尿素溶解后,在变性条件下利用Ni-NTA柱对VP1-BoIFN-α融合蛋白进行了纯化。

O型口蹄疫病毒VP1-2A基因及多表位片段在毕赤酵母中的表达

利用毕赤酵母表达系统串联表达O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因及O型FMDV多表位片段(CTE),将O型FMDVvp1基因和CTE多表位片段克隆到毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-VP1-2A-CTE并测序。经SalI线性化后,通过电击转化法将重组质粒导入毕赤酵母GS115中,并对表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析。重组质粒通过电转进入毕赤酵母后,能表达相对分子量为41.8KD(CTE)和26.5KD(VP1-2A)的蛋白,经Western blot分析,两种蛋白均具有抗原性。在毕赤酵母中成功地表达O型FMDVVP1-2A蛋白和多表位片段(CTE),为研制新型口蹄疫的基因工程疫苗奠定了基础。