First Serological Evidence of Borna Disease Virus in Healthy Horses from Yucatan, Mexico

Borna Disease Virus (BDV) causes a progressive non-suppurative meningoencephalitis that sometimes occurs in mortality;this disease has been reported for over two centuries ago in horses, sheep and cats in Central Europe and some regions of Asia. Currently, it is known that it causes neurological symptoms in various species of vertebrates including human beings. In Yucatan, Mexico, there is a single serological report about the circulation of BDV in schizophrenia patients;however, nothing is known about the circulation in animals. We obtained serum samples of 100 horses without apparent clinical signs caused by BDV infection, from various sites in the region. Antibodies against BDV were detected by electrochemiluminescence immunoassay (ECLIA) method with three recombinant proteins: BDV p24, BDV p40 and BDV p10 as antigens;obtaining a high seroprevalence of 44% (44/100). This study generates the first report of the probable activity of the BDV in healthy horses in Mexico and has expanded the infiltration area of BDV in the world. Nevertheless, several molecular investigations are required to detect BDV-RNA circulating and find sequences for clarification of the origin of BDV in Mexican horses.

基于单克隆抗体的非洲马瘟病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

【目的】为有效应对非洲马瘟(African horse fever,AHS)传入我国的风险,研究建立一种基于单克隆抗体(Monoclonal antibody,Mab)的非洲马瘟病毒(African horse fever virus,AHSV)特异性的间接ELISA(indirect ELISA,iELISA)抗体检测方法,利用该方法对我国马匹进行非洲马瘟抗体监测。为有效诊断非洲马瘟提供血清学检测手段。【方法】首先利用AHSV VP7抗原免疫小鼠制备针对VP7抗原的单克隆抗体;其次通过对包被抗体浓度、蛋白浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度等反应条件的优化建立AHSV iELISA抗体检测方法。利用1000份血清确定该方法的临界值,并评估该方法的敏感性和特异性。由3位试验操作者分别对AHSV敏控阳性血清进行加速试验测定效价,评估该方法的稳定性。通过利用建立的方法对已知的10份AHSV阳性血清和400份阴性血清进行检测并与国外商品化试剂盒检测结果进行比较;最后用该方法对我国2021年18个省份或地区的947份临床样本进行检测来评估我国马匹中AHSV感染风险。【结果】获得了5株针对AHSV VP7抗原的单克隆抗体。通过对5株单克隆抗体筛选确定3G9单克隆抗体捕获抗原性能最佳。利用3G9抗体作为包被抗体,通过对不同反应条件优化建立了AHSV iELISA抗体检测方法。确定该方法的临界值为0.25;经比对试验证实本研究建立的AHSV iELISA方法的敏感性与商品化试剂盒相当。3位操作者分别对敏控血清进行检测,组内变异系数范围分别为3.19%—7.02%、0%—3.11%、0.27%—5.76%,组间变异系数为1.17%—5.03%。37℃加速试验表明AHSV阳性血清7 d内效价稳定,因此证明该方法具有良好的稳定性。该方法与商品化试剂盒进行比较两者总体符合率为100%。通过对我国18个省或地区的947份马血清进行检测,结果表明AHSV抗体阳性率为0%。【结论】成功筛选到了针对AHSV VP7的单克隆抗体,建立了一种基于单克隆抗体的AHSV iELISA抗体检测方法,该方法具有特异性强、敏感性高、稳定性好,可以实现临床样本中AHSV抗体的检测,因此可以作为AHS血清学监测的一种有效工具。

钓鱼邮件攻击态势和技术发展

基于当前电子邮件技术发展现状,总结梳理我国邮件安全总体态势及面临的风险隐患。从社会工程学视角出发,研究近年来主流网络钓鱼邮件攻击的方式、类型和使用技术,介绍邮件恶意附件常用的恶意木马、自解压文件、动态链接库侧加载等攻击技术的工作原理。分析生成式AI机器人、多片段程序编码混淆等新型信息技术加剧钓鱼邮件攻击的风险隐患,并结合理论和现实情况,就如何防范应对新型钓鱼邮件攻击提出对策建议。

木马病毒分析及其检测方法研究

特洛依木马作为一种新型的计算机网络病毒,它比其它病毒所构成对网络环境中计算机信息资源的危害都要大。文章对木马病毒特点和所采用技术方法进行了归纳研究,详细介绍了木马病毒在植入、加载、隐蔽、反清除、信息采集和网络通信等六方面所采用的技术方法;在此基础上,提出了基于多Agent协作实现未知新木马病毒自动识别新方法。该方法利用驻留在局域网各机器监测Agent和网络监测Agent所收集的证据和初步判断,并由协作Agent对这些证据和初步判断进行融合印证并做出最终结论。初步实验结果表明,该方法可以有效发现冰河木马病毒和广外女生木马病毒。

广义病毒的形式化定义及识别算法

恶意软件的定义是多年来安全领域的研究重点.恶意软件包括病毒、蠕虫和木马.目前仅有病毒的形式化定义,蠕虫、木马没有公认的形式化定义.按照传统病毒的定义,不存在准确识别病毒的算法.文中提出代码是否为病毒是相对于用户而言的,给用户带来损害的代码才是病毒.据此观点,文中以用户意愿为标准,将病毒区分为显式病毒、隐式病毒,并给出了显式病毒的形式化定义和识别算法.理论分析表明,传统病毒以及大部分木马、蠕虫均属于显式病毒,实际案例分析也证实了这一点.

野马鼻肺炎病毒的分离鉴定

从新疆昌吉州吉木萨尔野马饲养繁殖中心送检的野马病料中分离到１株病毒，我们对其进行了鉴定。该病毒株在ＢＨＫ－２１细胞上连传６代出现典型的细胞病变，用适应ＢＨＫ－２１细胞的病毒接种鸡胚成纤维细胞、乳豚鼠肾原代细胞、豚鼠睾丸细胞均出现程度不同的细胞病变。在电镜下可见到典型的马鼻肺炎病毒粒子。病毒对５－碘脱氧尿核苷、氯仿、乙醚等敏感。在ｐＨ３．０下失活，５６℃３０ｍｉｎ灭活。病毒能被马鼻肺炎病毒标准阳性血清所中和。病毒接种乳豚鼠出现典型致死性肝炎。结果表明，所分离病毒为马鼻肺炎病毒，并将该毒株定名为ＰＨ９３－１。

博尔纳病病毒自然感染状况及其核苷酸序列

目的 探讨中国黑龙江地区正常人和马博尔纳病病毒 (BornaDiseaseVirus ,BDV)自然感染状况 ,进而比较分析中国自然感染的BDV与国外精神分裂症患者和患病马的BDV分离株及标准株He/80在种系发生中的关系。方法 用巢式RT -PCR方法检测中国黑龙江地区正常人和马匹单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells ,PBM Cs)中BDV - p2 4基因片段 ,分别随机选取每种样本部分阳性扩增产物进行克隆测序 ,测序结果与国外精神分裂症患者和患病马的BDV分离株以及标准株He/80进行序列比较。结果 76例正常人、34匹马的标本中BDV - p2 4基因的阳性检出率分别为 9 2 % (7/76 )和 2 3 5 % (8/34)。序列分析结果表明 ,中国黑龙江地区正常人和马感染的BDV的核苷酸序列除与一个新亚型株No/98差别较大 (大于 15 % )外 ,与其他国外精神分裂症患者和马源BDV分离株同源性均大于 94 % ,与标准株He/80同源性达到 98%以上。结论 证实黑龙江地区正常人和马中存在BDV的自然感染。该地区感染的BDV与标准株He/80存在高度的同源性。

非洲马瘟研究进展

非洲马瘟病毒引起的非洲马瘟是马属动物的一种急性或亚急性虫媒传染病,在非洲撒哈拉沙漠以南是地方性流行病。传播媒介是库蠓的某些种类,其中最重要的是拟蚊库蠓(Culicoides.Imico-la)。本文概括了非洲马瘟的病原学、流行病学特征、临床表现、诊断及疫苗的研究进展,为进一步了解和研究该病提供依据。

非洲马瘟病毒、西尼罗病毒和马冠状病毒的基因芯片检测技术研究

为探索建立马病病毒基因芯片检测方法,采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒(ASHV)核酸序列,通过分子克隆技术获得西尼罗病毒(WNV)和马冠状病毒(ECV)的特异基因片段。用芯片点样仪逐点分配到处理过的玻片上,制备成检测芯片。以拼接、克隆的核酸序列为模板通过多重不对称RT-PCR进行特异性扩增和荧光标记后滴加到芯片上进行杂交,对杂交结果进行扫描检测和计算机软件分析。结果显示,制备的基因芯片可同时检测和鉴别上述3种病毒,ECV质粒样品、WNV质粒样品检测灵敏度为102拷贝;AHSV质粒样品检测灵敏度为104拷贝。其他病毒材料未出现荧光信号,验证了本方法的特异性。证明基因芯片技术可快速、准确和灵敏地同时进行多种病毒的检测。

抗狂犬病马血清效价ELISA检测试剂的制备

目的制备检测抗狂犬病马血清效价的ELISA试剂。方法采用ELISA间接法。先用抗狂犬病病毒IgY包被酶标板,并确定其最适包被浓度;制备酶标二抗,并确定其最佳使用浓度。对试剂的灵敏度、特异性、精密性、稳定性及与小鼠中和试验结果的相关性进行考核。结果抗狂犬病病毒IgY和酶标二抗的最适浓度分别为10!g/ml和1∶1500,试剂灵敏度为0.072IU/ml,特异性良好,批间及试验间变异系数均小于11%,37℃放置3和5d检测样品结果与放置前差异无显著意义,与小鼠中和试验结果呈正相关。结论所制备的抗狂犬病马血清效价ELISA检测试剂盒,可用于抗狂犬病马血清效价的检测。

非洲马瘟病毒可视化RT-LAMP现场检测方法的建立

为建立非洲马瘟病毒(AHSV)可视化RT-LAMP检测方法,本研究根据AHSV外衣壳蛋白(VP7)基因保守序列设计2对特异性引物,通过反应条件优化建立了AHSV可视化RT-LAMP检测方法。结果显示,本实验所建立RT-LAMP方法的最佳反应条件为62℃1 h;利用该方法检测进口灭活冻干疫苗中的9个血清型AHSV以及马流感病毒、马传贫病毒、马动脉炎病毒和蓝舌病病毒的RNA,结果显示所有血清型AHSV RNA检测均为阳性,其它病毒RNA检测为阴性,该方法特异性较强;该方法最低可检测到3.2×10-9 ng/μL的RNA,敏感性是普通RT-PCR方法的1000倍。利用建立的RT-LAMP方法和普通RT-PCR方法对35份马血和5份驴血样品同时进行检测,结果显示二者阳性和阴性符合率均为100%。本研究在国内外首次建立了AHSV 9种血清型的可视化RT-LAMP检测方法,其具有特异性强、敏感性高、快速和高通量检测的优点,为非洲马瘟(AHS)快速的可视化现场诊断提供可行方法。

非洲马瘟病毒VP7基因的克隆与表达

为获得非洲马瘟病毒VP7蛋白,以用于制备AHS血清学诊断试剂并为AHS新型疫苗的构建奠定基础,笔者采用原核表达系统表达VP7蛋白。在GeneBank中查找非洲马瘟病毒VP7基因序列,人工合成VP7基因,将VP7基因片段克隆插入pBAD/Thio-TOPO表达载体,将重组质粒转入大肠杆菌TOP10。经测序鉴定,筛选获得VP7基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,经L-Arabinose诱导表达VP7融合蛋白抗原。SDS-PAGE分析表明以终浓度为0.2%的L-阿拉伯糖进行诱导,4h后表达可达到高峰,融合蛋白质量约54.72kDa。Westernblotting检测和间接ELISA表明诱导表达的融合蛋白能与非洲马瘟病毒VP7单克隆抗体发生特异性反应,说明蛋白有特异的免疫学活性。

新疆部分地区动物西尼罗病毒感染的调查

为了解新疆部分地区动物西尼罗病毒(WNV)的流行状况,采用一步法实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)对采自新疆伊犁河谷地区以及巴音布鲁克草原的200份马血样、100份驴血样和100份犬血样外周血单核细胞中的WNV包膜蛋白(E)基因片段进行了检测。结果显示,被检血样中未发现WNV E基因片段,目前尚没有证据表明我国新疆部分地区的动物中存在WNV感染。提示,近期内该地区出现WNV流行的可能性小。

甘肃武威磨咀子出土汉代彩绘木马颜料分析与修复保护

武威磨咀子考古出土的汉代彩绘木马,不仅数量多,而且形体较大,具有河西汉马的典型特征;根据彩绘木马的材质状况,其类型属于潮湿而糟朽木器,急需进行修复保护。为此,针对目前彩绘木马的保存现状,本修复工作运用现代X-射线衍射分析技术,对木马彩绘颜料进行了分析,物相结果表明:黑色为墨,白色为石膏,红色为朱砂、铅丹。同时遵循原始制作工艺,选用汉代棺板木作为复原材料对残缺部件进行了复原修复,采用无色、透明的有机玻璃(MMA)材料为其制作了辅助支撑底座,使用Paraloid B-72试剂对表面严重糟朽木质、彩绘层实施加固,使用聚醋酸乙烯酯对脱落部件实施粘接,利用原始铆眼套合与加楔技术对木马部件进行了组装;最后,通过安装辅助支撑底座使受损彩绘木马得到了妥善保护,修复取得良好效果。

非洲马瘟病毒分子生物学研究进展

非洲马瘟病毒属呼肠病毒科环状病毒属，有9个血清型，是一种有10个节段（L1-L3，M4-M6，S7～S10）的双链RNA病毒，编码10个蛋白（VP1～VP7和NS1，NS2，NS3／NS3A）。VP2蛋白在病毒的各蛋白中变异率最大，有15个抗原位点，是病毒的血清型特异性抗原，能与病毒的中和抗体发生反应；VP7蛋白在病毒的各蛋白中最保守，是病毒的血清群特异性抗原。NS1蛋白在感染细胞中形成病毒特异性微管结构；NS3蛋白在病毒各蛋白中变异率位居第二，系统进化分析将NS3分成3个进化群（α，β和γ）。该病毒的分子生物学诊断技术主要有RT-PCR和核酸探针技术。

多功能组合木马架构的研究

对当前主流木马的实现架构进行了分析,根据分析结果,提出了多功能组合木马架构。该架构不仅综合利用现有的木马技术来适应各种复杂的环境,而且实现了木马功能的多样化。最后,给出了该木马架构的一些关键实现技术。

含非洲马瘟病毒部分核酸序列的病毒样颗粒的研制

VP7蛋白是非洲马瘟病毒(AHSV)群特异性蛋白,其编码基因S7基因常被用作AHSV RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测的靶标基因。本研究旨在构建耐RNase的内含AHSV部分核酸序列的病毒样颗粒。首先合成S7基因保守序列,然后克隆到含有噬菌体包膜蛋白基因的带组氨酸纯化标签的假病毒表达载体pNH-MS2his上,成功构建原核表达载体pNH-MS2his-VP7。将重组质粒pNH-MS2his-VP7转化BL21(DE3),并进行诱导表达及镍离子亲和层析纯化后,得到含AHSV部分RNA片段的病毒样颗粒。试验证实该病毒样颗粒均匀性和稳定性良好,可作为AHSV PCR检测的质控品和标准品使用。

上海地区禽与马血清中西尼罗病毒抗体的调查

西尼罗病毒病是一种以鸟类为中间宿主、以马为终末宿主的人兽共患病,给全球公共卫生带来严重威胁。本文用ELISA方法对上海地区禽和马中西尼罗病毒的血清学进行了调查,结果显示,在所调查的2005年到2009年14类95份禽血清和7个区341份马血清中,禽和马的抗体阳性率分别为5.26%和0%。结果表明,该病在上海已通过禽类开始广泛传播,虽尚未发现终末宿主感染,但已存在一定隐患。因此,应进一步监测该病的流行与传播情况。

小鹅瘟马源高免血清的制备及应用

采用JLDA株小鹅瘟抗原,高免马匹后经采血精制可获得滴度为1∶64～1∶128的抗小鹅瘟高免血浆。通过胃蛋白酶消化-硫酸铵盐析的工艺,得到小鹅瘟马源高免血清。按0.5 mL/羽剂量共预防雏鹅52.48万羽,按1 mL/羽～3 mL/羽剂量共治疗感染雏鹅5.66万羽,证实该抗血清效价高,对雏鹅的预防保护率为95.58%,对感染雏鹅的治愈率为92.87%,表明对小鹅瘟防治安全高效。马采血量大,成本低,同时有效地避免了同源动物间其他疫病的感染和强毒的散播,较之用鹅作为血清来源动物经济和社会效益显著。

试论诸葛亮的“木牛流马”

本文在对“木牛流马”的性质、制作者、制作地、功效、形制与特点等方面研究的基础上，认为“木牛流马”是诸葛亮在伐魏期间，为了适应褒斜道等山地运粮需要，指导工匠蒲元等人设计制造出来的木制四轮运载车。木牛流马投入运粮后，虽然没有彻底解决蜀军的粮食供应问题，但毕竟起到了一定积极作用。