斛参增免合剂抑菌剂效力研究与抑菌剂筛选

目的:建立斛参增免合剂的抑菌效力检测方法,筛选适用于斛参增免合剂的抑菌剂。方法:依据《中华人民共和国药典》2020年版4部(通则1121),以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉菌为试验菌株,确定菌落计数方法,建立样品的抑菌效力测定方法;并对添加不同浓度(0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%)苯甲酸钠和山梨酸钾的斛参增免合剂进行抑菌效力测定。结果:添加苯甲酸钠、山梨酸钾浓度分别为0.20%、0.25%、0.30%的斛参增免合剂对5株试验菌的抑菌效力均达到《中华人民共和国药典》2020年版抑菌效力检查法的规定,但添加苯甲酸钠、山梨酸钾浓度分别为0.10%和0.15%的斛参增免合剂的抑菌效力达不到药典要求;0.20%山梨酸钾对大肠埃希菌的抑制作用较同浓度的苯甲酸钠弱。结论:0.20%苯甲酸钠可作为斛参增免合剂抑菌剂的最低添加量。

UPLC-MS法同时测定增免抑瘤颗粒中5种成分

目的建立同时测定增免抑瘤颗粒（黄芪、党参、白芍等）中芍药苷、芍药内酯苷、黄芪甲苷、野黄芩苷和汉黄芩素的UPLC-MS方法。方法采用Waters公司UPLC—Micro2000仪器ESI＋离子模式下选择离子监控，以柳胺酚为内标；色谱分离采用AcquityUPLCBEHC18色谱柱（50mm×2．1mm，1．7μm）；流动相为0．1％甲酸水溶液（含5mmol／L的乙酸铵）（A）-乙腈（B），梯度洗脱；体积流量0．3mL／min；柱温30℃。结果芍药苷、芍药内酯苷、黄芪甲苷、野黄芩苷、汉黄芩素分别在12．63—1616ng／mL（r=0．9998），12．44—1592ng／mL（r=0．9999），12．53。1604ng／mL（r=0．9994），12．94～1606ng／mL（r=0．9997），2．5—160ng／mL（r=0．9998）范围内线性关系良好。平均回收率分别为101．6％（RSD为2．40％），98．84％（RSD为2．75％），97．89％（RSD为1．49％），98．34％（RSD为2．03％）和97．13％（RSD为1．73％）。结论所建立UPLC—MS方法简捷、准确、重复性好，可用于增免抑瘤颗粒剂的质量控制。

增免抑瘤合剂合并化疗对卵巢癌大鼠bcl-2、bax基因表达的影响

目的从卵巢癌大鼠bcl-2、bax凋亡相关基因表达的变化,探讨增免抑瘤合剂辅助治疗卵巢癌的作用机制。方法采用DMBA诱发的原发性卵巢癌大鼠模型,随机分为化疗组(DDP化疗)、合并组(化疗结合增免抑瘤合剂灌胃)、中药组(增免抑瘤合剂灌胃)和模型组(生理盐水灌胃)。共治疗2周,比较各组大鼠bcl-2、bax表达及bcl-2/bax变化。结果治疗各组的bcl-2,bcl-2/bax均较模型组下降,差异显著(P<0.01),其中合并组下降最明显,与中药组及化疗组相比,也具有统计学意义(P<0.01)。合并组的bax表达较其余各组明显提高(P<0.01)。本研究凋亡指数曲线与bax曲线趋于一致性,显示增免抑瘤合剂辅助化疗能促进细胞凋亡。合并组平均凋亡指数最高(33.53%),模型组最低(13.35%),各组间具统计学意义(P<0.01)。结论增免抑瘤合剂合并化疗能下调卵巢癌bcl-2表达,提升bax表达,从而下调bcl-2/bax比值,激活卵巢癌细胞的凋亡途径,这可能是其抗癌增效的作用机制之一。

增免抑瘤颗粒剂干预卵巢癌大剂量化疗后免疫及骨髓抑制的实验研究

目的探讨增免抑瘤颗粒剂对卵巢癌SKOV3荷瘤小鼠顺铂(DDP)化疗后免疫及骨髓抑制的改善情况。方法建立卵巢癌SKOV3荷瘤小鼠模型,测定小鼠单次腹腔注射DDP的LD50。取40只造模成功的荷瘤鼠,随机分为DDP组、ZMYL高、中、低剂量合并DDP组,每组10只,各组均予DDP LD50值单次腹腔注射。注射后次日开始灌胃给药,ZMYL高、中、低剂量组的给药剂量分别为24.0g/kg、12.0g/kg、6.0g/kg,DDP组灌以等量的0.9%NaC l溶液,共干预8天。观察荷瘤小鼠存活时间、存活率、脾脏指数及骨髓DNA含量、血常规等指标变化情况,应用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞亚群比例。结果①DDP腹腔注射LD50为16.36 mg/kg,95%可信限为13.22mg/k-20.39 mg/kg。②各组生存时间以及存活率差异均无统计学意义(P>0.05)。③与DDP组比较,各剂量ZMYL+DDP组均可提高荷瘤小鼠脾脏指数,中高剂量组还可提高骨髓DNA含量,差异均有统计学意义(P<0.05)。④与DDP组比较,各剂量ZMYL+DDP组均可提高荷瘤小鼠外周血中白细胞数,差异均有统计学意义(P<0.05)。⑤与DDP组比较,各剂量ZMYL+DDP组的CD3、CD4、CD8及CD4/CD8差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ZMYL对顺铂大剂量化疗引起的荷瘤小鼠外周血白细胞减少及骨髓DNA含量、脾脏指数的降低有明显的升高作用,能调节机体紊乱的免疫功能,改善骨髓抑制。

增免抑瘤颗粒剂抗卵巢癌荷瘤小鼠皮下移植瘤血管生成作用的实验研究

目的探讨增免抑瘤颗粒剂(Zengmian Yiliu Granule,ZMYLG)抗SKOV3卵巢癌荷瘤小鼠皮下移植瘤血管生成的影响及机制。方法建立SKOV3卵巢癌荷瘤小鼠模型,随机分为对照组、紫杉醇组、ZMYLG高、中、低剂量组(简称ZMYLG高、中、低组),每组8只,连续给药10天。采用细胞膜分化抗原34(CD34)抗体标记新生血管内皮细胞法,计算皮下移植瘤内微血管密度(MVD);免疫组化法、RT-PCR法检测皮下移植瘤内血管内皮生长因子(VEGF)及其受体胎肝激酶-1(FLK-1)、缺氧诱导因子(HIF-1α)蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组比较,紫杉醇组和ZMYLG高、中、低剂量组移植瘤内MVD明显降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。ZMYLG各剂量组均能下调瘤组织中VEGF、FLK-1及HIF-1α蛋白及mRNA表达量(P<0.01,P<0.05)。结论 ZMYLG能抑制肿瘤血管新生,其机制可能与下调HIF-1α表达,改善荷瘤小鼠缺氧状态,抑制VEGF及其受体FLK-1表达,发挥抗肿瘤血管生成作用有关。

增免抑瘤颗粒剂对卵巢癌荷瘤小鼠肿瘤生长及细胞凋亡的影响

目的研究增免抑瘤颗粒剂(ZMYL)对卵巢癌皮下移植瘤的抑制作用,并从细胞凋亡途径探讨其作用机制。方法建立卵巢癌荷瘤小鼠模型,随机分为5组:对照组、紫杉醇组、ZMYL高、中、低剂量组,每组8只。给予相应干预措施。给药10天后处死荷瘤小鼠,称取瘤重计算抑瘤率,电镜观察瘤组织超微结构,TUNEL法检测凋亡指数,实时荧光定量PCR法检测细胞凋亡促进及抑制因子Bax、Bcl-2 mRNA表达。结果①紫杉醇及ZMYL各组均能抑制移植瘤增殖,ZMYL高、中、低剂量组的抑瘤率分别为34.64%、31.60%、30.03%。②病理检查ZMYL各组与紫杉醇组肿瘤细胞均有典型凋亡形态学改变。③与对照组比较,紫杉醇组及ZMYL高、中、低剂量组有诱导肿瘤细胞凋亡作用,差异有统计学意义(P<0.05)。④与对照组比较,紫杉醇组及ZMYL高、中剂量组能上调移植瘤内Bax mRNA表达和下调移植瘤内Bcl-2 mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.05)。其中ZMYL高剂量组上调Bax及下调Bcl-2表达的作用强于ZMYL中剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);ZMYL中剂量组上调Bax以及下调Bcl-2表达的作用强于ZMYL低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ZMYL颗粒剂具有一定的抑制卵巢癌细胞增殖的作用,其机制与上调Bax、下调Bcl-2 mRNA表达、促进肿瘤细胞凋亡有关。

增免合剂对气阴两虚反复下呼吸道感染患儿T细胞功能障碍的调节作用

目的探讨气阴两虚反复下呼吸道感染 (RLRTI)患儿T细胞功能障碍情况及增免合剂的免疫调节作用 ,为有效治疗该病寻找理论依据。方法采用免疫荧光标记和流式细胞仪技术 ,检测了 31例轻型和 2 8例重型RLRTI患儿治疗前感染期及增免合剂治疗后 3个月和 6个月非感染期外周血T细胞亚群和与T细胞活化有关的CD3+/HLA DR+和CD3+/CD2 5+等表面分子的表达情况。结果轻型RLRTI治疗前CD4 +细胞和CD3+/HLA DR+活化T细胞的表达率均明显降低 ,治疗后 3个月CD4 +、CD3+/HLA DR- 静止T细胞、CD3+/HLA DR+活化T细胞及CD3+/CD2 5+表达IL 2R的T细胞的阳性率均明显降低 ;但治疗 6个月后 ,只有CD3+/HLA DR+活化T细胞的表达率低于对照组。重型RLRTI患儿治疗前 ,CD3+、CD4 +、CD3+/HLA DR- 、CD3+/HLA DR+和CD3+/CD2 5+的表达率均降低 ,治疗 3个月和 6个月后上述指标似有恢复 ,但仍低于对照组。增免合剂的临床效果显示 ,轻型总有效率是 10 0 % ,其中显效 78 9% ;重型总有效率是 90 9% ,显效 6 8 2 %。结论气阴两虚RLRTI患儿T细胞数减少 ,T细胞活化功能障碍 ,病情轻、重与T细胞功能障碍情况一致。增免合剂治疗RLRTI临床疗效显著 ,对T细胞功能障碍有明显的调节作用 。

增免抑瘤方辅助治疗对晚期卵巢癌术后化疗不良反应和患者生存质量的影响

目的：探讨增免抑瘤方辅助治疗对晚期卵巢癌术后化疗副反应和患者生存质量的影响。方法：将2009年4月-2012年4月接收的120例处于第Ⅲ-Ⅳ期行卵巢癌细胞减灭术患者。按随机数字表法分为对照组和观察组，每组60例。对照组术后给予紫杉醇联合卡铂化疗6疗程；观察组在对照组基础之上在每次化疗间歇期间给予服用增免抑瘤汤。于化疗前及化疗开始后每3d检查血、尿、粪便、肝肾功能1次，并且记录胃肠道反应以测定患者毒副反应情况，并通过化疗前及化疗过程中给予卡氏评分（Kamofsky）以及癌症治疗功能系统中卵巢癌子系统（FACT—O）以评价患者生存质量。结果：治疗组在毒副反应发生情况（白细胞、中性粒细胞及血红蛋白降低，肌酐、ALT升高、血尿、恶心呕吐）明显低于照组（P〈0．05）；生存质量评定结果，卡氏评分：两组化疗前与化疗期间各期卡氏评分均有统计学差异（对照组P〈0．05，观察组P〈0．01）；两组同期卡氏评分比较具有统计学差异（P〈0．05）。FACT-O评分：两组化疗前与化疗各期各项评分相比具有统计学差异（P〈0．05）；两组各期各项功能评分均具有统计学差异（P〈0．05）。结论：增免抑瘤方辅助治疗对晚期卵巢癌术后化疗能显著降低化疗副反应并且能改善患者生存质量。

养肝增免合剂澄清工艺的优选

目的优选养肝增免合剂的澄清工艺。方法以澄清度和阿魏酸含量为指标,在单因素试验基础上,采用正交试验考察壳聚糖加入量、pH、温度等因素对絮凝澄清工艺的影响;考察醇沉浓度、pH、醇沉时间等因素对醇沉工艺的影响。比较2种工艺在最优条件下的澄清效果。结果壳聚糖絮凝澄清法为最佳工艺,优化工艺为壳聚糖加入量0.1%,体系pH5.0,絮凝时体系温度为45℃。结论优选的工艺条件稳定、可行,缩短了生产周期,降低了成本,可作为养肝增免合剂的澄清工艺。

增免抑瘤方及有效组分对卵巢癌干细胞裸鼠移植瘤Notch/Jagged1信号通路的影响

目的:观察增免抑瘤方(ZMYL)及其有效组分(PAWU)对卵巢癌干细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及对肿瘤组织Notch信号受体(Notch)/Notch信号配体1(Jagged1)信号通路的影响。方法:无血清悬浮培养卵巢癌干细胞,建立卵巢癌干细胞裸鼠移植瘤模型,分为模型组、增免抑瘤方组(ZMYL,36 g·kg^-1),有效组分组(PAWU,5.8 g·kg^-1),顺铂组(DDP,2.5 mg·kg^-1),有效组分联合顺铂组(PAWU,5.8 g·kg^-1+DDP,2.5 mg·kg^-1)。成功造模后,灌胃给药21 d。观察增免抑瘤方及有效组分对裸鼠瘤重的影响;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞的形态变化;免疫组化、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织中Notch信号受体1(Notch1),Notch信号配体1(Jagged1),发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白和mRNA的表达水平。结果:各给药组对裸鼠皮下移植瘤的生长均具有抑制作用,ZMYL组,PAWU组,DDP组,PAWU+DDP组抑瘤率分别为35.91%,32.94%,57.65%,69.05%,与模型组比较,ZMYL组,PAWU组,DDP组,PAWU+DDP组瘤重明显降低(P<0.05),与PAWU组比较,PAWU+DDP组瘤重明显降低(P<0.05);免疫组化结果表明,与模型组比较,ZMYL组,PAWU组,DDP组,PAWU+DDP组Notch1,Jagged1蛋白阳性表达明显减少(P<0.05),ZMYL组,DDP组,PAWU+DDP组Hes1蛋白阳性表达明显减少(P<0.05);与PAWU+DDP组比较,ZMYL组,PAWU组,DDP组Notch1,Jagged1,Hes1蛋白阳性表达明显上调(P<0.05);Real-time PCR结果表明,与模型组比较,ZMYL组,PAWU组,DDP组,PAWU+DDP组Notch1 mRNA表达率明显减少(P<0.05),ZMYL组,PAWU组,PAWU+DDP组的Jagged1,Hes1 mRNA表达率明显减少(P<0.05),与DDP组比较,PAWU+DDP组Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA表达率明显减少(P<0.05)。结论:增免抑瘤方及有效组分可以抑制卵巢癌干细胞裸鼠移植瘤的生长,有效组分与顺铂联合应用有明显的协同增效作用,其机制可能与抑制Notch/Jagged1信号通路的激活相关。