栀子苷调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在动脉粥样硬化形成过程中对Th17/Treg功能的影响

目的:观察栀子苷对载脂蛋白E缺乏(ApoE^(-/-))小鼠Th17/调节性T(Treg)细胞失衡的影响及其作用机制。方法:将50只纯合子ApoE^(-/-)雌性小鼠随机分为对照组、模型组和栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组。对照组小鼠喂养普通饲料,模型组和栀子苷组小鼠喂养高脂饲料。从第8周开始,栀子苷各剂量组每日灌胃栀子苷(25、50、100 mg/kg),连续8周。试验结束时,采用油红O染色评估主动脉及其根部动脉粥样硬化(AS)病变面积比。采用定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-17A和IL-10 mRNA表达;采用流式细胞仪分析脾脏中Th17和Treg细胞百分比;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:油红O染色病变显示,栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组病变百分比低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平升高(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠脾脏中Th17细胞百分比升高,Treg细胞百分比降低(P<0.05)。栀子苷处理恢复了AS小鼠Th17和Treg细胞的平衡。栀子苷抑制PI3K的表达及AKT和mTOR的磷酸化,MHY1485(mTOR活化剂)减弱了栀子苷对T细胞分化的影响。结论:栀子苷抗AS作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号引起的Treg细胞增多和Th17细胞减少有关。

益胃解毒方治疗慢性萎缩性胃炎的效果及对Cyclin E、Th17/Treg比值的影响分析

目的分析益胃解毒方治疗慢性萎缩性胃炎中的效果及对细胞周期蛋白E(Cyclin E)水平、辅助性T细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)比值的影响。方法选取2019年6月至2022年6月在河北省石家庄市中医院确诊的150例慢性萎缩性胃炎患者作为研究对象,按照随机数字表法分为益胃解毒方组、六君子汤组、益胃解毒方+六君子汤组,每组50例。益胃解毒方组使用益胃解毒方治疗,六君子汤组使用六君子汤治疗,益胃解毒方+六君子汤组使用益胃解毒方联合六君子汤治疗,均连续治疗24周。比较3组治疗效果、中医证候积分、Cyclin E水平、Th17/Treg比值、不良反应发生情况。结果益胃解毒方组治疗总有效率高于六君子汤组和益胃解毒方+六君子汤组,且益胃解毒方+六君子汤组高于六君子汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后3组各项中医证候积分低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后益胃解毒方组各项中医证候积分低于六君子汤组和益胃解毒方+六君子汤组,且益胃解毒方+六君子汤组低于六君子汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后3组Cyclin E水平、Th17/Treg比值均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后益胃解毒方组Cyclin E水平、Th17/Treg比值低于六君子汤组和益胃解毒方+六君子汤组,且益胃解毒方+六君子汤组低于六君子汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。益胃解毒方组总不良反应发生率低于六君子汤组和益胃解毒方+六君子汤组,且益胃解毒方+六君子汤组低于六君子汤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论益胃解毒方治疗慢性萎缩性胃炎效果显著,不仅能够改善患者临床症状,调节Cyclin E、Th17/Treg表达,还能减少不良反应发生,值得临床推广应用。

基于Wnt/β-连环蛋白通路探究金天格对肿瘤坏死因子-α诱导的小鼠MC3T3E1细胞生物学功能的影响实验研究

目的:探讨金天格通过调节Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)通路对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的小鼠成骨细胞(MC3T3E1)细胞生物学功能的影响。方法:体外培养MC3T3E1细胞,分为对照组、TNF-α组(50 ng/ml TNF-α)、L-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10^(-6) g/L金天格)、M-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10-5 g/L金天格)、H-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10^(-4) g/L金天格)、Dickkopf-1(DKK-1)组(50 ng/ml TNF-α+10 ng/ml Wnt/β-catenin通路抑制剂DKK-1)、H-金天格+LiCl组(50 ng/ml TNF-α+10^(-4) g/L金天格+20μmol/L Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl)。用CCK-8试剂盒对细胞活性进行检测,用流式细胞仪对细胞凋亡情况进行检测,用酶联免疫吸附试验对细胞白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6水平进行检测,用Western blot对细胞凋亡相关蛋白及Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达情况进行检测。结果:与对照组比较,TNF-α组细胞活性、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞程序性死亡配体-1(PD-L1)蛋白表达降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及B细胞淋巴瘤(Bax)、β-catenin、转录因子7样2(TCF7L2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达升高(均P<0.05)。与TNF-α组比较,L-金天格组、M-金天格组、H-金天格组、DKK-1组细胞活性及Bcl-2、PD-L1蛋白表达升高,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及Bax、β-catenin、TCF7L2、Cyclin D1蛋白表达降低(均P<0.05)。与H-金天格组比较,H-金天格+LiCl组细胞活性及Bcl-2、PD-L1蛋白表达降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及Bax、β-catenin、TCF7L2、Cyclin D1蛋白表达升高(均P<0.05)。结论:金天格可能通过抑制Wnt/β-catenin通路减轻TNF-α诱导的MC3T3E1细胞损伤。

清胆利肝方治疗肝经郁热型带状疱疹临床疗效及对患者T淋巴细胞亚群、血清疼痛物质P、PGE2的影响

目的 探讨清胆利肝方治疗肝经郁热型带状疱疹临床疗效及对患者血清疼痛物质(S)P、前列腺素(PG)E2的影响。方法 收集肝经郁热型带状疱疹患者144例,根据随机数字表法随机分为对照组及观察组,每组72例,对照组给予阿昔洛韦及甲钴胺进行常规治疗,观察组在对照组用药基础上给予清胆利肝方进行治疗,两组均治疗2 w。对比两组临床疗效,检测治疗前后T淋巴细胞亚群、血清SP、PGE2水平的变化情况,同时记录并比较两组疼痛视觉模拟评分(VAS)及不良反应;治疗后随访2个月,观察后遗神经痛(PHN)的发生情况。结果 治疗后,观察组临床总体有效率显著高于对照组(P<0.05);观察组疱疹结痂消退时间及疼痛缓解时间显著短于对照组(P<0.05)。随访2个月,观察组PHN发生率显著低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组血清白细胞介素(IL)-4,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α及CD8^(+)水平与治疗前相比明显降低,且观察组上述指标显著低于对照组(P<0.05);治疗后,两组血清CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)与治疗前相比显著增加,且观察组升高水平显著高于对照组(P<0.05);治疗后与对照组相比,观察组血清中SP、PGE2显著降低(P<0.05)。结论 清胆利肝方可提高肝经郁热型带状疱疹患者T淋巴细胞亚群水平,降低患者血清中PGE2水平及SP含量,有效减少炎症反应并缓解疼痛。

柴郁清肝汤治疗非酒精性脂肪性肝病肝郁脾虚证患者的疗效观察及对Th17/Treg和相关炎症因子的影响

目的:观察柴郁清肝汤治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)肝郁脾虚证患者的临床疗效及对外周血Th17/Treg和相关炎症因子的影响。方法:将60例NAFLD患者随机分为观察组(30例)和对照组(30例),其中观察组给予柴郁清肝汤治疗,对照组给予维生素E软胶囊治疗,治疗8周评价疗效;分别观察2组患者治疗前后肝功、血脂、外周血T淋巴细胞Th17、Treg的百分比及其相关炎症因子(IL-17、IL-22、IL-10)的变化。结果:治疗8周,观察组显效16例,有效12例,对照组显效8例,有效13例,2组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,2组患者ALT、AST、GGT、ALP、TC、TG、LDL-C、Th17、IL-17和IL-22明显降低,Treg明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),2组间比较观察组均明显优于对照组(P<0.05)。结论:柴郁清肝汤能够有效治疗NAFLD患者,改善肝功能和血脂,调节Th17/Treg平衡及其相关炎性因子分泌是其作用机制之一。

UBE2T通过JAK-STAT通路促进甲状腺乳头状癌细胞增殖

目的:探讨泛素结合酶E2T(ubiquitin-binding enzyme E2T,UBE2T)在人甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcino-ma,PTC)中的表达情况及其对患者预后的影响,同时探讨UBE2T在PTC细胞中的功能,旨在识别其可能的调控机制,为未来PTC的靶向治疗策略提供理论依据。方法:采用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,系统分析UBE2T在PTC中的表达及其与患者预后的关系。通过Western blot技术检测UBE2T在甲状腺肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达。在PTC细胞系(TPC-1、KTC-1)中进行UBE2T敲减实验,借助CCK-8、平板克隆、划痕和Transwell实验评估细胞增殖、迁移和侵袭能力,并通过Western blot检测相关蛋白水平的变化。结果:TCGA数据库生物信息学分析表明,PTC组织中UBE2T显著升高,且其表达与患者无疾病间隔、淋巴结转移相关(P<0.01)。UBE2T敲减导致TPC-1和KTC-1细胞增殖活力显著下降,同时抑制细胞迁移和侵袭,诱导STAT磷酸化下调。敲减UBE2T的细胞系加入STAT激活剂后,细胞增殖显著提高。结论:敲减UBE2T能抑制PTC细胞系TPC-1和KTC-1的增殖、迁移和侵袭,UBE2T通过调控JAK-STAT信号通路促进细胞增殖,提示UBE2T有可能成为PTC的治疗靶点。

基于E81T8-Ni2填充盖面的L415M管线钢的焊接工艺评定

L415M管线钢环向焊接接头焊接工艺填充盖面焊丝采用E81T8-Ni2代替E71T8-Ni1,替代原则不符合GB/T 31032—2014《钢质管道焊接及验收》的覆盖原则,需要重新进行焊接工艺评定。基于施工单位焊接工艺需求,为了验证E81T8-Ni2能否用于L415M对接焊缝的填充盖面焊接,采用焊条电弧焊打底,自保护药芯焊丝半自动焊填充盖面组合焊接方法,根焊焊接材料为E6010,填充盖面为E81T8-Ni2,依据GB/T31032—2014进行焊接工艺评定。对评定试样进行外观检查、无损检测、拉伸试验、弯曲试验、刻槽锤断试验以及冲击试验。试验结果表明,L415M管线钢环向焊接接头各项指标合格,拉伸试样断在母材上,焊接接头满足高强匹配要求。焊接工艺评定试验研究成果可为长输管道用L415M管线钢焊接工艺以及焊材选择提供参考。

回火对E101T1-K3C熔敷金属显微组织和力学性能的影响

采用E101T1-K3C低合金高强钢药芯焊丝对EH620钢进行焊接。焊接接头分别在460℃、580℃进行保温1 h回火热处理,应用金相显微镜、材料试验机、冲击试验机、扫描电子显微镜等对试样进行分析与测量。结果表明:焊态下熔敷金属显微组织为条状铁素体+少量贝氏体+第二相颗粒,熔合区显微组织为片状铁素体+马氏体+第二相颗粒。焊接接头经过460℃×1 h焊后回火处理后,焊缝区的显微组织为铁素体+少量贝氏体+第二相颗粒,熔合区组织为铁素体+回火屈氏体+第二相颗粒。焊接接头经过580℃×1 h回火处理后,焊缝及熔合区显微组织均为铁素体+回火索氏体+第二相颗粒;熔敷金属屈服强度由725 MPa下降589 MPa,-40℃冲击吸收能量KV2由71 J提高到114 J;维氏硬度值在焊接接头焊缝及热影响区的分布趋向一致,焊接接头具有理想的力学性能。

羊膜间充质干细胞经PGE2/EP2途径调节类风湿关节炎患者T细胞免疫

目的探讨人羊膜间充质干细胞(AMSCs)调节类风湿性关节炎(RA)患者T细胞免疫的作用与涉及PGE2/EP2途径的机制。方法含RA患者自体血浆的培养基非接触共培养AMSCs与RA患者外周血来源T细胞,实验分为T细胞组、AMSCs组、共培养组和EP2组,流式细胞术检测T细胞亚群和炎症因子,ELISA法检测PGE2和IL-6,Western blot检测PI3K、Akt及其磷酸化蛋白水平。结果AMSCs降低RA患者T细胞增殖数量和Th17细胞比例,增高Treg细胞比例和Treg/Th17比值,减少共培养上清液IL-17含量,这些效应可被40 nmol/L的EP2受体拮抗剂AH6809所阻断。与AMSC组相比,共培养组细胞培养上清液中IL-1β、IL-6和IL-8的含量明显降低,EP2受体拮抗剂组与共培养组比较无明显差异。AMSCs增加T细胞p-PI3K蛋白水平,降低p-AKT蛋白水平,EP2受体拮抗剂只逆转AMSCs对p-AKT蛋白的下调。结论AMSCs抑制RA患者T细胞增殖、上调Treg/Th17和下调IL-17分泌的作用机制涉及激活PGE2/EP2途径。

核因子E2相关因子/血红素加氧酶1及血栓素B2T/6-酮-前列腺素F1α信号通路在宫颈癌根治术后发生深静脉血栓大鼠模型中的作用机制

目的:本研究旨在探讨核因子E2相关因子(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)及血栓素B2(TXB2)/6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)信号通路在宫颈癌根治术后发生深静脉血栓大鼠模型中的作用机制。方法:购买60只4~6周龄裸鼠,体重(180±20)g,随机将60只大鼠分为空白对照组、模型组及深静脉血栓组各20只。其中空白组正常饲养1周;模型组及深静脉血栓组均建立宫颈癌动物模型,模型组造模成功后,正常饲养;深静脉血栓组给予宫颈癌根治术治疗,正常饲养。观察宫颈癌根治术后发生深静脉血栓HE染色切片,原位末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠血管组织内皮细胞凋亡情况,全自动凝血分析仪检测各组大鼠凝血指标,酶联免疫吸附法测定TXB2/6-Keto-PGF1α水平,免疫印迹检测Nrf2/HO-1信号通路。结果:实验过程中,三组大鼠均未出现意外死亡,存活率均为100%。模型组未形成血栓,深静脉血栓组造模后1、3、7、14 d成栓率依次为50.00%(10/20)、95.00%(19/20)、100%(20/20)。大鼠下腔静脉产生的血栓尾部为红色血栓、中间为混合血栓、头部为白色血栓。深静脉血栓组血管内皮凋亡率高于模型组(P<0.05)。深静脉血栓组凝血酶时间、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间低于模型组及空白对照组,D-二聚体高于模型组及空白对照组(均P<0.05);模型组凝血酶时间、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间低于空白对照组,D-二聚体高于空白对照组(均P<0.05)。深静脉血栓组TXB2、TXB2/6-Keto-PGF1α高于模型组及空白对照组,6-Keto-PGF1α低于模型组及空白对照组(均P<0.05);模型组TXB2、TXB2/6-Keto-PGF1α高于空白对照组,6-Keto-PGF1α低于空白对照组(均P<0.05)。深静脉血栓组Nrf2、HO-1低于模型组及空白对照组,模型组Nrf2/HO-1低于空白对照组(均P<0.05)。结论:TXB2/6-Keto-PGF1α、Nrf2/HO-1信号通路在宫颈癌根治术后深静脉血栓大鼠中异常表达,也是宫颈癌根治术后深静脉血栓形成的作用机制之一。

对改善幼儿“对不起”行为的教育建议——基于T.E.T教师效能训练的理念

“对不起”是幼儿在与同伴发生冲突时经常使用的道歉语,对“对不起”的认识和行为模式会影响幼儿对自我与他人、责任与义务等边界感的建立。当前,幼儿道歉大都存在表面化、形式化等问题,本文基于T.E.T教师效能训练的理念,对改善幼儿的道歉行为提出一些有针对性的教育建议,为幼儿园教师引导幼儿学会道歉提供借鉴。

食管癌来源外泌体通过E2F4对CD4+T细胞向Th17细胞分化的影响

目的:研究食管癌来源外泌体对CD4+T细胞向Th17细胞分化的可能作用机制。方法:分离人正常食管上皮细胞HEEC和人食管癌细胞Eca-109来源外泌体(即HEEC-Exo、Eca-109-Exo),同时构建稳定表达的sh-NC和sh-E2F4的Eca-109细胞株并分离其外泌体(即sh-NC-Exo、sh-E2F4-Exo)。应用所得的外泌体处理CD4+T细胞;此外,应用稳定表达sh-NC和sh-E2F4的Eca-109细胞株建立食管癌异种移植小鼠模型。流式细胞术检测CD4+T细胞中Th17细胞比例;qRT-PCR检测E2F转录因子4(E2F4)mRNA表达;Western blot检测E2F4、维甲酸相关核孤儿受体γt(ROR-γt)和IL-17蛋白表达;ELISA试剂盒检测IL-17的含量。结果:与PBS组相比,HEEC-Exo组CD4+T细胞中Th17细胞比例、ROR-γt蛋白的表达、IL-17含量以及E2F4mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与HEEC-Exo组相比,Eca-109-Exo组CD4+T细胞中Th17细胞比例、ROR-γt蛋白表达、IL-17含量以及E2F4 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。与Eca-109-Exo组相比,sh-NC-Exo组CD4+T细胞中Th17细胞比例、ROR-γt蛋白表达、IL-17含量以及E2F4 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与sh-NC-Exo组相比,shE2F4-Exo组CD4+T细胞中Th17细胞比例、ROR-γt蛋白表达、IL-17含量以及E2F4 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05)。与Eca-109组相比,sh-NC组小鼠肿瘤大小和E2F4、ROR-γt、IL-17蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与sh-NC组相比,sh-E2F4组小鼠肿瘤大小和E2F4、ROR-γt、IL-17蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:食管癌来源外泌体可能通过E2F4促进CD4+T细胞向Th17细胞分化,从而促进肿瘤生长。

黄芪多糖对过敏性鼻炎大鼠Treg/Th17细胞免疫平衡和炎症因子的影响

目的:探讨黄芪多糖对过敏性鼻炎大鼠Treg/Th17细胞免疫平衡和炎症因子的影响。方法:将50只SD大鼠分为空白组、模型组、氯雷他定组和黄芪多糖低剂量组、黄芪多糖高剂量组,每组10只。应用卵白蛋白+氢氧化铝粉建立过敏性鼻炎基础致敏模型。观察大鼠基础行为学改变,观察HE染色的病理情况,采用ELISA法检测大鼠血清IgE、白介素-10(IL-10)、白介素-17(IL-17)水平,流式细胞术检测血清Th17/Treg分布。结果:与模型组比较,氯雷他定组、黄芪多糖低剂量组、黄芪多糖高剂量组鼻黏膜组织上皮组织较为完整,有少量的炎性浸润;模型组行为学积分和血清IgE、IL-17、Th17水平显著升高(均P<0.05),IL-10、Treg水平显著降低(均P<0.05)。与模型组比较,黄芪多糖高剂量组大鼠IL-10、Treg水平显著升高(均P<0.05),行为学积分和血清IgE、IL-17、Th17水平显著降低(均P<0.05)。结论:黄芪多糖可有效缓解过敏性鼻炎大鼠模型的症状,机制可能与提高免疫功能、抑制炎症反应有关。

血清Sema 5A、RVE1水平与桥本甲状腺炎患者Th17相关因子、甲状腺功能及相关抗体的相关性研究

目的探讨血清神经轴突导向分子5A(Sema 5A)、溶解素E1(RVE1)水平与桥本甲状腺炎(HT)患者辅助性T细胞(Th)17相关因子、甲状腺功能以及甲状腺特异性自身抗体的相关性。方法选择2019年2月至2021年8月该院收治的109例HT患者(HT组),分为甲状腺功能正常组(39例)、亚临床甲减组(47例)、临床甲减组(23例),另选择58例甲状腺功能正常的体检健康者为对照组。检测各组血清Sema 5A、RVE1、甲状腺激素[促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)]、Th17相关因子[白细胞介素(IL)-17、IL-23]以及甲状腺特异性自身抗体[抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)和甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]水平。分析HT患者血清Sema 5A、RVE1水平与TSH、FT3、FT4、IL-17、IL-23、TgAb、TPOAb等的相关性。结果HT组血清Sema 5A、IL-23、IL-17、TSH、TgAb、TPOAb水平,外周血Th17占比高于对照组(P<0.05),血清RVE1、FT3、FT4水平低于对照组(P<0.05)。临床甲减组血清Sema 5A、IL-23、IL-17、TSH、TgAb、TPOAb水平,外周血Th17占比高于亚临床甲减组、甲状腺功能正常组(P<0.05),血清RVE1、FT3、FT4水平低于亚临床甲减组、甲状腺功能正常组(P<0.05)。HT患者血清Sema 5A水平与外周血Th17占比、IL-23、IL-17、TSH、TgAb、TPOAb呈正相关(P<0.05),RVE1与上述指标呈负相关(P<0.05)。结论HT患者血清Sema 5A水平升高,RVE1水平降低,且与TgAb、TPOAb、TSH、外周血Th17占比、IL-17、IL-23水平增加有关。

L-NMMA对过量氟暴露引起的小鼠MC3T3E1成骨细胞中NO/iNOS表达的影响

目的探讨L-单甲基-精氨酸(L-NMMA)与过量氟化钠(NaF)共培养对小鼠颅顶前成骨(MC3T3E1)细胞中一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法将MC3T3E1成骨细胞分为空白组(只含培养基)、NaF染毒组(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L)及L-NMMA染毒组(0、5、10、20、40、80 mol/L),采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞存活率,并筛选最佳染氟浓度和最佳L-NMMA用药浓度;再将MC3T3E1成骨细胞分为对照组(0.0 mmol/L NaF)、低氟组(1.0 mmol/L NaF)、高氟组(4.0 mmol/L NaF)、低氟+L-NMMA组(1.0 mmol/L NaF+20μmol/L L-NMMA)、高氟+L-NMMA组(4.0 mmol/L NaF+20μmol/L L-NMMA)、L-NMMA组(20μmol/L L-NMMA),处理24 h,采用硝酸还原酶法检测细胞中NO含量,蛋白免疫印迹法及实时荧光定量PCR法分别检测iNOS蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组相比,1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L NaF染毒组及80μmol/L L-NMMA染毒组MC3T3E1成骨细胞存活率降低(P<0.05),选择1.0 mmol/L和4.0 mmol/LNaF为染氟浓度、20μmol/LL-NMMA用药浓度进行后续实验;与对照组比较,低氟组、高氟组MC3T3E1成骨细胞中NO含量增加(P<0.05),低氟+L-NMMA组中NO含量低于低氟组(P<0.05),高氟+L-NMMA组细胞中NO含量低于高氟组(P<0.05);与对照组相比,高氟组MC3T3E1成骨细胞中iNOS蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05);与高氟组比较,高氟+L-NMMA组细胞中iNOS蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论过量氟可致MC3T3E1成骨细胞损伤、iNOS蛋白和mRNA表达增强、细胞中NO含量增加,L-NMMA与氟共培养后可减弱这一效应,提示L-NMMA对过量氟所致MC3T3E1成骨细胞损伤有一定的保护作用。

C-myb蛋白、4E-BP1蛋白在NK/T细胞淋巴瘤中的表达与预后的关系

目的探讨转录激活因子Myb(C-myb)、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白-1(4E-BP1)蛋白在NK/T细胞淋巴瘤中的表达及与预后的关系。方法回顾性选取2017年12月至2019年12月在秦皇岛市第一医院治疗的NK/T细胞淋巴瘤患者34例作为观察组,同时选取腺样体肥大组织30例作为对照组。采用免疫组织化学法检测C-myb、4E-BP1表达,比较两组患者C-myb、4E-BP1表达情况,分析观察组C-myb、4E-BP1表达与临床病理关系。采用Spearman秩相关分析C-myb和4E-BP1表达相关性。随访患者总体生存时间,分析C-myb、4E-BP1表达与预后的关系。结果观察组C-myb和4E-BP1阳性表达率分别为55.88%和61.76%,明显高于对照组(10.00%、6.67%),差异均有统计学意义(P<0.05)。临床分期Ⅲ~Ⅳ患者C-myb阳性表达率为91.67%,明显高于Ⅰ~Ⅱ患者(36.36%),差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、原发部位、B症状、国际预后指数(IPI)指数及淋巴结侵犯患者C-myb阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。IPI指数≤2分患者4E-BP1阳性表达率为76.00%,明显高于IPI指数>2分患者(22.22%),差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、原发部位、B症状、临床分期及淋巴结侵犯患者4E-BP1阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C-myb和4E-BP1表达呈正相关(r_(s)=0.642,P<0.05);C-myb阳性表达和阴性表达患者中位总生存时间比较,差异无统计学意义(P>0.05);4E-BP1阳性表达患者中位总生存时间为24个月(95%CI:21.15~26.85),明显短于4E-BP1阴性表达患者的33个月(95%CI:32.20~33.80),差异有统计学意义(P<0.05)。结论NK/T细胞淋巴瘤中C-myb和4E-BP1蛋白表达上调,与临床分期、IPI指数有一定关系,其中4E-BP1表达与患者预后可能有一定联系。

泛素结合酶E2T增强鼻咽癌细胞放疗敏感性的机制研究

目的 探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响及相关分子机制。方法 采用qRT-PCR检测鼻咽癌细胞CNE2及正常鼻咽上皮细胞NP69中UBE2T的表达水平。将UBE2T小干扰RNA序列(UBE2T-siRNA)及其阴性对照序列(NC-siRNA)转染至CNE2细胞,联合或不联合放射治疗,并分为Control组、NC-siRNA组、UBE2T-siRNA组、放疗组、NC-siRNA+放疗组、UBE2T-siRNA+放疗组。采用CCK-8检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果 CNE2细胞中UBE2T mRNA表达水平高于NP69细胞(P<0.05);与Control组比较,NC-siRNA组细胞中UBE2T mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),UBE2T-siRNA组细胞中UBE2T mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与Control组比较,放疗组、UBE2T-siRNA组细胞增殖活性均降低,细胞凋亡率均升高(P<0.05);与放疗组和UBE2T-siRNA组比较,UBE2T-siRNA+放疗组细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。与Control组比较,放疗组、UBE2T-siRNA组细胞中Wnt3α、β-catenin、c-myc蛋白表达均降低(P<0.05);与放疗组和UBE2T-siRNA组比较,UBE2T-siRNA+放疗组细胞中Wnt3α、β-catenin、c-myc蛋白表达均降低(P<0.05)。结论 UBE2T通过调控Wnt/β-catenin信号通路增强鼻咽癌细胞的放疗敏感性。

慢性自发性荨麻疹患者血清25-羟维生素D、调节性T细胞及总IgE水平的相关性分析

目的分析慢性自发性荨麻疹(chronic spontaneous urticaria,CSU)患者血清中25-羟维生素D[25-hydroxyvitamin D,25-(OH)D]、调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)、总免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)水平的相关性。方法选择作者医院2020-01/2021-10月收治的84例CSU患者作为观察组,另选取84例同期健康体检者作为对照组,按照CSU病情分级将观察组患者分为轻度组(n=34),中度组(n=27),重度组(n=23)。分别检测并比较观察组与对照组研究对象的血清25-(OH)D、Treg比例以及总IgE水平。分析不同CSU病情分级患者的血清25-(OH)D、Treg比例以及总IgE水平的差异。采用Pearson相关性分析明确CSU患者血清25-(OH)D、Treg比例及总IgE水平的关系。结果观察组血清25-(OH)D、Treg比例均低于对照组,而总IgE水平高于对照组(P均<0.05)。重度组患者的血清25-(OH)D、Treg比例均低于轻度组、中度组(P均<0.05),且中度组患者的血清25-(OH)D、Treg比例均低于轻度组(P<0.05);重度组患者血清总IgE水平均高于轻度组、中度组(P均<0.05),中度组总IgE水平高于轻度组(P<0.05)。Pearson相关性分析发现,CSU患者血清25-(OH)D与Treg比例呈正相关(P<0.05),血清25-(OH)D、Treg比例均与总IgE水平呈负相关关系(P均<0.05)。结论CSU患者血清25-(OH)D水平存在明显的降低,且和Treg失衡以及总IgE所介导的Ⅰ型变态反应有关。

腺苷诱导耗竭型CD8^(+)T细胞影响肾癌细胞迁移及凋亡

目的探索腺苷是否诱导耗竭型T细胞生成以及对肾透明细胞癌细胞迁移和凋亡的影响。方法流式细胞术检测肾透明细胞癌及癌旁组织中CD8^(+)T细胞及耗竭表型分子3(TIM-3)的表达。生物信息学分析肾透明细胞癌及癌旁组织中基因表达差异,寻找影响T细胞耗竭基因。利用shRNA技术构建稳定敲除该基因的肾透明细胞癌786-O细胞株,检测细胞的迁移、凋亡等生物学行为。制备不同肿瘤条件培养基,培养CD8^(+)T细胞,研究敲除基因后的肾透明细胞癌细胞对耗竭型T细胞的影响。结果肾透明细胞癌与癌旁组织相比高表达CD8^(+)T细胞及TIM-3。生物信息学分析发现腺苷合成限速酶NT5E(CD73)在肾透明细胞癌中的表达高于癌旁组织。检测临床标本发现肾透明细胞癌组织中腺苷及CD73的表达高于癌旁组织。与对照组比较,敲除NT5E组的786-O细胞迁移能力下降及凋亡增加。敲除NT5E的肿瘤条件培养基培养的CD8^(+)T细胞中程序性死亡蛋白1表达减少,抑制T细胞增殖能力下降。结论肾透明细胞癌组织存在耗竭型CD8^(+)T细胞、腺苷及CD73的高表达。敲除NT5E的肾透明细胞癌786-O细胞迁移能力下降、凋亡增加。敲除NT5E可减少腺苷合成,减少耗竭型T细胞的生成。

UBE2T在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的研究泛素结合酶E2T(ubiquitin binding enzyme E2T,UBE2T)在子宫内膜癌组织中表达及临床意义。方法通过TCGA数据库分析UBE2T在正常子宫内膜组织与子宫内膜癌组织中的表达情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术检测58例子宫内膜癌组织和30例正常子宫内膜组织中UBE2T mRNA的表达情况。选取105例子宫内膜癌组织、35例不典型增生子宫内膜组织以及35例正常子宫内膜组织中,采用免疫组织化学法检测各组UBE2T蛋白的表达情况,并分析UBE2T表达与患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier法分析UBE2T表达对子宫内膜癌患者预后的影响。结果TCGA数据库显示,UBE2T mRNA在不同子宫内膜组织中的表达比较,差异有统计学意义;在配对的子宫内膜癌组织及其癌旁组织中比较,差异有统计学意义。子宫内膜癌组织中UBE2T mRNA表达水平明显高于正常子宫内膜组织。UBE2T蛋白在子宫内膜癌组织中的阳性表达率高于正常子宫内膜组织及不典型增生子宫内膜组织;UBE2T在子宫内膜癌组织中的阳性表达在国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期、组织分化程度方面比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,UBE2T阳性表达患者的平均生存时间短于阴性表达患者。COX回归分析结果显示,FIGO分期、淋巴结转移及UBE2T的表达是子宫内膜癌患者预后的影响因素,其中FIGO分期、UBE2T的表达是影响子宫内膜癌预后的独立危险因素。结论子宫内膜癌组织中UBE2T表达水平增高,与子宫内膜癌的发生、发展和不良预后密切有关,有可能成为子宫内膜癌的辅助治疗。