松脂醇二葡萄糖苷激活Wnt/β-catenin信号通路保护成骨细胞

背景:松脂醇二葡萄糖苷可以促进骨形成与骨基质的合成,加速骨组织修复,但其对成骨细胞的影响和作用机制仍需进一步探索。目的:基于Wnt/β-catenin信号通路探讨松脂醇二葡萄糖苷对地塞米松干预成骨细胞的影响和作用机制。方法:设置不同浓度的地塞米松组和松脂醇二葡萄糖苷组对成骨细胞干预24 h,筛选最佳干预浓度;使用地塞米松、松脂醇二葡萄糖苷和Wnt/β-catenin抑制剂XAV-939对成骨细胞进行干预,设置对照组、地塞米松组、抑制剂组、松脂醇二葡萄糖苷组、松脂醇二葡萄糖苷+抑制剂组。CCK-8法检测细胞活性,检测各组细胞碱性磷酸酶和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7酶活性,Annexin V/PI染色与EdU法检测细胞凋亡与增殖情况,Real-Time qPCR检测Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA表达水平,Western Blot检测Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的蛋白表达水平。结果与结论:①地塞米松和松脂醇二葡萄糖苷干预成骨细胞24 h后,发现浓度为10μmol/L的地塞米松细胞抑制率为实验最佳干预浓度;松脂醇二葡萄糖苷浓度在100μmol/L时,细胞增殖最为明显;②与地塞米松组比较,松脂醇二葡萄糖苷组的碱性磷酸酶活性显著增强(P<0.05),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7酶活性显著降低(P<0.05);Annexin V/PI染色和EdU法细胞增殖检测结果表明,松脂醇二葡萄糖苷可抑制地塞米松干预后成骨细胞的凋亡,促进成骨细胞增殖;③与地塞米松组和抑制剂组比较,松脂醇二葡萄糖苷组和松脂醇二葡萄糖苷+抑制剂组中Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);④结果表明,松脂醇二葡萄糖苷可以抑制地塞米松干预后的成骨细胞凋亡,通过激活Wnt/β-catenin信号通路来保护成骨细胞活性,促进成骨细胞增殖,可能发挥延缓激素性股骨头坏死的作用。

不同炮制温度对盐杜仲主要有效成分含量的影响

比较盐杜仲不同温度下炮制前后主要化学成分松脂醇二葡萄糖苷的变化,推测其适宜炮制温度并优化炮制工艺参数。依据《中华人民共和国药典》(2020年版)中的“断丝”指标,考察不同炮制温度对杜仲“断丝”程度的影响,优化杜仲炮制工艺参数。采用高效液相色谱(HPLC)分析杜仲生品和盐炙品主要化学成分的差异,研究炮制工艺对杜仲质量的影响。结合实验数据确定杜仲炮制温度为110℃,时间控制在8 min左右。高温炮制后杜仲化学成分含量明显降低,其主要有效成分松脂醇二葡萄糖苷(PDG)也大幅减少。采用HPLC方法,分析炮制前后杜仲主要化学成分的变化,为杜仲盐炙工艺和盐杜仲的质量控制提供了更可行的参数依据。

基于Nrf2通路探讨松脂醇二葡萄糖苷改善小鼠骨质疏松的机制研究

目的分析松脂醇二葡萄糖苷(Pinoresinol diglucoside,PD)改善骨质疏松的作用机制。方法微型CT分析小鼠小梁骨体积/总体积(bone volume/total volume,BV/TV)、平均小梁厚度(average trabecular thickness,Tb.Th)、平均小梁数目(average number of trabeculae,Tb.N)和平均小梁间距(average trabecular spacing,Tb.Sp);HE染色检测骨组织损伤;TRAP染色分析成骨细胞数量/骨周长(number of bone cells/bone circumference,N.Ob/B.Pm)、空泡率以及破骨细胞表面/骨表面百分比(osteoclast surface/bone surface,Ocs/BS);ELISA检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrateresistant acid phosphatase,TRAP)相对活性,超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;Wb检测核转录因子红细胞系2相关因子2(Nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)和HO-1表达。结果与假手术组相比,模型组小鼠骨丢失量增加,BV/TV、Tb.Th、Tb.N、N.Ob/B.Pm、ALP相对活性、SOD、GSH、Nrf2和HO-1表达水平明显下降,Tb.Sp、空泡率、Ocs/BS、TRAP相对活性和MDA水平明显上升(P<0.05);E2组和PD组小鼠与模型组小鼠变化趋势完全相反(P<0.05),PD组和E2组小鼠上述指标无显著差异(P>0.05)。结论PD可通过激活Nrf2信号通路改善小鼠骨质疏松症状。

基于PI3K/Akt信号通路探讨松脂醇二葡萄糖苷对兔膝骨性关节炎软骨细胞保护机制的研究

目的探讨松脂醇二葡萄糖苷对兔膝骨性关节炎软骨细胞保护机制。方法制作兔OA模型,建模4周后,不同剂量的PDG干预5周;1周后取膝关节组织进行组织学分析(番红染色)并行Mankin评分;QRT-PCR/Western blot检测各组软骨组织中Aggrecan/collagen type II和MMP-1/MMP-3/MMP-13/TIMP-1的表达;ELISA/qRT-PCR检测各组兔血清中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的表达;TUNEL检测各组兔子软骨组织中软骨细胞凋亡情况;Western blot/免疫组化/qRT-PCR检测软骨组织中PI3K/Akt通路(PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt),以及Bcl-2,Bax等相关因子的表达。结果造模后3周后,模型兔出现关节强直样改变。PDG局部注射给药可缓解关节肿胀,缓解炎症反应。PDG给药可有效降低模型兔的炎症指标。PDG可能对膝骨性关节炎模型的软骨下骨形成有促进作用。PDG高剂量组的软骨破坏程度相对较轻,Akt信号通路在该模型中被激活。结论松脂醇二葡萄糖苷对兔膝骨性关节炎软骨细胞具有保护作用,PI3K/Akt信号介导了该保护机制。

UPLC-QAMS法同时测定连翘花中5种成分的含量

目的 建立同时测定连翘花中芦丁、连翘酯苷A、(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素5种成分的方法。方法 采用超高效液相色谱(UPLC)法进行检测。色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3 C_(18);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱);流速为0.3 mL/min;检测波长为275 nm(0~8 min)、330 nm(8~10.5 min)、275 nm(10.5~32 min);柱温为25℃;进样量为1μL。以芦丁为参照物,采用一测多评(QAMS)法计算各成分含量,并与外标法进行比较。结果 QAMS法所得连翘花中连翘酯苷A、(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素的含量分别为7.472~7.671、2.919~2.986、1.439~1.486、1.523~1.566mg/g,外标法测定结果为7.454~7.664、2.913~2.996、1.444~1.484、1.519~1.562 mg/g,两种方法测定结果无明显差异,相对偏差<1.0%。结论 本研究成功建立了UPLC-QAMS法同时测定连翘花中5种成分的含量,且该方法与外标法所得结果无明显差异,可用于连翘花的质量控制。

UPLC同时测定杜仲中6种有效成分的含量

建立UPLC同时测定杜仲药材中桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷的分析方法。以Waters BET C18（2.1×150 mm,1.7μm）为色谱柱,0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液进行梯度洗脱,检测波长为205 nm,流速0.25 m L/min,柱温45℃。在该色谱条件下,杜仲中的六种有效成分能得到较好的分离,方法的加样回收率为96.92%~101.01%,RSD〈3%。39批杜仲药材中六个被测成分的总含量0.4406%~4.2282%,差异较大。该方法简便、准确,重复性好,可用于杜仲中桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷的含量测定,为杜仲的质量控制研究提供依据。

威灵仙的化学成分研究

威灵仙是一种重要的中药材。运用快速硅胶柱层析和制备型HPLC技术对威灵仙的乙酸乙酯提取物进行分离,纯化得到7个化合物,它们是松脂素(Pinoresinol,1),Epipinoresinol(2),罗汉松脂素(Matairesinol,3),Salicifoliol(4),3,4,5-三羟基苯甲酸(5),4-羟基-3,5-二甲氧基-苯甲酸(6),异阿魏酸(7),化合物的结构通过NMR和MS的分析得到确定。运用分析型HPLC和GC-MS色谱分析方法,可以在威灵仙药材提取物中快速、准确地鉴定该类化合物。化合物1,2,3,4是木脂素类化合物,具有多种重要的生理活性,潜在药用明显。

杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的测定

目的探讨改进杜仲中松脂醇二葡萄糖苷测定方法。方法采用"石油醚除胶-甲醇提取"法提取杜仲特征性成分松脂醇二葡萄糖苷,色谱条件为Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(25∶75),检测波长为277 nm,柱温为30℃。结果改进方法测得松脂醇二葡萄糖苷含有量高于药典法,松脂醇二葡萄糖苷在0.499 6～7.494μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.03%,RSD为2.18%。结论该方法简单、准确、重复性好,可用于杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的测定。

杜仲原生皮与再生皮中松脂醇二葡萄糖苷的含量比较

目的:为了评价杜仲再生皮质量,测定了杜仲三次再生皮中降压有效成分松脂醇二葡萄糖苷(P inores-inol d iglucoside,PDG)含量。方法:采用HPLC法,色谱柱为国产YWG C18柱(46×250 mm,10μm),以甲醇-水(30∶75)为流动相,流速1.0 m l/m in,柱温为室温,检测波长为277 nm,进样量为10μl。结果:第一次剥皮后的再生皮中PDG含量略高于原生皮;第二次剥皮后的再生皮中PDG含量与剥皮前的一次再生皮相当;第三次剥皮后的再生皮中PDG含量明显低于剥皮前的二次再生皮。结论:为了保证药材质量,杜仲剥皮再生可进行两次,每次间隔时间不少于5年,第三次剥皮后的再生皮中PDG含量有待提高。

杜仲提取物中五个成分血浆蛋白结合率的测定

目的测定杜仲药材中5个成分的血浆蛋白结合率。方法采用平衡透析法测定血浆蛋白结合率,生物样本用甲醇沉淀蛋白进行处理,以葛根素为内标,利用超高效液相色谱-串联质谱仪测定血浆和缓冲溶液中的5个成分浓度。结果在所研究浓度范围内,京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷的平均蛋白结合率分别为(25.77±2.68)%、(57.54±3.79)%、(53.91±3.00)%、(24.15±4.92)%、(49.78±3.61)%。结论京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷的蛋白结合率较低,原儿茶酸、绿原酸和松脂醇单葡萄糖苷则与大鼠血浆蛋白有中等强度的结合。

产PDG杜仲内生菌的分离筛选和分类鉴定及生长条件研究

【目的】分离筛选杜仲（Eucommia ul moides Oliv.）树皮中产松脂醇二葡萄糖苷（Pinoresinol diglu-coside,PDG）的内生真菌,为PDG的生产提供参考。【方法】采用表面灭菌法分离杜仲内生真菌,摇瓶培养分析各菌株产PDG的能力,结合形态学特征和rDNA内转录间隔区（Internal transcribed spacer,ITS）序列分析对高产菌株进行鉴定,研究培养温度、pH对其生长的影响及其对不同碳源和氮源的利用情况。【结果】共分离得到18株内生真菌,有3株具有产PDG能力,其中以菌株XP-8的PDG产量最高（11.65 mg/L）,分类鉴定确定该菌株为拟茎点霉属（Phomopsis sp.）。菌株XP-8在20~35℃、pH4~8的条件下均能较好生长,在28℃、pH=5时生长最快;菌株XP-8对麦芽糖和葡萄糖的利用能力较强,不能利用苹果酸;对硝酸钠的利用能力较强,但不能利用天门冬氨酸。【结论】获得了高产PDG的菌株XP-8,确定了其分类学地位,并研究了其生长特点。

盐杜仲饮片质量标准研究

目的:制定盐杜仲饮片的质量标准。方法:分别测定盐杜仲饮片水分、总灰分及醇溶性浸出物,对薄层色谱法及HPLC色谱法进行研究。结果:得到不同产地13批次盐杜仲饮片的水分、总灰分和醇溶性浸出物测定。结果:同时确定了薄层鉴别和HPLC含量测定的方法。结论:制定了盐杜仲饮片的质量控制标准。

乌饭树根化学成分研究

目的:研究越桔属植物乌饭树Vaccinium bracteatum Thunb.根的化学成分。方法:采用色谱方法(硅胶、Sephadex LH-20、RP-18柱色谱)进行成分分离和纯化,采用核磁、质谱等方法鉴定结构。结果:从乌饭树根95%乙醇提取物中分离并鉴定了10个化合物,分别为:绿原酸(1)、松脂素(2)、阿魏酸(3)、山柰酚(4)、咖啡酸(5)、β-谷甾醇(6)、槲皮素(7)、齐墩果酸(8)、芹菜素(9)、木犀草素(10)。结论:化合物1～3为首次从该植物中分离得到。

树脂吸附法分离纯化杜仲松脂醇二葡糖苷

目的筛选效果较好的树脂 ,对杜仲降压活性成分松脂醇二葡糖苷进行有效富集 ,提高产品质量。方法采用新型大孔吸附树脂对松脂醇二葡糖苷进行吸附及洗脱性能实验。同时采用高效液相色谱法进行分析检测。结果筛选出效果较好的S 8树脂 ,确定了最佳的工艺参数 ,使松脂醇二葡糖苷的含量由原材料中的 0 .0 85 %富集提高到 38.5 % ,得率达 85 .5 %。结论该法成本低 ,操作简单 ,树脂可重复使用 。

HPLC同时测定连翘药材中5种特征性成分

目的：建立连翘药材中连翘新苷A、连翘酯苷A、松脂醇β-D葡萄糖苷、连翘苷和连翘脂素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱-二极管阵列检测法（HPLC-DAD）,采用Welch Ultimate C18（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱,流动相为水（A）-乙腈（B）,梯度洗脱,流速1m L/min,柱温25℃。结果：连翘新苷A、连翘酯苷A、松脂醇β-D葡萄糖苷、连翘苷、连翘脂素进样浓度分别在7.81~500.00μg/m L,2.42~620.00μg/m L,1.21~620.00μg/m L,2.27~580.00μg/m L,0.59~600.00μg/m L之间有良好的线性关系。平均回收率分别为99.93%、99.95%、99.65%、99.52%、99.74%,RSD分别为2.09%、1.93%、1.17%、1.76%、0.88%。结论：该方法稳定性好,精密度高,重复性好,对于连翘药材的质量控制提供了理论依据。

杜仲不同加工方法对其质量的影响

目的研究杜仲的不同加工方法对其质量的影响。方法通过杜仲粗皮占杜仲干燥树皮的质量分数及去粗皮前后浸出率的比较,粗皮与杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量、农药残留量及重金属含量的比较,新鲜树皮发汗前后松脂醇二葡萄糖苷含量的比较等进行研究。结果粗皮占杜仲干燥树皮质量分数为12.7%(n=3);去粗皮前后的醇溶性浸出率没有显著性差异,水溶性浸出率比未去粗皮高11.26%(P<0.05,n=5);粗皮残留有害物质较高而含松脂醇二葡萄糖苷较少(0.0504%,n=3);发汗前后松脂醇二葡萄糖苷含量:未发汗生品>未沸水浸发汗样品>沸水浸发汗样品,三者之间均有显著性差异(P<0.05,n=5)。结论杜仲在原产地加工中"去粗皮"是必要的。值得注意的是:"发汗"后松脂醇二葡萄糖苷的含量却下降。

无梗五加果化学成分的研究(英文)

从无梗五加(Acanthopanax sessiliflorus(Rupr.et Maxim.)Seem.)果70%乙醇提取物中分离鉴定了12个化合物。经波谱鉴定为东莨菪内酯(1),原儿茶酸甲酯(2),槲皮素(3),无梗五加苷B(4),金丝桃苷(5),(-)-pinoresinol-4,4′-di-O-β-D-glucopyranoside(6),chiisanoside(7),22α-hydroxychiisanoside(8),niduloic acid(9),胡萝卜苷(10),东莨菪苷(11)和无梗五加苷D(12)。其中化合物9为新天然产物,化合物1,2,6和11是首次从五加科植物中分离得到,化合物3是首次从五加属植物中分离得到。

杜仲炮制前后松脂醇二葡萄糖苷含量的比较

目的以松脂醇二葡萄糖苷的含量为质控指标,筛选优化传统盐炙杜仲的炮制工艺,并与生杜仲进行比较。方法用正交设计法优选炮制工艺,采用RP-HPLC法测定松脂醇二葡萄糖苷的含量,作为杜仲质量控制的考察指标进行实验比较。结果杜仲的最佳炮制工艺:用盐量2.5%、温度135℃、时间30 min,杜仲生品中松脂醇二葡萄糖苷含量高于炮制品2倍以上。结论随着炮制品的温度升高和时间的延长,杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量逐渐下降。

茎点菌属产松脂醇二葡萄糖苷的培养条件优化

用响应面分析法对一株杜仲内生茎点霉(Phoma sp.)生产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的培养条件进行了优化,获得了PDG产量与各培养条件的回归模型,根据模型确定出PDG的最佳生产条件为:初始pH值8.4,摇床转速193r/min,装液量100mL,最佳条件下的PDG产量可达30mg/L。最佳条件下试验所得值与模型预测值间的偏差小于5%。

连翘中的木脂素单糖苷

自连翘（ＦｏｒｓｙｔｈｉａｓｕｓｐｅｎｓａＶａｈ１．）的果实中分离得到３种木脂素单糖苷，根据理化数据和光谱手段鉴定为（＋）松脂素－β－Ｄ－葡萄糖苷（ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｉｄｅ）（１），（＋）松脂素单甲基醚－β－Ｄ－葡萄糖苷（ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌｍｏｎｏｍｅｔｈｙｅｔｈｅｒ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）（２），（＋）连翘苷（ｐｈｉｌｙｒｉｎ）（３）．其中，（２）为本种植物首次分离．