固定化脂肪酶手性拆分(R,S)-1-苯基乙醇研究进展

(R,S)-1-苯基乙醇是药物合成与精细化学品的重要中间体,可经固定化脂肪酶不对称催化获得光学纯1-苯基乙醇。本文分别从脂肪酶类型、溶剂工程、固定化技术三方面综述了国内外固定化脂肪酶手性拆分(R,S)-1-苯基乙醇的研究进展,并指明该领域中亟待解决的关键问题及解决思路,以期为后续固定化脂肪酶应用于手性拆分(R,S)-1-苯基乙醇提供参考。

N6-甲基腺苷阅读蛋白人类抗原R对结直肠癌细胞的迁移、侵袭和糖酵解的影响及其与磷酸果糖激酶1的关系

目的探讨N6-甲基腺苷(m^(6)A)阅读蛋白人类抗原R(HuR)对结直肠癌细胞迁移、侵袭及糖酵解能力的影响及其与6-磷酸果糖激酶1(PFK1)的关系。方法收集2022年4—12月在郑州大学附属郑州中心医院首次确诊为结直肠癌的33例患者的组织标本,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌患者的癌组织、癌旁组织中HuR和PFK1 mRNA表达量,检测正常肠上皮细胞NCM460以及结直肠癌细胞HCT8、SW480、SW620、HCT116、LoVo、RKO和COLO205中HuR mRNA表达量;使用小干扰RNA构建敲减HuR的结直肠癌细胞模型,通过细胞划痕实验、Transwell实验分别检测HuR对结直肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响;通过qRT-PCR、Western bolt实验分别检测PFK1 mRNA及其蛋白表达量;采用葡萄糖含量试剂盒、丙酮酸含量试剂盒分别检测葡萄糖摄取量、丙酮酸生成量;通过生物信息学分析探讨HuR与PFK1的关系,采用放线菌素D实验评估HuR对PFK1 mRNA稳定性的影响。结果在结直肠癌组织中,HuR、PFK1在mRNA水平上呈高表达;在结直肠癌细胞系中,HuR在mRNA水平上呈高表达;下调HuR可以显著抑制结直肠癌细胞迁移、侵袭能力,同时可以降低葡萄糖消耗量及丙酮酸生成量;敲低HuR可以抑制PFK1 mRNA的稳定性,降低其在mRNA和蛋白水平的表达量。PFK1上存在m^(6)A修饰位点。结论m^(6)A阅读蛋白HuR可能通过识别结合PFK1上的m^(6)A位点降低PFK1 mRNA稳定性,从而调控结直肠癌细胞的迁移、侵袭和糖酵解能力。

肺癌患者放疗前后外周血DC细胞和血清sIL-2R、HMGB-1变化及其与预后的关系研究

目的 探讨肺癌患者放疗前后外周血DC细胞和血清sIL-2R、HMGB-1水平变化及临床意义。方法 收集肺癌患者124例,采用适形调强放疗(intensity modulated radiation therapy, IMRT)技术治疗,于放疗前、放疗后抽取空腹状态下静脉血4 ml,采用免疫磁珠法检测外周血DC细胞(DC1、DC2)水平,采用双抗体夹心酶联免疫法检测血清sIL-2R、HMGB-1水平。统计不同性别、年龄、是否吸烟、病理类型、是否手术、KPS评分、临床分期的肺癌患者外周血DC细胞和血清sIL-2R、HMGB-1水平,并分析患者预后与血清sIL-2R、HMGB-1水平的关系,单因素和多因素COX回归分析影响肺癌患者预后因素。结果 肺癌患者放疗前后外周血DC细胞水平比较,P>0.05。肺癌患者治疗后血清sIL-2R、HMGB-1水平与治疗前比较,P<0.05。治疗前,血清sIL-2R水平在不同性别、年龄、是否吸烟、病理类型方面比较,P>0.05,在是否手术、不同KPS评分、临床分期、淋巴结转移方面比较,P<0.05;血清HMGB-1水平在不同病理类型方面比较,P>0.05,在不同性别、年龄、是否吸烟、是否手术、不同KPS评分、临床分期、淋巴结转移方面比较,P<0.05;治疗后,血清sIL-2R水平在不同性别、年龄、是否吸烟、病理类型方面比较,P>0.05,在是否手术、不同KPS评分、临床分期、淋巴结转移方面比较,P<0.05;血清HMGB-1水平在不同性别、年龄、是否吸烟、病理类型、是否手术、KPS评分、临床分期、淋巴结转移方面比较,P<0.05。死亡组患者血清sIL-2R、HMGB-1水平均高于生存组(P<0.05)。死亡组DC2低于生存组(P<0.05)。经单因素、多因素COX回归分析显示,临床分期(Ⅲ~Ⅳ期)、淋巴结转移、sIL-2R、HMGB-1水平异常上升、DC2比例下降均是导致肺癌患者预后差的独立危险因素。结论 肺癌患者放疗前后外周血DC细胞无明显变化,但血清sIL-2R、HMGB-1水平治疗后较治疗前均明显降低,其sIL-2R、HMGB-1水平异常上升及DC2比例下降均为患者预后独立危险因素,可预测预后。

高效液相色谱法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1与三七皂苷R_1含量

目的建立高效液相色谱法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rg1、Re、Rb1与三七皂苷R1的方法。方法采用高效液相色谱法 ,固定相为氨基键合相 ,流动相为乙腈 水 ( 81∶1 9,V∶V) ,检测波长2 0 3nm。结果三七总皂苷中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1与其他成分分离良好 ,保留时间分别约为 5 7min、8 9min、2 5 1min和 9 9min。人参皂苷Rg1在 80～ 2 80mg/L(r =0 9992 )、Re在 2 0～ 1 80mg/L(r=0 9993 )、Rb1在 95～ 2 85mg/L(r=0 9991 )、三七皂苷R1在1 8～ 1 4 6mg/L(r=0 9991 )内线性关系良好 ,人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1的回收率分别为 99 1 %、98 4 %、98 6%和 97 1 % ,RSD分别为 2 1 %、2 0 %、2 2 %、2 8%。

三七皂苷R_1、人参皂苷R_d对微循环及凝血作用的影响

目的 研究三七皂苷 R1 (R1 )和人参皂苷 Rd(Rd)的活血化瘀作用 ,以证实二者为三七中的有效成分。方法 显微电视放大系统定量观测 R1 和 Rd 对正常及去甲肾上腺素 (NA)所致耳廓微循环障碍小鼠耳廓微循环的影响 ;血浆复钙试验测定 R1 和 Rd 的抗凝作用。结果 R1 和 Rd 能显著促进或改善正常及 NA所致耳廓微循环障碍小鼠耳廓的微循环 ;亦可延长血浆复钙时间。结论 R1 和 Rd 均能显著改善微循环并适度延长凝血时间 。

补偿生长对异育银鲫IGF-1、IGFBP-1水平及IGF-1、IGF-1RmRNA表达的影响

该实验分析饥饿和恢复投喂对异育银鲫血液IGF-1和IGFBP-1水平和肝脏IGF-1、白肌IGF-1RmRNA表达量的影响。结果显示:饥饿期(14d)血液中IGF-1和IGFBP-1水平逐渐下降,在饥饿第14天均出现显著性降低(P<0.05);恢复投喂后第1天IGF-1迅速恢复到对照组水平,而IGFBP-1水平仍显著低于对照组(P<0.05),随后逐渐升高,直至于恢复投喂第14天后显著高于对照组水平(P<0.05);饥饿期肝脏IGF-1mRNA表达量呈下降趋势,但与对照组无显著性差异(P>0.05);恢复投喂初期(第1、3天),IGF-1mRNA表达量仍继续下降(P<0.05),对营养条件的变化反应滞后,至第7天,表达水平恢复到对照组水平。白肌IGF-1RmRNA表达水平在饥饿第3天出现显著性下降(P<0.05),继续饥饿其水平出现补偿性升高;恢复投喂后第14天IGF-1RmRNA表达量显著高于对照组水平(P<0.05)。该结果揭示恢复投喂期高水平的IGFBP-1含量和IGF-1RmRNA表达量可能通过提高IGF-1的促生长作用参与异育银鲫的补偿生长调节。

HPLC测定金森脑泰粉针剂中三七皂苷R_1含量

目的 运用 HPL C建立金森脑泰粉针剂中三七皂苷 R1 的含量测定方法。方法 采用 ODS色谱柱 (5 μm,2 5 0 mm× 4.6 m m) ,流动相为甲醇 -水 (5 5∶ 45 ) ,流速 1m L /min,检测波长 :2 0 3 nm。结果 该法回收率 97.0 0 % ,RSD=1.6 0 % (n=5 )。结论 本法操作简便、准确 ,为测定金森脑泰粉针剂中三七皂苷 R1

MC1R基因TaqⅠPCR-RFLP标记与他留乌骨鸡羽色性状的相关性研究

采用PCR测序与PCR-RFLP技术,研究了MC1R基因变异与他留乌骨鸡羽毛颜色的关系。通过对他留乌骨鸡麻羽、白羽和黑羽3个品系的MC1R基因PCR扩增与测序,检测到6个SNP位点,其中5个位点引起氨基酸变异。在分析以上SNP在不同羽色品系等位基因频率差异及SNP变异特性的基础上,在A356G(D119G)位点建立了TaqⅠPCR-RFLP分子标记,对所有受试个体进行基因分型,并对A356G变异与羽色性状相关性进行了相关分析。结果表明,MC1R基因是影响他留乌骨鸡羽色的一个主效基因,A356G SNP是控制鸡羽色的一个关键变异位点。

白细胞介素-34/集落刺激因子-1R在转化生长因子-β1诱导A549细胞上皮-间质转化中的表达

目的探讨白细胞介素-34/集落刺激因子-1受体(IL-34/CSF-1R)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导A549细胞发生上皮-间质转化(EMT)中的表达。方法体外培养A549细胞;CCK 8法检测不同浓度TGF-β1在不同时间点对A549细胞增殖的影响;选用5μg/L TGF-β1刺激A549细胞(0、12、24、48h),提取细胞蛋白和RNA,Western blotting法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏连蛋白(E-Cad)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白的变化;Real-time PCR法检测IL-34、CSF-1R、MMP-2、MMP-9基因表达的变化。结果 TGF-β1对A549细胞的增殖无明显影响(P>0.05)。TGF-β1刺激A549细胞后,间质细胞标志性蛋白α-SMA表达升高,上皮细胞标志性蛋白E-Cad表达下降,纤维化相关的MMP-2蛋白表达升高,MMP-9蛋白表达先升高后下降,TIMP-1蛋白早期出现短暂性增高后,呈持续降低趋势(P<0.01)。IL-34mRNA表达逐渐升高,CSF-1R mRNA、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达先升高后下降(P<0.01)。结论 TGF-β1诱导A549细胞的EMT过程中,存在IL-34/CSF-1R的动态表达。

HPLC-ELSD测定三七胶囊中人参皂苷Rg_1和Rb_1

目的 :研究三七胶囊的质量标准。方法 :应用HPLC ELSD对三七胶囊中的活性成分人参皂苷Rg1和Rb1的含量进行测定。结果 :人参皂苷Rg1在 1.3 μg～ 6.5μg范围内呈现良好的线性关系 (r =0 .9994) ,平均回收率为 98.3 0 % ,RSD为 1.2 0 % (n =5)。人参皂苷Rb1在 1.0 μg～ 5.0 μg范围内呈现良好的线性关系 (r =0 .9996) ,平均回收率为 97.12 % ,RSD为 1.17% (n =5)。结论 :该方法简便 ,快速 ,重现性好 。

非1B/1R类型小麦雄性不育系KTSP3314A败育的生化机制

为了揭示K型非1B/1R类型小麦不育系雄性败育的生化机制。利用K型非1B/1R类型小麦雄性不育系KTSP3314A,其同型保持系TSP3314B,以K型1B/1R类型小麦雄性不育系K3314A、其同型保持系3314B为对照,分别对其叶片和穗子在不同发育时期的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)的活性和丙二醛(MDA)含量的变化进行测定。结果表明,K型非1B/1R类型小麦不育系中SOD,POD及CAT活性变化与K型1B/1R类型小麦雄性不育系酶活性变化一致,K型非1B/1R类型雄性不育小麦叶片和穗子的超氧化物歧化酶(SOD)后期则较低,过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)的活性后期较高,丙二醛(MDA)含量后期较高。说明二者的雄性败育生化机制基本一致,但前者比后者败育的时期较晚。且超氧化物歧化酶(SOD)活性与雄性育性有关。

2 R-羟甲基-5 S-(5′-氟胞嘧啶-1′-)-1,3-氧硫杂环戊烷的合成

报道了 2R 羟甲基 5S (5′ 氟胞嘧啶 1′ ) 1,3 氧硫杂环戊烷 (FTC)及其关键中间体 5R 乙酰氧基 1,3 氧硫杂环戊烷 2 羧酸 (1′R ,2′S ,5′R) 薄荷酯的合成 ,并对文献报道的路线进行了改进 ,特别是避免使用昂贵而敏感的三甲基碘硅烷 ,易于工业化生产。

特发性矮小患儿IGF-1R、IGFALS蛋白的表达

目的检测特发性矮小患儿血清IGF-1R、IGFALS蛋白的水平,探讨其在特发性矮小(ISS)患儿生长发育中的作用。方法收集就诊的特发性矮小儿童26例作为实验组(ISS组),抽取10例年龄、性别相匹配的正常身高儿童作为对照组。对他们进行全面的病史采集和体格检查,行生长激素激发试验,检测IGF-1和IGFBP3,并检测血清IGF-1R、IGFALS蛋白表达水平,比较两组中IGF-1R、IGFALS蛋白表达是否有差异,并分析IGF-1R、IGFALS蛋白表达与各项临床指标的相关性。结果(1)ISS组血清IGF-1R表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),ISS组和正常对照组血清IGFALS蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。(2)ISS组血清IGFALS蛋白及IGF-1R蛋白表达量均与身高差呈负相关(P<0.05),IGF-1R蛋白表达与年龄呈正相关(P<0.05),IGFALS蛋白表达与年龄无相关性(P>0.05)。结论 (1)IGF-1R和IGFALS蛋白表达水平越低可能使ISS患儿身高差更大,患儿越矮小。(2)IGF-1R缺乏可能是部分特发性矮小患儿的原因。

四个牦牛品种MC1R基因部分序列的多态性研究

为探索4个牦牛品种MC1R基因多态性的相关信息,选取甘南牦牛、天祝白牦牛、青海高原牦牛、大通牦牛4个品种共408头个体为研究对象,采用PCR-SSCP方法分析牦牛MC1R基因部分序列的基因多态性。结果表明,与GenBank中牛MCIR基因序列(登录号:AF445641.1)比对发现,该扩增片段在3 891 bp处发生C→G的突变,在3 912 bp处发生T→C的突变,共发现CC、DD、EE、CD、CE和DE 6种基因型。4个牦牛品种中CD、CE和DE 3种基因型在青海高原牦牛和大通牦牛中占主要优势,这3种基因型频率总和在青海高原牦牛和大通牦牛群体中分别是0.778和0.781。DD和CD两基因型是甘南牦牛群里中的优势基因型,其基因型频率分别是0.351和0.328。天祝白牦牛中优势基因型是DD,其基因型频率是0.500。D等位基因是4个地方品种牦牛中的优势等位基因。4个地方品种在该基因座上都处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。青海高原牦牛和大通牦牛两个群体处于高度多态(PIC>0.5),甘南牦牛和天祝白牦牛处于中度多态(0.25<PIC<0.5)。

1(R),2(R)-二(2-苯并咪唑)乙二醇四核铜(Ⅱ)配合物的合成与晶体结构

合成了一种新配合物1(R),2(R)-二(2-苯并咪唑)乙二醇四核铜犤Cu4(bbmed)4Cl2L2犦·Cl2(CH3OH)5(H2O)2(L=MeOH或H2O,Hbbmed=1(R),2(R)-二(2-苯并咪唑)乙二醇,bbmed表示去质子后的配体)(简称Cu?-bbmed)。该晶体经X-射线衍射确定为正交晶系,空间群C2221(20),晶胞参数a=1.7424(5),b=2.4942(7),c=3.8887(11)nm,V=16.900(8)nm3,Z=4,Dc=1.427g·cm-3,F(000)=7472。并对它进行了元素分析、IR、1HNMR及ESR表征。

光电耦合器件1/f噪声和g-r噪声的机理研究

对光电耦合器件1/f噪声和gr噪声(产生-复合噪声)的偏置特性及其产生机理进行了实验和理论研究.结果表明在低频段,光电耦合器件的gr噪声通常表现为叠加1/f噪声,且两者均随输入电流的增加呈现先增大后减小的规律.通过测量前级噪声和后级噪声,发现光电耦合器件的gr噪声源为后级光敏三极管.理论分析表明光电耦合器件的1/f噪声主要为表面1/f噪声,gr噪声则源于光敏三极管发射结空间电荷区的深能级对载流子的俘获和发射.

L^r(r>1)混合序列一矩不等式及其应用

文章给出Lr(r>1)混合序列的矩不等式,其中混合系数将具体给出,并得到了Lr(r>1)混合序列的大偏差结果;这一结果与已有文献给出的关于鞅差序列的上界相同,在主要数量级上已达最优,将其应用到线性过程中,得到线性过程的一个大偏差结果。

拔毛·剃毛对绵羊皮肤中GHR·IGF-1·IGF-1R·KAP3.2和KAP6-1基因表达的影响

选取36只新疆细毛羊随机分成6组进行拔毛、剃毛处理,于第0、3、6、9、12、50天采集皮肤样品,用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法,定量分析绵羊皮肤中生长激素受体(GHR)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1R)、角蛋白关联蛋白KAP3.2和KAP6-1mRNA的相对丰度。实验结果显示,与对照组相比,剃毛可显著提高IGF-1的表达量,但对GHR、IGF-1R、KAP3.2和KAP6-1的表达量均无明显的影响;而拔毛对皮肤中GHRI、GF-1I、GF-1R、KAP3.2和KAP6-1基因表达均无明显影响。

miR-21对1型糖尿病患者外周血单个核细胞分泌IFN-γ与IL-17的影响

目的:探讨mi R-21在1型糖尿病患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌干扰素-γ(IFN-γ)与白介素-17(IL-17)的影响。方法:采集60例1型糖尿病患者及60例正常健康人外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC),用q RT-PCR检测两组PBMC中mi R-21的表达;向PBMC中转染mi R-21,ELISA检测PBMC分泌IFN-γ与IL-17情况。结果:1型糖尿病患者PBMC中mi R-21表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);增加1型糖尿病患者PBMC中mi R-21的表达,IFN-γ与IL-17的分泌均减少,差异有统计学意义(P值分别<0.05或<0.01)。结论:mi R-21在1型糖尿病患者PBMC中的表达下降,并可抑制PBMC中IFN-γ与IL-17的分泌。

酿酒酵母B5不对称还原制备手性药物中间体R-2′-氯-1-苯乙醇的研究

从 11株微生物中筛选出 4株具有不对称还原 2′ 氯 苯乙酮能力的酵母 ,其中酿酒酵母B5的还原产率与对映体选择性最佳。确定了酿酒酵母B5对 2′ 氯 苯乙酮还原的最佳反应时间为 2 4h ;最佳pH 8 0 ;最佳反应温度为2 5℃ ;最佳共底物为 5 % (体积比 )乙醇。同时研究了底物浓度、微生物的量、微生物的培养条件等对反应产率和立体选择性的影响。细胞浓度为 10 75mg mL(细胞干重 反应体积 )的酿酒酵母B5可将 6 47mmol L的 2′ 氯 苯乙酮10 0 %地转化为R 2′ 氯 1 苯乙醇 ,其对映体选择性为 10 0 %。酿酒酵母B5可重复利用的特点可提高产物的产量。