RP-HPLC法同时测定茵栀解毒颗粒中绿原酸和栀子苷的含量

建立RP-HPLC法同时测定茵栀解毒颗粒中绿原酸和栀子苷的含量。采用反相高效液相色谱法,色谱柱为C_(18)柱(250.0 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃,流动相为乙腈‒甲醇‒0.1%磷酸(11∶8∶81),等度洗脱,检测波长为(235±1)nm,流速为1 mL/min。结果显示,绿原酸的线性范围为0.0943~0.7544μg,r=0.999999(n=5),平均回收率为99.25%(n=6);栀子苷线性范围为0.1971~1.5766μg,r=0.999999(n=5),平均回收率为99.56%(n=6)。该方法检测效率高、专属性强、重复性好,为茵栀解毒颗粒的质量评价提供了简便、准确、可靠的定量方法。

红花药材RP-HPLC指纹图谱的建立及其质量评价研究

本文收集了市面上常见的红花药材,对红花的前处理方法进行优化,使用乙酸乙酯萃取等对红花进行初步提取。建立了红花药材的指纹图谱,对其中主要峰进行了化学指认,通过使用“相似度评价软件”进行数据处理,对红花药材指纹图谱的相似度进行比较分析,以研究不同产地红花药材的质量。

RP-HPLC法测定安石榴苷在大鼠血浆中的浓度及其药动学研究

建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定安石榴苷的血药物浓度,并用于大鼠灌胃后的药动学研究。采用COSMOSIL-Chol-ester C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸为流动相梯度洗脱,检测波长370 nm,柱温40℃,流速1.0 mL/min。SD大鼠单次口服安石榴苷(300 mg/kg)后,眼眶静脉丛采血,检测24h内11个时间点血浆中的药物浓度。安石榴苷在2.18~58.00μg/mL范围线性关系良好,定量下限(LLOQ)2.18μg/mL,日内、日间精密度RSD<15%,提取回收率为89.67%~115.56%。PK Slutions 2.0^(TM)药动学软件拟合主要药动学参数C_(max)、T_(max)、AUC_((0-t))分别为(26.33±5.65)μg/mL、(1.67±0.52)h和(243.40±111.62)(μg·h)/mL。所建立RP-HPLC法测定安石榴苷的血药浓度简便、准确、专属性强,给大鼠灌服安石榴苷后,其吸收、分布迅速,体内药动学呈开放的二室模型。

RP-HPLC法检测甜梦口服液(甜梦合剂)中淫羊藿苷、紫丁香苷和23-乙酰泽泻醇B的含量

目的建立同时检测甜梦口服液(甜梦合剂)中的淫羊藿苷、紫丁香苷和23-乙酰泽泻醇B含量的RP-HPLC法。方法利用Shimadzu CLC ODS C 18(4.6 mm×250 mm,5μm)分离甜梦口服液中3种成分(淫羊藿苷、紫丁香苷和23-乙酰泽泻醇B)。测定波长:淫羊藿苷为271 nm、紫丁香苷为265 nm和23-乙酰泽泻醇B为207 nm;柱温30℃,进样体积10μl。流动相:0.3%磷酸溶液(流动相A)-乙腈(流动相B),洗脱程序:0~4 min(95%A)、4~7 min(95%~78%A)、7~10 min(78%~38%A)、10~16 min(38%~26%A)、16~23 min(26%~19%A)、23~28 min(19%A)、28~28.5 min(19%~95%A)。外标法检测3种成分的含量。结果紫丁香苷、23-乙酰泽泻醇B和淫羊藿苷分别在0.1962~19.62μg/ml,0.7544~75.44μg/ml和0.1966~19.66μg/ml质量浓度范围内存在良好的线性关系,线性系数R 2均大于0.995;平均加标回收率分别为99.47%,98.68%和100.26%;仪器精密度和方法重复性RSD(n=6)均在5.0%以内。结论建立的RP-HPLC法具有线性范围广、检测结果准确等优点,可以用于甜梦口服液(甜梦合剂)供试品的质量控制。

畲药小香勾香豆素类成分RP-HPLC含量测定及抗炎靶点预测

[目的]以反相高效液相色谱(reverse phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)法测定畲药小香勾香豆素类成分补骨脂素和佛手柑内酯的含量,并结合网络药理学和动物实验验证小香勾的抗炎作用。[方法]色谱柱为Waters C18柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm),流动相A为乙腈,流动相B为0.1%甲酸溶液(体积比),梯度洗脱,流速为0.8 mL·min^(-1),补骨脂素检测波长245 nm,佛手柑内酯320 nm,柱温25℃。利用网络药理学平台收集小香勾香豆素类成分及抗炎相关靶点,利用Cytoscape 3.8.2软件建立成分-靶点网络,借助网络拓扑分析插件(Cytoscape network centrality analysis,CytoNCA)筛选抗炎核心靶点,进一步采用Metascape软件进行京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomics,KEGG)通路富集分析。通过二甲苯致小鼠耳肿胀法进一步验证小香勾的抗炎作用。[结果]补骨脂素和佛手柑内酯的质量浓度分别在0.51~102.00μg·mL^(-1)(r=0.9996)和0.24~48.00μg·mL^(-1)(r=0.9998)时与峰面积呈良好的线性关系。通过筛选获得小香勾补骨脂素和佛手柑内酯的相关基因57个,抗炎靶点2148个,交集靶点31个。KEGG通路富集分析发现,这些靶点主要涉及化学致癌作用-活性氧、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路、癌症途径、催乳素信号通路和叶酸生物合成等信号通路。与模型对照组比较,小香勾高剂量组(400 mg·kg^(-1))能显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀(P<0.01),显示小香勾具有良好的抗炎作用。[结论]建立的RPHPLC法操作简单,灵敏度高,可用于小香勾质量控制。小香勾香豆素类成分通过多靶点多通路表现出良好的抗炎作用,为后续深入探讨小香勾抗炎机制提供了有利的科学依据。

RP-HPLC梯度洗脱法测定盐酸金霉素有关物质方法研究

目的 建立准确可靠的RP-HPLC梯度洗脱法用于测定盐酸金霉素原料药有关物质。方法 采用Ultimate XB-C8色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以高氯酸-水-二甲基亚砜(16∶934∶525)(pH<2.0)、乙腈、甲醇分别作为流动相A、B、C,进行梯度洗脱;柱温为45℃;检测波长为280 nm;流速为0.8 mL/min。结果 与《中国药典》2020年版相比,检出杂质多2个,盐酸金霉素与11个已知杂质分离度良好。13批样品均检出6个已知杂质,除盐酸四环素、4-差向金霉素外,还检出杂质B、E、J、L,其中杂质B、E为主要其他杂质。结论 该方法适用性好、专属性强,可真实反映盐酸金霉素有关物质状况,为其质量控制提供方法支撑。

RP-HPLC法测定姜黄消痤搽剂中姜黄素的含量

目的:建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定姜黄消痤搽剂中姜黄素含量。方法:采用Gemini C_(18)(ODS,250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温约为20℃,进样量为20μl,流动相为乙腈-0.2%冰醋酸,梯度洗脱,流速为1.00 ml/min,紫外检测波长为430 nm。结果:姜黄素在5~200μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9994),线性方程为Y=86210.9957X+226168.7965。平均加标回收率为95.49%,RSD为1.31%。结论:本法前处理简单、结果可靠,可作为姜黄消痤搽剂的质量控制方法。

RP-HPLC法检测阿齐沙坦有关物质的方法改进

目的建立一种新的阿齐沙坦有关物质检测方法。方法以YMC Triart C 18(4.6×250 mm,5μm)为色谱柱;以0.05 mol·L^(-1)乙酸铵缓冲液(氨水调节pH至9.0)为流动相A,甲醇为流动相B,线性梯度洗脱;流速0.8 mL·min^(-1);检测波长251 nm。结果阿齐沙坦与各杂质分离良好,各杂质和阿齐沙坦质量浓度0.1~1.0μg·mL^(-1)范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数0.9990~1.0000;1、2、3、4和5检测限分别为0.0476、0.0570、0.0532、0.0588和0.0556μg·mL^(-1),平均回收率分别为96.66%、109.94%、102.18%、100.62%和100.26%,RSD分别为5.53%、6.14%、1.45%、3.0%和3.48%(n=9)。结论本法专属、可靠,可用于阿齐沙坦原料药有关物质的测定。

RP-HPLC测定眩晕宁颗粒制剂中3种成分的含量

目的:建立了RP-HPLC法测定眩晕宁颗粒制剂中异绿原酸A等3种成分含量的方法。方法:CapcellPak UG C18色谱柱分离;检测波长:异绿原酸A、23-乙酰泽泻醇B和β-蜕皮甾酮检测波长分别设定348 nm、250 nm和208 nm;进样体积:10µL;柱温:28℃;以乙腈(A)-0.5%磷酸溶液(B)为洗脱溶剂,外标法定量检测。结果:异绿原酸A、β-蜕皮甾酮和23-乙酰泽泻醇B分别在浓度0.0767~7.67、0.0983~9.83和0.0197~1.97μg/mL范围内线性良好;回收率依次为100.05%、98.33%和99.42%;重复性和精密度RSD均在5.0%以内;供试品溶液在24h内稳定。结论:结果证明,此方法具有前处理简单等优点,可以用于眩晕宁颗粒制剂的质量控制。

高效液相色谱法测定β-内酰胺抗生素中残留乙酸的含量

目的建立测定β-内酰胺类抗生素原料中乙酸残留量的HPLC方法。方法采用多因素组内设计方法,确定色谱流动相的组成、比例和pH值。参考ICH Q2,从专属性、检出限和定量限、线性、准确度、精密度和耐用性等6个方面对方法进行验证。用所建立的方法对19种β-内酰胺类抗生素原料进行了测定。结果采用C_(18)色谱柱,流动相:甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾,梯度洗脱;柱温25℃;检测波长220 nm。供试品、溶剂和流动相对乙酸测定没有明显干扰;乙酸的最低检出限约为0.029μg,最低定量限约0.12μg;从定量限到限度2倍浓度范围内,方法的线性关系良好,拟合直线方程为y=388866.7186x-177.5720,r2=0.9999;低中高浓度加样回收率平均分别为93%,96%和99%;方法的重复性和中间精密度分别为2.37%和2.11%;在3根不同C_(18)色谱柱上的耐用性良好。19种β-内酰胺抗生素原料中有3种筛查出残留乙酸。结论所建方法可以实现对β-内酰胺类抗生素原料中残留乙酸的准确定量,为该类原料的生产过程控制和标准物质研制提供了依据。

基于反相高效液相色谱法的面团黏性与小麦醇溶蛋白组成关系研究

以74份不同黏性等级的小麦品种(系)为研究材料,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法分离不同黏性小麦品种的醇溶蛋白特征图谱,并进行面团黏性、醇溶蛋白组分含量与小麦面粉品质性状的相关性分析,以期建立采用少样本量快速准确识别面团黏性的方法。结果表明,经RP-HPLC分离后,ω-、α/β-和γ-醇溶蛋白3个组分在图谱上清晰可见;不同黏性等级小麦材料的醇溶蛋白得到了不同的特征图谱,黏性较大的小麦ω-醇溶蛋白的组分峰数较多,总峰面积较大;ω-醇溶蛋白在不同黏性等级小麦材料间存在显著差异。相关性分析结果表明,面团黏性与ω-醇溶蛋白相对含量呈极显著正相关,与α/β-和γ-醇溶蛋白相对含量相关性不显著;ω-醇溶蛋白相对含量与沉淀值、形成时间、稳定时间、能量、拉伸阻力和最大拉伸阻力均呈极显著负相关,与蛋白质、湿面筋含量均呈显著正相关,与弱化度呈极显著正相关;ɑ/β-醇溶蛋白相对含量与蛋白质、湿面筋含量均呈极显著正相关;γ-醇溶蛋白相对含量与小麦各品质性状均无显著相关性。可见,面团黏性主要与ω-醇溶蛋白相对含量有关,ω-醇溶蛋白对面团质量有弱化作用。

对甘精胰岛素有关物质分析用系统适用性试验的研究

目的:对不同企业甘精胰岛素有关物质分析用系统适用性试验进行研究,发现存在的问题,提示企业完善质量标准,更科学有效地控制产品质量。方法:采用高效液相色谱法及液质联用方法对不同企业有关物质分析用系统适用性试验进行研究评价,发现存在多种问题。结果:部分企业系统适用性溶液中所用的“0A-甘精胰岛素”的结构经LC-MS/MS确认后,发现与理论序列不同,部分企业采用酶切方法制备系统适用性溶液,存在杂质较多、操作步骤复杂、溶液易浑浊等问题。结论:建议企业提高对系统适用性试验的重视程度,加强研究,完善质量标准,科学有效地进行药品质量控制。

反相高效液相色谱测定氨溴特罗口服溶液中盐酸克仑特罗的研究

建立氨溴特罗口服溶液中盐酸克仑特罗成分含量测定的方法并开展方法学验证。采用ZORBAX SB-C18色谱柱,流动相为磷酸二氢钾溶液-甲醇,检测波长244 nm,柱温40℃,流速1.0 mL·min^(-1),进样量10μL。结果显示,盐酸克仑特罗在0.0511~0.4099μg·mL^(-1)范围内线性关系良好;平均回收率(n=9)为100.0079%,RSD为1.57%。测得盐酸克仑特罗含量为标示量的98.96%,符合药典标准。

浅析反相高效液相色谱中样品溶剂对中药成分色谱保留行为的影响

目的探究反相高效液相色谱(RP-HPLC)中样品溶剂对中药成分色谱保留行为的影响。方法选取2020版《中国药典》一部收载的5种中药,参照各药材含量测定项下要求进行HPLC法测定,初步研究龙胆苦苷-龙胆、紫丁香苷-刺五加、松脂醇二葡萄糖苷-杜仲、秦皮甲素-秦皮、腺苷-冬虫夏草受样品溶剂影响产生的色谱峰异常行为,深入探讨溶剂效应的机理,并提出解决方案。结果5种中药化学成分的色谱异常行为表现为保留时间漂移、色谱峰展宽、前延及裂分,产生上述异常现象的根本原因是溶解样品的溶剂和流动相存在某种不匹配,导致样品在溶剂与流动相中所处状态出现差异(溶剂效应)。消除溶剂效应的首选方法是用流动相或相近的溶剂溶解样品,此外,减小进样量和使用溶剂效应消除器可作为辅助手段。结论溶剂效应容易引起色谱峰异常,影响对化学成分定性和定量的准确性,应该在日常中药分析工作中予以重视。

23种国产柴胡属植物中柴胡皂苷a、c、d含量的RP-HPLC测定

目的:建立RP-HPLC法,分离和测定中国23种61个产地的柴胡属植物样品中柴胡皂苷a、c、d的含量。方法:采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL·min～1,检测波长210 nm。结果:不同品种柴胡以及相同品种、不同产地柴胡中的柴胡皂苷a、c、d含量差异悬殊。结论:本研究所建立的HPLC方法适用于柴胡属植物中柴胡皂苷a、c、d定量分析,结果准确可靠。

RP-HPLC测定地稔药材中没食子酸的含量

目的建立地稔药材中没食子酸的含量测定方法,为其质量标准的建立提供科学依据。方法采用RPHPLC直接测定,色谱柱DiamonsilC18柱,流动相为四氢呋喃甲醇02%磷酸(05∶05∶99),流速1mL·min-1,检测波长274nm。结果测定了10批不同地区市售的地稔药材,没食子酸含量在0020%～0081%。结论本方法简便、快速、准确,可作为地稔药材的质量检测方法。

RP-HPLC法测定栽培种越橘果中花色素苷的含量

目的:建立测定不同越橘果中花色素苷含量的方法。方法:采用0.1%HCI 的甲醇溶液对16种越橘果进行提取,以矢车菊-3-半乳糖苷(Cyanidin-3-galactoside chloride)为对照品,采用 Zorbax SB C_(18)色谱柱(150mm×4.6mm,5 μm),以甲醇-甲酸水溶液作为流动相进行二元梯度洗脱,检测波长为525nm,流速:0.5 mL·min^(-1)。结果:花色素苷在0.032～0.96μg·mL^(-1)的浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9993),平均回收率为96.1%。结论:本方法简便、快速、准确、可靠,可以作为越橘果花色素苷含量的测定方法。

RP-HPLC测定不同产地青木香和细辛中马兜铃酸A的含量

目的 :测定不同地区市售青木香、细辛中马兜铃酸A的含量 ,用于指导临床用药和相关研究。方法 :应用高效液相色谱法 ,选用AlltechC18色谱柱 (4.6mm× 2 5 0mm ,5 μm) ,甲醇 水 醋酸 (6 8∶32∶1)为流动相 ,流速为 1.0mL·min-1,柱温为 35℃ ,紫外检测波长为 390nm。结果 :马兜铃酸A在 0 .119～ 1.89μg有良好的线性关系 ,平均加样回收率为 10 1.8% ,RSD为 2 .0 9%。不同产地青木香中马兜铃酸A的含量在 0 .916 9～ 1.90 76mg·g-1,其中以河北安国产青木香的含量较高 (1.90 76mg·g-1) ;细辛中马兜铃酸A的含量在 0～ 35 1g·g-1,其中以吉林市售品含量较高。结论 :本方法精密度高 ,重现性好 ,可用来含马兜铃酸类中药材中马兜铃酸A的含量测定 ;含马兜铃酸的中药中以关木通中马兜铃酸A的含量最高 ,青木香中的含量约为关木通中的含量的 1/3,细辛的含量最低。

柱前荧光衍生化RP-HPLC测定环维黄杨星D含量

目的 建立环维黄杨星D含量测定方法。方法 环维黄杨星D同异氰酸萘酯反应后 ,RP HPLC荧光法测定。色谱柱为C1 8柱 ;流动相为甲醇 水 (85∶15 ) ;流速 :1mL·min- 1 ;荧光检测激发波长 30 5nm ,发射波长 385nm ;柱温35℃。结果 衍生化反应重复性好 ,RSD为 1 2 1% ,主峰与相关物质分离良好。结论 本法简单、准确 ,可用于环维黄杨星D及其相关物质含量测定。

红花RP-HPLC指纹图谱的建立及其质量研究

目的 建立红花RP HPLC指纹图谱分析法 ,研究不同产地红花药材的质量。方法 采用梯度洗脱的方法进行色谱分离 ,使用“计算机辅助相似度评价软件”进行数据处理 ,对不同产地红花药材指纹图谱的相似度进行比较分析。结果 不同产地红花药材指纹图谱相似度较好 ,但仍有少数产地的药材指纹图谱中有明显差别。结论 采用RP HPLC方法控制药材的指纹图谱 ,方法重现性好 ,用于红花的质量评价切实可行。不同产地红花药材化学组成相似 ,其相对比例较稳定。