基于ERK/p38 MAPK信号通路探究解毒活血汤治疗Ⅲ型前列腺炎的作用机制

目的探究解毒活血汤调控ERK/p38 MAPK信号通路治疗Ⅲ型前列腺炎的作用机制。方法采用去势手术+苯甲酸雌二醇(EB)诱导慢性前列腺炎大鼠模型。36只SD大鼠随机分为空白组(生理盐水,4 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水,4 mL·kg^(-1))、阳性药物对照组(前列康片混悬液,4 mL·kg^(-1))、解毒活血汤低(4 mL·kg^(-1))、中(8mL·kg^(-1))、高剂量组(12 mL·kg^(-1)),每组6只,所有实验动物连续给药30 d。苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠组织病理学变化;免疫组化法、RT-PCR、Western Blot技术检测相关炎症因子及蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,慢性前列腺炎大鼠前列腺组织增生及水肿明显、炎症浸润增加,而阳性药物对照组及解毒活血汤各剂量组大鼠前列腺组织病变减轻或消失、炎症浸润减少,且与解毒活血汤剂量成正比;免疫组化表示模型组p38、P-p38、STAT3、P-STAT3表达较高,阳性药物对照组、不同剂量解毒活血汤组的p38、P-p38、STAT3、P-STAT3表达呈下降趋势,且均低于模型组。RT-PCR结果显示阳性药物对照组及解毒活血汤低、中、高剂量组均能降低大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-2、IL-6的表达水平;Western Blot检测提示大鼠疾病发生进展过程中p38、P-p38、P-ERK1/2、STAT3、P-STAT3呈高表达状态,解毒活血汤能够降低其表达,从而降低相关炎症因子的过度激活。结论解毒活血汤能够抑制ERK/p38 MAPK信号通路的过度激活,从而降低IL-2、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达,以改善前列腺组织炎症反应。

丹参多糖经MAPK/ERK信号轴抑制对肺癌细胞A549增殖、迁移和凋亡的影响

目的 探讨丹参多糖经丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号轴抑制对肺癌细胞A549增殖、迁移和凋亡的影响。方法 体外培养A549细胞,用不同质量浓度(0,1,2,4,8,16,32,64 mg/mL)丹参多糖干预48 h后,确定丹参多糖的半数抑制浓度(IC50);将A549细胞分为对照组、高剂量组、中剂量组和低剂量组(分别以0,8,4,2 mg/mL丹参多糖干预),以及抑制剂组(40μmol/L PD 98059)。采用划痕愈合试验检测A549细胞的迁移水平,采用流式细胞术检测A549细胞的凋亡情况,同时采用实时荧光定量聚合酶链反应法和免疫印迹法分别检测A549细胞中MAPK、ERK、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B细胞淋巴瘤2基因(Bcl-2)、胱天蛋白酶3(caspase-3)mRNA和蛋白表达水平。结果 随着丹参多糖质量浓度的增加,A549细胞增殖率显著降低(P <0.05);丹参多糖对A549细胞的IC50为7.82 mg/mL,高、中、低剂量组干预剂量分别为8,4,2 mg/mL。与对照组比较,抑制剂组,高、中、低剂量组细胞的迁移距离及MMP-9,MAPK,ERK,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P <0.05),细胞凋亡率、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P <0.05);与抑制剂组比较,高、中、低剂量组细胞的迁移距离及MMP-9,MAPK,ERK,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P <0.05),细胞凋亡率、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P <0.05),且随丹参多糖剂量的增加呈量效依赖关系(P <0.05)。结论 丹参多糖可能通过MAPK/ERK信号轴诱导A549细胞凋亡,抑制A549细胞增殖和迁移。

右美托咪定通过减少脑源性神经营养因子表达抑制MAPK/ERK信号通路活化减轻大鼠分娩疼痛

目的:从脑源性神经营养因子(BDNF)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路探讨不同剂量右美托咪定(Dex)对大鼠分娩疼痛疗效的影响及其机制。方法:建立大鼠妊娠模型;将实验动物随机分为4组,对照组,大鼠自然分娩,未行任何处理;Dex组,大鼠产程启动至产下最后1个仔鼠期间,分别静脉注射50、100μg/kg和200μg/kg右美托咪定;免疫组织化学显色检测大鼠大脑皮质顶叶与子宫内膜组织中BDNF的表达;热水甩尾法测定大鼠分娩时的痛阈值及Richmond躁动镇静评分;qRT-PCR与免疫印迹检测大脑皮质顶叶与子宫内膜组织迅速加速纤维肉瘤蛋白(Raf)、ERK、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)及强啡肽(DYN)的表达。结果:注射Dex后,大鼠大脑皮质顶叶与子宫内膜中BDNF蛋白表达水平显著降低,且Dex剂量显著影响BDNF蛋白表达水平。随着Dex剂量增加,大鼠分娩时的痛阈值明显提高,Richmond躁动镇静评分降低。与对照组相比,注射Dex后,大脑皮质顶叶与子宫内膜中Raf、ERK、CREB mRNA与蛋白表达水平显著下降,DYN mRNA与蛋白表达水平显著升高。相关性分析显示,大脑皮质顶叶BDNF表达与Raf、ERK、CREB表达呈正相关,而与DYN表达呈负相关;子宫内膜BDNF表达与Raf、ERK表达无相关性,与CREB表达呈正相关,与DYN表达呈负相关。结论:静脉注射Dex对大鼠分娩疼痛抑制作用明显,可能与通过BDNF激活MAPK/ERK信号通路密切相关。

整合素β3通过激活MAPK/ERK途径促进鼻咽癌细胞转移

鼻咽癌(NPC,nasopharyngeal carcinoma)作为我国南方及东南亚地区高发的一种头颈部恶性肿瘤,远端转移和局部复发是导致其治疗失败的主要原因。本研究通过对不同转移能力的鼻咽癌细胞进行分析,发现整合素β3(ITGB3,integrinβ3)在高转移鼻咽癌细胞中的表达明显高于低转移鼻咽癌细胞。随后的研究表明ITGB3的上调表达促进了鼻咽癌细胞迁移、侵袭、克隆形成以及黏附能力,同时促进了鼻咽癌细胞增殖并抑制其凋亡水平。进一步地,本研究发现,ITGB3主要通过激活MAPK/ERK途径,进而促进鼻咽癌细胞迁移、侵袭、克隆形成以及黏附。因此,研究揭示了ITGB3对鼻咽癌细胞转移的调控作用及其分子机制,为鼻咽癌细胞转移防治与治疗提供了新的理论基础。

恩沃利单抗通过下调SLC1A3/ERK/MAPK信号通路抑制AGS胃癌细胞生长

目的探讨恩沃利单抗对AGS胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法体外培养AGS细胞,实验分为恩沃利单抗组(分别含有2.5、5、10、20、40 mg/mL恩沃利单抗的培养液)和对照组(同等体积的生理盐水)。细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞的活性,Transwell检测细胞的侵袭和迁移,流式检测细胞的凋亡。蛋白质组学检测分析两组差异蛋白和相关信号通路,蛋白印迹对发现的差异蛋白和通路进行验证。结果与对照组相比,恩沃利单抗组显著降低AGS细胞的存活率(P=0.0060);也能够显著抑制AGS细胞的侵袭和迁移细胞数(P=0.0052),并且可以促进AGS细胞的凋亡(P=0.0030)。聚类分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集发现,相比于对照组,恩沃利单抗组中溶质载体家族1成员3(SLC1A3)蛋白的表达显著下调,并与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关。蛋白印迹实验显示,加入了恩沃利单抗的AGS细胞中SLC1A3蛋白的表达明显降低(P=0.0041),丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)和细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的水平也显著降低(P=0.0008)。结论恩沃利单抗可能通过下调SLC1A3的表达,抑制ERK/MAPK信号通路,发挥抑制AGS胃癌细胞生长的作用。恩沃利单抗可能存在多个抗肿瘤作用机制。

mTOR和ERK/MAPK信号通路调控自噬在孤独症发病中的作用

孤独症是一种以重复刻板样行为和社交缺陷为主要特征的神经发育障碍性疾病,发病率高的特点使其逐渐成为研究的热点。中国与西方国家孤独症的发病率相似,约为1%,位于儿童精神疾病的前列^([1])。目前认为孤独症由环境和遗传因素共同决定,病因复杂,具体机制尚不明确。随着研究的深入,自噬在孤独症发病机制中的作用受到广泛关注。

欧前胡素调节ERK/MAPK信号通路对肺结核大鼠炎症反应的影响

目的 探讨欧前胡素(Imp)调节细胞外调节蛋白激酶(ERK)/有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路对肺结核大鼠炎症反应的影响。方法 64只大鼠随机分为对照组12只及造模组52只,造模组大鼠通过尾部注射结核杆菌方法建立肺结核大鼠模型,之后随机分为模型组、Imp低(Imp-L,25 mg/kg)、中(Imp-M,50 mg/kg)、高剂量(Imp-H,100 mg/kg)组、Imp-H+ERK特异性激活剂(EGF,100 mg/kg Imp+25 mg/kg EGF)组。干预结束后,主动脉采血,ELISA检测各组大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)、环氧化酶-2(COX-2)水平;分离肺组织,HE、Tunel分别检测大鼠肺组织病理学变化及细胞凋亡情况;统计肺组织中结核杆菌菌落数;Western blot检测p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达水平。结果 与对照组相比,模型组肺组织严重病变,IL-6、IFN-γ、COX-2、细胞凋亡率、结核杆菌菌落数、p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达均显著增加(P<0.05);与模型组相比,Imp-L组、Imp-M组、Imp-H组病理损伤得到缓解,IL-6、IFN-γ、COX-2、细胞凋亡率、结核杆菌菌落数、p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达显著降低,以Imp-H组变化最为显著(P<0.05);与Imp-H组相比,Imp-H+EGF组病理损伤进一步加重,IL-6、IFN-γ、COX-2、细胞凋亡率、结核杆菌菌落数、p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达显著增加(P<0.05)。结论 Imp可降低肺结核炎症反应,与抑制ERK/MAPK信号通路的激活有关。

锌指蛋白-36缺陷抑制小鼠的成骨细胞分化:基于激活ERK/ MAPK通路

目的探究锌指蛋白-36(ZFP36)对成骨细胞分化的调控作用及机制。方法通过提取小鼠原代骨髓间充质干细胞,结合小鼠成骨细胞前体细胞系MC3T3-E1,在体外成骨分化诱导状态下观察Zfp36(编码ZFP36)的表达变化。通过干扰RNA技术构建Zfp36缺陷的细胞,观察成骨分化作用的改变。通过第二代转录组测序技术探究Zfp36缺陷细胞成骨分化过程中的转录组水平改变。通过ERK/MAPK信号抑制分子U0126验证Zfp36缺陷对成骨分化作用的调控机制。结果小鼠原代骨髓间充质细胞以及MC3T3-E2细胞中Zfp36表达在成骨分化0~14d过程中呈逐渐升高趋势,在第7天到达峰值时较第0天升高3.85倍(P<0.0001)。抑制上述细胞Zfp36的表达后,成骨分化过程中碱性磷酸酶染色及茜素红染色弱于对照组,成骨分化标志基因Alpl(P<0.01)、Sp7(P<0.001)、Bglap(P<0.01)、Ibsp(P<0.0001)表达显著减弱。转录本测序结果提示Zfp36缺陷细胞的下调基因富集到骨矿化相关基因集中,且与ERK信号相关。蛋白表达检测显示Zfp36缺陷细胞的磷酸化ERK蛋白比例较对照组升高2.1倍(P=0.0274)。通过分子化合物U0126抑制Zfp36缺陷细胞中被激活的ERK/MAPK信号,可观察到表型挽救现象,并且呈剂量依赖。Zfp36缺陷细胞在10μmol/L度U0126作用下碱性磷酸酶染色增强,成骨细胞分化标志基因Runx2(P<0.05)及Bglap(P<0.05)表达显著增高。结论ZFP36参与了小鼠成骨细胞的分化调控过程,Zfp36缺陷会引起ERK/MAPK信号通路的激活,进而抑制成骨细胞向骨细胞的分化。

黄芪甲苷对肥胖型多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗及MAPK/ERK通路的影响

目的研究黄芪甲苷对肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠胰岛素抵抗(IR)的改善作用,并分析对其卵巢MAPK/ERK通路的影响。方法来曲唑联合高脂高糖饮食法构建肥胖PCOS大鼠模型,随机分为模型组、二甲双胍(135 mg/kg)组和低、高剂量黄芪甲苷(25、50 mg/kg)组,每组8只,另设对照组,连续灌胃给药21 d后,记录体质量,计算卵巢指数,测定空腹血糖(FBG)、血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、促卵泡激素(FSH)、睾酮(T)、雌二醇(E_(2))、促黄体生成素(LH)及空腹胰岛素(FINS)水平,计算HOMA-IR和LH/FSH值,HE染色观察卵巢组织形态,Western blot法检测卵巢组织MAPK/ERK通路相关蛋白表达,免疫荧光法检测卵巢组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠卵巢形态呈多囊样病态改变,体质量、卵巢指数、血清TG、TC、LH、FSH、T、FINS、FBG水平、LH/FSH和HOMA-IR值、卵巢组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-MEK1/2/MEK1/2、p-Raf/Raf、VEGF蛋白表达升高(P<0.01),血清E_(2)水平降低(P<0.01);与模型组比较,黄芪甲苷各剂量组和二甲双胍组大鼠卵巢多囊样病变明显缓解,体质量、卵巢指数、血清TG、TC、LH、FSH、T、FINS、FBG水平、LH/FSH和HOMA-IR值、卵巢组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-MEK1/2/MEK1/2、p-Raf/Raf、VEGF蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),血清E_(2)水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪甲苷可拮抗肥胖PCOS大鼠IR,改善激素水平,减轻其卵巢病变,该作用可能与抑制MAPK/ERK通路活化有关。

铜离子激活MAPK-ERK通路调控鼻咽癌放射敏感性

目的探究铜离子(Cu^(2+))对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞放射敏感性的影响,寻找提升NPC放疗效果的潜在靶标。方法细胞Cu^(2+)检测对比正常鼻咽上皮细胞系NP69及多种NPC细胞系内Cu^(2+)的含量;分别加入0、5、10、20、50、100、200μmol/L Cu^(2+)溶液及0、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mmol/L TEPA溶液,利用CCK-8实验测定NPC细胞内Cu^(2+)含量对辐照前后细胞存活率的影响,并确定后续实验中Cu^(2+)组及TEPA组所使用的药物浓度;CCK-8实验及克隆形成实验检测药物处理后各组NPC细胞放射敏感性的变化;Western blot检测各组NPC细胞辐照处理前后的DNA损伤情况及MAPK-ERK通路相关蛋白表达。结果NPC细胞中Cu^(2+)含量显著高于正常鼻咽上皮细胞(P<0.05)。添加Cu^(2+)溶液浓度低于50μmol/L时促进CNE1细胞的放疗抵抗性,添加0.1~0.2 mmol/L TEPA能提高SUNE1细胞放射敏感性(P<0.05)。与对照组比较,Cu^(2+)组NPC细胞放疗抵抗性增强,TEPA组NPC细胞放疗敏感性增强(P<0.05)。较之对照组而言,Cu^(2+)组细胞MAPK-ERK通路活化程度上调(P<0.05)。使用MAPK-ERK通路抑制剂SCH772984能够有效逆转Cu^(2+)介导的NPC放疗抵抗(P<0.05)。结论NPC细胞中Cu^(2+)含量升高,其通过激活MAPK-ERK通路增强NPC细胞的放疗抵抗性。

基于MAPK/ERK通路探讨益肾调经丸对大鼠多囊卵巢综合征的作用和机制研究

目的:探讨益肾调经丸对大鼠多囊卵巢综合征模型的作用及其机制。方法:70只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、空白对照组、达英35组和益肾调经丸低、中、高剂量组,每组10只。采用来曲唑+高脂饲料造模,造模成功后,各治疗组和空白对照组使用相应剂量的药物灌胃28 d。ELISA法检测血清睾酮(T)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平,计算LH/FSH;观察卵巢形态改变;HE染色法观察卵巢镜下观;Real-time PCR法检测卵巢组织中CYP17A1、CYP19A1 mRNA表达;Western blot检测p-ERK1/2的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠卵巢可见多囊样改变,血清T、LH水平升高,FSH降低,LH/FSH升高,卵巢呈多囊样改变,卵巢组织中CYP17A1 mRNA表达升高,CYP19A1 mRNA表达降低,p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组对比,空白对照组各检测指标无明显变化,各给药组大鼠卵巢多囊样改变缓解,血清T、LH水平降低,FSH升高(P<0.05),卵巢多囊样改变减轻,卵巢组织中CYP17A1 mRNA表达降低,CYP19A1 mRNA表达升高(P<0.05),治疗组p-ERK1/2蛋白表达水平有不同程度改善,其中益肾调经丸各治疗组的改善比较差异有统计学意义(P<0.05),达英35组的变化比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益肾调经丸能够改善PCOS大鼠性激素水平,减轻卵巢多囊样改变。益肾调经丸可能是通过MAPK/ERK信号通路降低CYP17A1、上调CYP19A1表达,降低雄激素水平,从而改善PCOS大鼠卵巢多囊样改变及高雄激素状态。

老年冠心病患者PCI术后心肌再灌注损伤与ERK/MAPK信号通路的相关性

目的探讨老年冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心肌再灌注损伤的影响因素及与细胞外调节蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)信号通路活化的相关性。方法选择2020年3月至2022年12月于郑州大学附属郑州中心医院心血管内科92例行PCI的老年冠心病患者作为研究对象,采用实时荧光定量PCR检测患者术前ERK、p38-MAPK mRNA的表达,评估PCI术后心肌再灌注损伤情况,分析其影响因素及与ERK/MAPK信号通路指标的关系。结果92例患者中20例(21.74%)PCI术后出现心肌再灌注损伤(损伤组,n=20)。损伤组患者PCI术前血流分级≤2级、Killip分级≥2级比例显著高于非损伤组患者,术前血清ERK、p38-MAPK mRNA表达量高于非损伤组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素回归分析示,术前血流分级≤2级、Killip分级≥2级及血清ERK、p38-MAPK水平升高是老年冠心病患者PCI术后出现心肌再灌注损伤的影响因素(P<0.05)。结论除血流分级、Killip分级外,术前ERK/MAPK信号通路相关指标高表达可增加老年冠心病患者PCI术后心肌再灌注损伤风险,临床应予以密切监测,以尽早识别心肌再灌注损伤并采取针对性干预措施。

基于MAPK/ERK/NF-κB信号通路探讨中西医结合治疗原发性痛经的研究进展

痛经(Dysmenorrhea)是临床常见妇科疾病,中医亦称“经行腹痛”,是指女性在行经前后或月经期,下腹部出现痉挛性疼痛,亦可放射至腰骶部,伴或不伴有恶心呕吐、腹泻及头晕乏力等全身症状。痛经可分为原发性和继发性两类,其中原发性痛经指生殖器官无器质性病变者;继发性痛经则是由于盆腔器质性疾病,如子宫内膜异位症、子宫腺肌症、子宫肌瘤、盆腔炎或宫颈狭窄等引起者。目前西医治疗原发性痛经多以解痉止痛的药物治疗,疗效虽显著而快速,但是副作用较大,停药后易复发;而中医在临床上四诊合参,辨证论治,不仅可以标本同治,也有助于预防调摄。通过梳理归纳近10年国内外原发性痛经的文献资料,基于MAPK/ERK/NF-κB信号通路探析原发性痛经的中西医研究进展,以期为中医药防治原发性痛经提供理论依据。现将原发性痛经的研究现状综述如下。

熊果酸通过MAPK/ERK信号通路对变应性鼻炎小鼠炎症反应的影响

目的:探讨熊果酸对变应性鼻炎小鼠模型炎症状态的影响。方法:将40只BALB/c小鼠随机分为模型组、熊果酸组和对照组,熊果酸组小鼠根据熊果酸干预浓度差异(150 mg/mL和300 mg/mL)分成2组亚组(低剂量和高剂量熊果酸组)。模型组小鼠:将100μg卵清蛋白联合2 mg Al(OH)3溶于0.1 mL浓度为0.9%氯化钠溶液中,第0、2、4、6、8、10、12、14天对小鼠进行腹腔注射,第15天开始将500μg卵清蛋白溶于10μL 0.9%氯化钠溶液中并对小鼠进行滴鼻(每个鼻孔10μL)处理,连续激发11 d,制备变应性鼻炎小鼠模型;熊果酸组:将熊果酸溶于浓度为0.9%氯化钠溶液中配置成150 mg/mL和300 mg/mL浓度,造模的同时额外进行腹腔注射熊果酸溶液每天0.3 mL;对照组:参照模型组,采用0.9%氯化钠溶液进行处理。观察小鼠过敏性症状如喷嚏、流涕、挠鼻等行为并进行评分。检测各组小鼠鼻黏膜组织中磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(P-MAPK)、白细胞介素-17 (IL-17)和白细胞介素-33 (IL-33)的蛋白表达水平及血清炎症因子IL-17、IL-33、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)水平。结果:模型组小鼠症状累计得分为(8.26±0.35)分,显著高于150 mg/mL熊果酸组小鼠(6.11±0.44)分和300 mg/mL熊果酸组小鼠(4.25±1.02)分,差异均有统计学意义(P<0.05);150 mg/mL熊果酸组小鼠症状得分显著高于300 mg/mL熊果酸组小鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。4组小鼠鼻黏膜组织中P-ERK、P-MAPK、IL-17、IL-33蛋白表达水平存在显著差异(P<0.05)。与模型组相比,熊果酸组小鼠P-ERK、P-MAPK、IL-17及IL-33蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);对比不同剂量熊果酸组发现,300 mg/mL熊果酸组P-ERK、P-MAPK、IL-17及IL-33蛋白表达水平显著低于150 mg/mL熊果酸组(P<0.05)。与模型组比较,150 mg/mL熊果酸组小鼠血清炎症因子IL-17、IL-33及TNF-α水平显著降低;但与300 mg/mL熊果酸组相比,150 mg/mL熊果酸组血清炎症因子IL-17、IL-33及TNF-α水平显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:熊果酸能缓解变应性鼻炎小鼠模型的炎症状态,可能与抑制P-ERK的蛋白表达有关。

重组人转化生长因子-β1对大鼠正畸牙移动模型成骨细胞分化及ERK/MAPK信号通路的影响

目的:探讨重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对大鼠正畸牙移动模型细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及成骨细胞分化的影响。方法:将SD大鼠随机分为:对照组、模型组、rhTGF-β1低剂量组、rhTGF-β1中剂量组、rhTGF-β1高剂量组。模型组、rhTGF-β1低、中、高剂量组建立大鼠正畸牙移动模型,各组从造模第1天开始给药,rhTGF-β1(低、中、高)剂量组于双侧上颌第一磨牙近中牙龈黏膜下分别注射1.25、2.5、5 ng/mL的rhTGF-β1溶液0.1 mL,对照组注射0.1 mL生理盐水,每2 d给药1次,持续14 d。游标卡尺测量大鼠上颌第一磨牙移动距离;苏木精-伊红染色观察大鼠牙周及牙槽骨组织病理形态;酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)水平;Western blot检测大鼠牙周及牙槽骨组织成骨相关蛋白[骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)]和ERK/MAPK通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠牙张力侧牙周组织膜纤维拉伸变长,组织间隙变宽,基质增生,成骨细胞数量大量减少近乎消失,呈现病理损伤,上颌第一磨牙移动距离、血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平明显升高,血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,rhTGF-β1低、中、高剂量组大鼠牙张力侧牙周及牙槽骨组织病理损伤逐步减轻,血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平依次降低,上颌第一磨牙移动距离、血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平依次升高(P<0.05),且各组之间呈剂量依赖性。结论:rhTGF-β1可减轻大鼠正畸牙移动模型炎症反应,促使成骨分化,加速正畸牙移动,可能与抑制ERK/MAPK信号通路激活有关。

二甲双胍通过ERK/p38 MAPK信号通路抑制软骨细胞损伤

目的探讨二甲双胍(metformin,Met)能否通过ERK/p38 MAPK信号通路抑制白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的大鼠软骨细胞损伤。方法胰酶消化法分离出原代大鼠软骨细胞,贴壁培养至第3代备用。以浓度为10 ng/ml IL-1β刺激软骨细胞构建软骨细胞损伤模型,并以软骨细胞活力下降及凋亡增加作为模型构建成功的评判标准。用不同浓度的Met(0.01,0.1,1.0,10 mmol/L)分别对软骨细胞损伤模型进行干预,以CCK-8法筛选出Met的最适干预浓度,并以此浓度进行后续实验。取第3代软骨细胞按干预方式分为3组:control组(培养基作用24 h)、IL-1β组(IL-1β作用24 h)、IL-1β+Met组(先后用IL-1β和Met各作用24 h)。用流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blot检测细胞中IL-1β、COX-2、MMP-13、p-p38MAPK、p-ERK的蛋白表达。结果与control组比较,IL-1β组软骨细胞活力降低(P<0.001)、凋亡增加(P<0.001),说明造模成功。1.0 mmol/L的Met对软骨细胞损伤模型的干预效果最佳,故以1.0 mmol/L为最适干预浓度。与IL-1β组比较,IL-1β+Met组软骨细胞活力增高(P<0.01)、凋亡减少(P<0.05)。与control组比较,IL-1β组IL-1β、COX-2、MMP-13、p-p38MAPK和p-ERK蛋白表达增加(P<0.01);与IL-1β组比较,IL-1β+Met组IL-1β、COX-2、MMP-13、p-p38MAPK和p-ERK蛋白表达降低(P<0.05)。结论二甲双胍(Met)可抑制IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制可能与ERK/p38 MAPK信号通路下调有关。

人参皂苷Rg3激活MAPK/ERK信号通路促进T细胞功能的抗肿瘤机制

目的探讨人参皂苷Rg3调节CD8^(+)T细胞功能从而增加抗肿瘤的作用,并阐明其作用机制。方法MTT法检测Rg3对CD8^(+)T细胞的影响以及对Rg3作用后的CD8^(+)T细胞对黑色素瘤B16F10的杀伤能力,并通过显微镜进行细胞形态学观察;EDU检测B16F10细胞增殖情况;流式细胞术分析对CD8^(+)T细胞功能作用;Western blot检测相关蛋白表达;实时定量PCR检测mRNA变化。结果Rg3可显著增加CD8^(+)T细胞对肿瘤细胞的杀伤能力,并促进功能性记忆T细胞的转化。Rg3增加T细胞释放杀伤因子IL-2及IFN-γ及其mRNA的表达,增加功能性T细胞(central memory T cell,TCM)的比例。进一步数据显示,Rg3促进功能性T细胞分化进而促进T细胞杀伤活性抗肿瘤与激活MAPK/ERK通路正相关。结论人参皂苷Rg3通过激活MAPK/ERK通路促进CD8^(+)T淋巴细胞的杀伤性作用而增加抗肿瘤作用。

益肺宣肺降浊方通过EGFR调节PI3K/Akt-MAPK/Erk通路改善血管性痴呆大鼠的记忆

目的 探讨益肺宣肺降浊方通过表皮生长因子受体(Objective Epidermal growth factor receptor, EGFR)调节PI3K/Akt-MAPK/Erk通路改善对血管性痴呆(VaD)的作用及机制。方法 建立大脑中动脉栓塞法(Middle Cerebral Artery Occlusion, MCAO)大鼠血管性痴呆模型;给予益肺宣肺降浊方联合PTEN、EGFR和MAPK抑制剂,进行行为学实验,并运用Western Blot、免疫荧光、电镜透射等技术检测益肺宣肺降浊方对VaD可能通过PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路作用机制进行探索。结果 益肺宣肺降浊方呈剂量依赖性改善VaD大鼠的记忆能力及脑海马组织的病理、降低神经元凋亡。上调EGFR激活PI3K/Akt信号通路与MAPK/Erk信号通活性。结论 益肺宣肺降浊方对VaD大鼠的作用可能通过VEGF受体EGFR调节PI3K/Akt信号通路与MAPK/Erk信号通活性,以及PI3K/Akt与raf1-MAPK/Erk的串扰作用,增强Erk1/2磷酸化,进而促进神经细胞存活、神经元形态,最终达到修复记忆能力,治疗血管性痴呆的作用。

电针对帕金森病小鼠肠道ERK MAPK/NF-κB通路的影响

目的:探讨电针对帕金森病(PD)小鼠肠道ERK MAPK/NF-κB通路的影响。方法:采用鱼藤酮连续灌胃28 d构造PD小鼠模型,将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组与电针组。电针组小鼠电针刺激“风府”“太冲”“足三里”穴,30 min/次,1次/d,连续治疗14 d。观察各组小鼠行为学变化;免疫组化法检测黑质及结肠组织中α突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)的平均光密度;Western blot法检测结肠组织中目的蛋白表达;实时荧光定量PCR检测结肠组织中TNF-α和IL-1βmRNA的相对含量。结果:与对照组比较,模型组小鼠运动总路程、运动时间、穿过总分区及平均速度均降低,差异具有统计学意义(P<0.01);黑质和结肠组织中α-syn平均光密度升高,差异具有统计学意义(P<0.01);结肠组织中p-ERK MAPK、p-NF-κB蛋白表达及TNF-α和IL-1βmRNA水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,电针组小鼠运动总路程、运动时间、穿过总分区及平均速度均增加,差异具有统计学意义(P<0.01);黑质和结肠组织中α-syn平均光密度降低,差异具有统计学意义(P<0.01);结肠组织中p-ERK MAPK、p-NF-κB蛋白表达及TNF-α和IL-1βmRNA水平降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:电针“风府”“太冲”“足三里”可以改善PD小鼠的运动功能障碍,降低α-syn表达,同时抑制肠道ERK MAPK/NF-κB通路激活。

依托咪酯调节MAPK/ERK信号通路对骨关节炎大鼠软骨损伤的影响

目的:探究依托咪酯(ET)对骨关节炎(OA)大鼠软骨损伤的影响以及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的调节作用。方法:将SPF级SD雄性大鼠72只,随机分6组:假手术组、模型组、阳性组(15mg/kg的双氯芬酸钠)以及ET低(1.5mg/kg)、中(3mg/kg)、高剂量(6mg/kg)组。评估各组大鼠关节水肿和承重不对称情况;检测各组大鼠压痛阈值和热痛阈值;HE观察各组大鼠软骨病理损伤情况并进行Mankin评分;酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)以及软骨寡聚基质蛋白(COMP)的水平;Western blot检验软骨组织中基质蛋白酶-13(MMP-13)及通路蛋白ERK及其磷酸化p-ERK蛋白的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠右后肢膝关节水肿和关节承重不对称性增大,软骨组织缺损且软骨层变薄,软骨细胞数量变少,血清中TNF-α、IL-1β、COMP水平升高,软骨MMP-13、p-ERK1/2蛋白表达及p-ERK1/2/ERK1/2比例升高(P<0.05)。与模型组相比,阳性组和ET不同剂量组右后肢膝关节水肿和关节承重不对称性减小,软骨损伤被逐渐修复,细胞数量增多且排列均匀,软骨层变厚,血清中TNF-α、IL-1β、COMP水平降低,软骨MMP-13、p-ERK1/2蛋白表达及p-ERK1/2/ERK1/2比例降低(P<0.05)。结论:ET能够减轻OA大鼠软骨组织的病理损伤,降低血清中促炎因子的表达,可能通过抑制MAPK/ERK信号通路的活化实现。