1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病细胞模型中细胞焦亡的抑制作用

目的探讨1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型中细胞焦亡的抑制作用及其机制。方法将PC12细胞分为对照组、模型组、Caspase-1-siRNA组、NC-siRNA组、1,25(OH)_(2)D_(3)组、联合干预组。对照组仅用DMEM高糖培养基培养细胞;模型组用20μmol/L Aβ_(1-42)处理细胞以造模;Caspase-1-siRNA组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);NC-siRNA组先用50 nmol/L NC-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);1,25(OH)_(2)D_(3)组用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预后加入20μmol/L Aβ_(1-42);联合干预组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,然后用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预,最后加入20μmol/L Aβ_(1-42)。细胞免疫荧光检测凋亡相关斑点蛋白(ASC)蛋白的表达;Western blot检测细胞焦亡通路相关蛋白表达,包括:NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-Caspase-1)、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、消皮素D-N端(GSDMD-N)、IL-1β、IL-1β前体(pro-IL-1β)、IL-18和IL-18前体(pro-IL-18)蛋白;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色检测细胞膜通透性。结果与对照组相比,模型组ASC蛋白荧光强度增强(P<0.01),细胞焦亡通路相关蛋白表达均增加(P<0.05),细胞膜通透性变大(P<0.01)。与模型组相比,1,25(OH)_(2)D_(3)组和Caspase-1-siRNA组ASC蛋白荧光强度减弱(P<0.01),pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD-N、pro-IL-1β、IL-1β、pro-IL-18和IL-18蛋白表达均下调(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。与Caspase-1-siRNA组相比,联合干预组GSDMD-N和IL-18蛋白表达降低(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。结论Aβ_(1-42)能够诱导PC12细胞发生细胞焦亡现象。1,25(OH)_(2)D_(3)可以通过抑制Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞发生焦亡来发挥其抗炎的神经保护作用,其机制与Caspase-1的抑制密切相关。

慢性肾脏病患者血清STC1、1,25-(OH)2D3与疾病严重程度的关系

目的:检测慢性肾脏病患者血清斯钙素1(STC1)、1,25-羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]水平并探究其与疾病严重程度的关系。方法:选取在本院确诊的126例慢性肾脏病患者作为研究对象(研究组),同期在本院体检健康的受试者56例作为对照组。比较不同严重程度患者血清STC1、1,25-(OH)2D3水平,以Pearson相关性分析1,25-(OH)2D3、STC1在慢性肾脏病患者血清中的相关性。多因素Logistic回归分析影响慢性肾脏病患者肾功能重度损害相关因素。结果:研究组血清STC1、BUN、Scr水平明显高于对照组(P<0.05),1,25-(OH)2D3水平低于对照组(P<0.05);慢性肾脏病1期、2期、3期、4期、5期患者血清STC1水平依次升高(P<0.05),1,25-(OH)2D3水平依次降低(P<0.05);慢性肾脏病3期、4期、5期BUN、Scr水平逐次升高,且均高于1期、2期(P<0.05)。STC1与BUN、Scr水平均呈正相关(r=0.698、0.702,P<0.01),1,25-(OH)2D3与血清BUN、Scr水平均呈负相关(r=0.698、0.702,P<0.01);STC1、BUN、Scr是影响慢性肾脏病患者肾功能重度损害的危险因素,而1,25-(OH)2D3是慢性肾脏病患者肾功能重度损害的保护因素(P<0.05)。结论:慢性肾脏病患者血清STC1表达较高,1,25-(OH)2D3水平呈低表达,与疾病严重程度关系密切,为影响慢性肾脏病疾病严重程度的独立危险因素,且两者呈负相关,可能作为评估慢性肾脏病患者严重程度的有效、潜在指标。

1,25-(OH)_(2)-VitD3通过抑制Snail1-SMAD3/SMAD4复合物形成减轻糖尿病肾病肾小管间质纤维化

目的研究1,25-(OH)2-VitD3(VitD3)对糖尿病肾病肾小管间质纤维化的影响.方法NRK-52E肾小管上皮细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖培养基处理)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖的培养基处理)和高糖加VitD3组(25 mmol/L葡萄糖培养基联合10-8 mol/L VitD3).实时定量PCR和Western blot法分别检测NRK-52E细胞Snail家族转录抑制物1(Snail1)、SMAD家族成员3(SMAD3)、SMAD4、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA和蛋白表达;免疫荧光细胞化学染色检测Snail1、SMAD3、SMAD4的表达及定位;通过染色质免疫沉淀检测Snail1与SMAD3/SMAD4形成的复合物与柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)的启动子结合情况;荧光素酶报告检测Snail1、SMAD3/SMAD4和E-cadherin的相互作用;采用小干扰RNA(siRNA)抑制细胞Snail1、SMAD4的表达后,通过实时定量PCR检测E-cadherin的mRNA表达.SD大鼠随机分为对照组、DKD组和VitD3处理组.DKD组和VitD3处理组通过注射链脲佐菌素(STZ)先制备DKD模型,DKD造模成功后,VitD3处理组予60ng/kgVitD3灌胃,对照组和DKD组给予生理盐水灌胃;DKD组和VitD3处理组同时皮下注射胰岛素(1~2)U/kg控制血糖,持续8周.采用实时定量PCR和Western blot法分别检测肾组织中Snail1、SMAD3、SMAD4、α-SMA、E-cadherin的mRNA和蛋白水平,免疫组织化学检测肾组织Snail1、SMAD3、SMAD4、α-SMA和E-cadherin的表达及定位.结果与对照组相比,高糖处理的NRK-52E细胞及DKD肾组织Snail1、SMAD3、SMAD4和α-SMA的mRNA和蛋白表达均上调,E-cadherin表达下调;给予VitD3干预后,DKD模型中Snail1、SMAD3、SMAD4、α-SMA和E-cadherin的表达水平恢复到与对照组接近.染色质免疫沉淀提示Snail1、SMAD3/SMAD4与CAR的启动子Ⅳ结合,而VitD3能够阻止Snail1、SMAD3/SMAD4与CAR的启动子Ⅳ结合;荧光素酶报告检测证实Snail1、SMAD3/SMAD4和E-cadherin的互作关系;用siRNA抑制Snail1、SMAD4的mRNA后,上调高糖诱导下E-cadherin的表达.结论VitD3可抑制Snail1-SMAD3/SMAD4的复合物的形成,减轻糖尿病肾病肾小管间质纤维化.

血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平与脑小血管病患者认知功能损害程度的相关性分析

目的研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)_(2)D_(3)]水平与脑小血管病(CSVD)患者认知功能损害(CI)程度的相关性.方法选取2020年7月-2021年8月河北医科大学第一医院神经内科收治的126例CSVD患者,入院后参照简易智能状态检查量表(MMSE)分为CSVD并发CI组(MMSE<27分,n=89)及CSVD无并发CI组(MMSE≥27分,n=37).比较两组同型半胱氨酸(Hcy)、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-硝基酪氨酸(3-NT)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,通过ROC分析Hcy、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-NT、hs-CRP、HDL-C预测CSVD并发CI的价值.根据MMSE量表评分评估患者认知功能,将89例CSVD并发CI患者分为轻度组(21分≤MMSE量表评分<27分,n=46)、中度组(10分≤MMSE量表评分<21分,n=28)、重度组(MMSE量表评分<10分,n=15),比较三组患者Hcy、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-NT、hs-CRP、HDL-C水平差异,通过Spearman相关系数分析血清Hcy、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-NT、hs-CRP、HDL-C与CI严重程度的相关性.结果CSVD并发CI组血清Hcy、3-NT、hs-CRP显著高于CSVD无并发CI组,1,25(OH)_(2)D_(3)、HDL-C水平显著低于CSVD无并发CI组,差异有统计学意义(P<0.05);经ROC分析,Hcy≥14.516μmol·L^(-1)、1,25(OH)_(2)D_(3)≤0.325ng·mL^(-1)、3-NT≥5.741ng·mL^(-1)、hs-CRP≥3.149mg·L^(-1)、HDL-C≤1.160mmol·L^(-1)是预测CSVD并发CI的最佳截断值,曲线下面积分别为0.901、0.894、0.899、0.916、0.904,敏感度为0.932、0.838、0.932、0.943、0.865,特异性为0.865、0.932、0.892、0.865、0.920,且P<0.05;不同CI程度患者血清Hcy、3-NT、hs-CRP比较,轻度组<中度组<重度组;1,25(OH)_(2)D_(3)、HDL-C水平比较,轻度组>中度组>重度组,差异有统计学意义(P<0.05);经相关性分析,CI程度与血清Hcy、3-NT、hs-CRP呈正相关,与1,25(OH)_(2)D_(3)、HDL-C呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05).结论血清Hcy、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-NT、hs-CRP、HDL-C与CSVD并发CI发病机制相关,且CI程度与血清Hcy、3-NT、hs-CRP呈正相关,与1,25(OH)_(2)D_(3)、HDL-C呈负相关.

血清IL-17、25-(OH)D3、NLR水平对小儿疱疹性咽峡炎的早期诊断价值

目的:探讨白细胞介素-17(IL-17)、25羟基维生素D3[25-(OH)D3]、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)与小儿疱疹性咽峡炎的诊断效能。方法:选取95例小儿疱疹性咽峡炎作为研究组,按照1:1配比原则选择同期95例健康体检儿童作为对照组。比较两组及不同病情程度患儿治疗前后血清IL-17、25-(OH)D3、NLR水平,受试者工作特征(ROC)分析各血清指标联合检测对小儿疱疹性咽峡炎的早期诊断价值,分析不同水平血清指标发生小儿疱疹性咽峡炎的危险度。结果:研究组治疗前后IL-17、NLR水平高于对照组,25-(OH)D3水平低于对照组;治疗前不同病情程度IL-17、NLR比较,差异有统计学意义,重度>中度>轻度;治疗前不同病情程度25-(OH)D3比较,差异有统计学意义,重度<中度<轻度;血清IL-17、25-(OH)D3、NLR水平联合诊断优于单独诊断;血清IL-17、NLR高水平发生小儿疱疹性咽峡炎的危险度是低水平的3.739、4.000倍,25-(OH)D3低水平发生小儿疱疹性咽峡炎的危险度是高水平的3.400倍;差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:血清IL-17、25-(OH)D3、NLR异常表达与小儿疱疹性咽峡炎发展有关,且联合检测有助于提高患儿早期诊断效能。

1,25(OH)_(2)D_(3)及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响

旨在研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊,分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞,用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^(-1)1,25(OH)_(2)D_(3)处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染,同时设置阴性对照组和空白对照组,每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)_(2)D_(3)处理以及VDR基因敲除后,分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达,用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明,1,25(OH)_(2)D_(3)能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD113、gBD116、gBD120、gBD 121以及gBD 123基因的表达(P<0.01),显著提高gBD106、gBD127、gBD 129以及gBD 134基因的表达(P<0.05),而对gBD 110like和gBD 128基因没有显著影响(P>0.05);3个基因敲除载体进行细胞转染后,pCas9-VDR-V1组VDR蛋白表达极显著降低(P<0.01)。VDR基因敲除极显著降低gBD124的mRNA和蛋白表达(P<0.01),显著降低gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.05),同时VDR基因敲除组gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD116、gBD123、gBD127、gBD 128以及gBD 134基因的表达极显著低于其他组(P<0.01),VDR基因敲除组gBD104、gBD106、gBD 120以及gBD 129基因的表达显著低于其他组(P<0.05),而对gBD121、gBD 110like以及gBD 113的相对表达则无显著影响(P>0.05)。综上所述,1,25(OH)_(2)D_(3)可以上调VDR和部分β防御素表达;VDR基因敲除后降低部分β防御素表达,结果表明1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调VD/VDR信号通路关键基因VDR的表达调控山羊附睾头上皮细胞部分β防御素表达。

1,25（OH）2D3干预糖尿病肾病模型大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1的变化

背景:1,25(OH)2D3在糖尿病肾病的发展过程中发挥着重要调节作用。目的:探索1,25(OH)2D3对糖尿病肾病大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1表达的影响作用。方法:实验方案经新疆医科大学动物实验中心动物实验伦理委员会批准。将25只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组、糖尿病肾病+花生油组,后2组分别给予骨化三醇(即1,25(OH)2D3,活性维生素D3)0.03μg/(kg?d)治疗、花生油对照处理。37 d后采集标本,以实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot及免疫组织化学方法检测大鼠肾脏组织转化生长因子β1的表达;RT-PCR检测MicroRNA-130b的表达;采用苏木精-伊红及Masson染色对大鼠肾脏形态结构及纤维化程度进行分析。结果与结论:①RT-PCR结果显示,糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组及糖尿病肾病+花生油组MicroRNA-130b的表达明显低于正常对照组(P<0.01),糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组明显高于糖尿病肾病+花生油组(P<0.01);②RT-PCR、Western blot、免疫组织化学及病理结果显示,糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组及糖尿病肾病+花生油组转化生长因子β1 mRNA和蛋白的表达、大鼠肾脏组织结构紊乱及纤维化程度明显高于正常对照组(P<0.01),糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组明显低于糖尿病肾病+花生油组(P<0.01);③结果说明,糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-130b表达水平下降,转化生长因子β1 mRNA及蛋白表达水平升高,肾脏组织结构紊乱及纤维化程度严重;1,25(OH)2D3可上调糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-130b的表达水平,同时还可下调糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子β1的表达水平,改善肾脏组织结构紊乱及纤维化程度。

早期糖尿病肾病患者1,25-(OH)_2D_3及炎性因子的变化及骨化三醇胶丸的干预作用

目的观察维生素D代谢物1,25-二羟维生素D_3[1,25-(OH)_2D_3]对早期糖尿病肾病(DN)患者炎性因子TGF-β、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平的影响。方法2型糖尿病患者150例,其中单纯糖尿病患者60例为DM组,早期DN 90例为DN组。DN组再随机分为治疗亚组和对照亚组各45例。对照亚组常规治疗,治疗亚组常规治疗+骨化三醇胶丸,疗程均3个月,比较各组1,25-(OH)_2D_3、24 h尿蛋白定量及相关炎性因子的变化。结果治疗前,DN组1,25-(OH)_2D_3水平低于DM组(P<0.05);TGF-β、TNF-α、IL-6、hs-CRP,24 h尿蛋白定量、SCr水平均高于DM组(P<0.05);治疗亚组治疗后TGF-β、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平及24 h尿蛋白定量均较治疗前降低(P<0.05),1,25-(OH)_2D_3水平较前升高(P<0.05)。对照亚组与治疗亚组不良反应发生率比较差异无统计学意义(11.1】%vs.11.11%,P>0.05)。结论早期DN患者1,25-(OH)_2D_3缺乏,炎性因子水平增高,补充骨化三醇胶丸可以改善炎性反应状态。

1,25(OH)_2D_3对甲状旁腺素诱导的肾小管上皮细胞转分化和TGF-β_1的表达的影响

目的:探讨1,25(OH)2D3对甲状旁腺素(PTH)诱导的肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养在含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液中。对照组:加入等体积含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH刺激组:加入终浓度为10-10 mol/L PTH的含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH+1,25(OH)2D3干预组:加入10-10 mol/L PTH,同时加入不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)的1,25(OH)2D3。刺激HK-2细胞48 h。半定量RT-PCR法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1的基因表达;Western blot法检测细胞中α-SMA和TGF-β1的蛋白表达;免疫细胞化学法检测细胞中α-SMA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1的含量。结果:半定量RT-PCR结果显示,对照组HK-2细胞中几乎无α-SMA的mRNA表达,仅有少量的TGF-β1 mRNA表达;PTH刺激组α-SMA和TGF-β1mRNA表达量与对照组比较明显增加;PTH+1,25(OH)2D3干预组表达量比PTH刺激组显著降低,且随着1,25(OH)2D3浓度的升高呈一定的剂量依赖性(P<0.05)。Western blot结果显示,对照组HK-2细胞中无α-SMA的蛋白表达,仅有少量的TGF-β1蛋白表达;10-10 mol/L的PTH能够明显诱导HK-2细胞中α-SMA的蛋白表达,增加TGF-β1的蛋白表达量;PTH+1,25(OH)2D3干预组,α-SMA和TGF-β1的蛋白表达量比PTH刺激组显著降低(P<0.05)。免疫细胞化学法结果显示,对照组几乎无α-SMA阳性表达的细胞,PTH刺激组可见大量细胞α-SMA表达阳性;PTH+1,25(OH)2D3干预组α-SMA表达阳性的细胞数明显低于PTH刺激组(P<0.05)。ELISA结果显示,对照组细胞上清液中可检测到少量的TGF-β1,PTH刺激组含量显著升高,PTH+1,25(OH)2D3干预组与PTH刺激组比较含量明显降低(P<0.05)。结论:1,25(OH)2D3能够部分拮抗PTH诱导的HK-2细胞转分化和TGF-β1的表达。

p21^(wafl)在1,25(OH)_2D_3调节人骨肉瘤细胞系HOS-8603增殖分化中的作用

目的 :探讨p2 1wafl在 1,2 5 (OH) 2 D3调节人骨肉瘤细胞系HOS - 860 3增殖中的作用。方法 :用定量RT-PCR法检测 1,2 5 (OH) 2 D3对p2 1waflmRNA表达的诱导作用 ,并构建稳定表达p2 1wafl真核表达载体的细胞系HOS -p2 1wafl进一步观察该细胞的生长及分化情况。结果 :1,2 5 (OH) 2 D3作用 2h即可诱导HOS - 860 3细胞内源性p2 1wafl的表达 ,4h达高峰 ,2 4h仍未回降。细胞过度表达p2 1wafl后生长速度明显减慢 ,培养 6d时细胞数为未转染细胞的5 0 % ;并且组织化学染色结果表明细胞的分化标志性抗原碱性磷酸酶 (AKP)的表达明显增强。结论 :表明 1,2 5(OH) 2 D3对p2

脑微出血患者血浆1,25-（OH）2D3,sLRP1水平与头颅SWI影像学特征的相关性

目的研究脑微出血(cerebral microbleeds,CMBs)患者1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25-(OH)2D3],可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1(soluble low density lipoprotein receptor related protein 1,sLRP1)水平与头颅SWI微出血病灶数量及部位等影像学特征的相关关系。方法连续纳入2017年1月~2019年5月就诊于陕西省人民医院的CMBs患者196例(男性152例,女性44例),正常对照组99例(男性67例,女性32例),采集人口学资料及病史。对两组人群进行血浆1,25-(OH)2D3,sLRP1水平的检查。比较两组间血浆1,25-(OH)2D3和sLRP1水平的差异,并统计CMBs组各检验指标与CMBs病灶数量及部位的相关关系。结果CMBs组患者血浆1,25-(OH)2D3,sLRP1水平均低于对照组(23.32±18.91 mmol/L vs 39.60±18.58 mmol/L;237.96±70.62 ng/ml vs 312.61±62.78 ng/ml),差异均具有统计学意义(t=7.07,-9.24,均P<0.01)。CMBs患者血浆sLRP1水平与脑皮质CMBs病灶数量呈负相关(r=0.239,P=0.001),而与脑深部CMBs病灶数量无明显相关(t=-0.096,P>0.05)。结论CMBs患者的血浆1,25-(OH)2D3,sLRP1水平均低于正常人群。高表达的血浆sLRP1可能对脑皮质CMBs的发生具有一定的保护作用。

1,25-(OH)_2D_3对糖尿病大鼠ZO-1表达的影响

目的观察糖尿病(DM)大鼠肾小球ZO-1蛋白的表达,1,25-(OH)2D3对ZO-1蛋白表达及分布的影响。方法Wistar大鼠随机分为3组:对照组、糖尿病组(DM组)、1,25-(OH)2D3组。链脲菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病动物模型,1,25-(OH)2D3组在糖尿病建立时即开始渗透性微量泵按3ng/100g·d皮下给予1,25-(OH)2D3,给药10周处死小鼠,检测血糖、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CysC)、尿红细胞、24h尿蛋白定量(24hUPE);光镜观察肾小球细胞数,细胞外基质(ECM)聚积;Western印迹检测ZO-1蛋白的表达;免疫金荧光染色电镜观察肾小球ZO-1分布的改变。结论DM组大鼠CysC、尿红细胞、24hUPE均高于1,25-(OH)2D3组,差异均有统计学意义(P<0.05)。1,25-(OH)2D3组大鼠较DM组肾小球细胞数减少,细胞外基质聚积减轻(P<0.05或P<0.01)。Western印迹示1,25-(OH)2D3组和对照组肾小球ZO-1表达无显著差异,均明显高于DM组(P<0.01)。免疫金荧光染色显示DM组肾小球ZO-1表达缺失及易位分布明显,1,25-(OH)2D3组ZO-1的表达缺失及易位分布较轻。结论1,25-(OH)2D3可减少尿蛋白的排泄,抑制肾小球细胞数及细胞外基质的增殖,增加足细胞特异蛋白ZO-1的表达,减少其易位,对肾脏有保护作用。

1,25(OH)_2D_3干预IL-17通路抑制大鼠肝纤维化作用机制研究

目的通过检测1,25(OH)_2D_3对大鼠肝组织中IL-17及其相关蛋白表达的影响,探讨1,25(OH)_2D_3抑制肝纤维化形成的作用机制。方法将60只大鼠随机分为四组:对照组、模型组(DMN盐溶液)、药物溶剂组(DMN盐溶液+花生油灌胃)、治疗组(DMN盐溶液+1,25(OH)_2D_3油溶液灌胃),8周后对各组大鼠肝脏行Masson染色,观察其病理学变化,并行纤维化程度分级;免疫组化法(IHC)观察各肝组织中IL-17的蛋白表达;Western blotting法定量检测各组肝脏中IL-17、RORγt及MIP3α蛋白表达;Real time-PCR法分析各组肝脏中IL-17、RORγt和MIP3αmRNA表达量。结果模型组及药物溶剂组大鼠肝脏呈显著纤维化改变,1,25(OH)_2D_3治疗组肝脏纤维化程度较溶剂组明显减轻;模型组和药物溶剂组肝组织中IL-17、RORγt、MIP3α蛋白及mRNA表达量较对照组明显升高,而治疗组中三者蛋白及mRNA表达量较溶剂组显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论1,25(OH)_2D_3抑制肝纤维化发生、发展;1,25(OH)_2D_3可抑制肝组织中IL-17、RORγt及MIP3α蛋白和mRNA表达,从而减轻肝纤维化,提示1,25(OH)_2D_3可能通过干预肝脏IL-17信号通路抑制纤维化进程。

地塞米松和1,25-(OH)_2D_3对EC1细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察地塞米松(DEX)和1,25-(OH)2D3及2药联用对食管鳞状细胞癌EC1细胞增殖及周期的影响。方法:分别用10-7mol/LDEX与10-7mol/L1,25-(OH)2D3以及同种浓度2药联合处理EC1细胞48、72和96h,并设溶剂对照组。采用MTT法检测细胞增殖情况及流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:1,25-(OH)2D3单独应用具有抑制EC1细胞增殖的作用(F1,25-(OH)2D3=51.185,P<0.001);DEX单独应用具有阻滞细胞周期的作用(FDEX=8.170,P=0.009)。DEX、1,25-(OH)2D3及时间3种因素两两间均存在交互作用(细胞增殖抑制:F1,25-(OH)2D3×DEX=11.017,P=0.003;F1,25-(OH)2D3×时间=3.668,P=0.041;FDEX×时间=7.887,P=0.002。G0/G1期细胞比率:F1,25-(OH)2D3×DEX=12.381,P=0.002;F1,25-(OH)2D3×时间=6.583,P=0.005;FDEX×时间=5.096,P=0.014),且两药间提示存在拮抗作用。未发现3因素之间存在交互作用(细胞增殖抑制:F1,25-(OH)2D3×DEX×时间=0.512,P=0.606。G0/G1期细胞比率:F1,25-(OH)2D3×DEX×时间=0.410,P=0.668)。结论:DEX和1,25-(OH)2D3单独及联合使用能对EC1细胞增殖起抑制作用,且使EC1细胞周期阻滞在G0/G1期。

骨关节炎患者血清1,25(OH)_2D_3、IL-17和IL-10水平的变化及临床意义

目的探讨骨关节炎(OA)患者血清1,25-羟基维生素D3[1,25(OH)_2D_3]、白细胞介素(IL)17及IL-10水平变化及临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测91例OA患者(OA组)及80名体检健康者(正常对照组)血清1,25(OH)_2D_3、 IL-17和IL-10水平,同时采用电化学发光法检测血清25-羟基维生素D3[25(OH)D3]水平。采用视觉模拟评分法(VAS)对OA患者的疼痛程度进行评分。采用Spearman相关分析评价各指标之间的相关性。结果与正常对照组比较,OA组血清1,25(OH)_2D_3、25(OH)D3、IL-10水平明显降低(P<0.05),IL-17水平明显升高(P<0.05)。按25(OH)D3水平将患者分为维生素D缺乏、不足和充足3组,维生素D缺乏组VAS评分明显高于维生素D不足组和维生素D充足组(P<0.05),而维生素D不足组与维生素D充足组之间VAS评分差异无统计学意义(P>0.05)。按VAS评分将患者分为轻度疼痛组、中度疼痛组和重度疼痛组。重度疼痛组和中度疼痛组血清1,25(OH)_2D_3水平均明显低于轻度疼痛组(P<0.05);而重度疼痛组与中度疼痛组之间差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关分析显示,1, 2 5 (O H)_2D_3与IL-10呈正相关(r=0.778、P=0.002),与VAS和IL-17呈负相关(r值分别为-0.691、-?0.735,P值分别为0.01、0.007);VAS评分与IL-10呈负相关(r=-0.725,P=0.008),与IL-17呈正相关(r=0.699、P=0.010)。OA患者治疗后血清1,25(OH)_2D_3和IL-10水平明显高于治疗前(P<0.05),但仍低于正常对照组(P<0.05);血清IL-17水平明显低于治疗前(P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3可能与OA的发生及严重程度有一定关系。

活动期炎症性肠病患者骨密度和血清1,25-(OH)D_3水平检测分析

目的：分析检测活动期炎症性肠病（IBD）患者骨密度和血清1，25-（OH）D3水平以及两者之间的关系。方法选择活动期IBD患者65例，健康对照组33例，记录患者身高和体重，采用直接数字化双能X线骨密度仪测量患者腰椎1～4骨密度值，同时检测患者静脉血1，25-（OH）D3、血钙、血磷以及碱性磷酸酶（ALP）。结果溃疡性结肠炎（UC）组、克罗恩病（CD）组、对照组组间的腰1～4骨密度值以及血清1，25-（OH）D3水平等比较，差异有统计学意义（F分别=3.65、14.40，P均＜0.05）；UC组患者腰1～4骨密度值和血清1，25-（OH）D3浓度均低于对照组，差异有统计学意义（P均＜0.05）。 CD组患者腰1～4骨密度值和1，25-（OH）D3水平低于对照组，差异有统计学意义（P均＜0.05）。UC组和CD组患者腰1～4骨密度值和血清1，25-（OH）D3差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 IBD患者相对健康成人发生骨质疏松或骨折的风险较高，活动期IBD患者应及早开展骨质疏松筛查和风险评估。

1,25-(OH)_2D_3对UUO模型大鼠ILK及TGF-β1表达的影响

目的探讨1,25-(OH)2D3减轻单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的作用及其机制。方法将96只雄性SD大鼠随机分为对照组、UUO组、假手术组、干预组各24只,其中UUO组和干预组均于左肾下极处游离并结扎左输尿管建立UUO模型,假手术组开腹后仅游离左输尿管,对照组不行特殊处理。其后干预组予1,25-(OH)2D30.5μg(溶于1 mL花生油中)灌胃、余三组均予1 mL花生油灌胃;各组分别于术后第1、3、7、14天每天各处死6只大鼠,留取左侧肾脏标本,光镜观察肾脏组织形态学改变及肾脏病理损害,免疫组化法观察整合来连接激酶(ILK)、转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达,RT-PCR法检测ILK mRNA表达。结果①与对照组相比,UUO组肾皮质变薄、肾间质炎细胞浸润明显增多、纤维化随时间延长而加重(P<0.05);与UUO组相比,干预组肾组织炎细胞浸润减少、纤维化程度减轻、病变积分明显降低(P<0.05)。②与对照组相比,UUO组ILK蛋白阳性表达随时间延长显著增加(P<0.01);与UUO组比较,干预组ILK蛋白表达减少(P<0.01);与对照组相比,UUO组TGF-β1蛋白随时间延长阳性表达显著增加(P<0.01);与UUO组比较,干预组TGF-β1蛋白表达减少;ILK蛋白表达与TGF-β1蛋白表达呈显著正相关(r=0.872,P<0.05)。③与对照组比较,UUO组和干预组ILK mRNA表达均随时间延长明显增强(P<0.01),其中干预组表达在7、14 d无显著差异;干预组各期均显著低于UUO组(P<0.01)。结论 1,25-(OH)2D3可减轻UUO大鼠肾间质纤维化、保护肾脏功能,可能机制为间接或直接抑制肾间质ILK、TGF-β1表达;此为防治肾间质纤维化提出了新的方向。

1,25(OH)_2D_3对Thy-1肾炎大鼠Ki67、mTOR表达的影响

目的研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对Thy-1肾炎模型大鼠Ki67和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)表达的影响,并探讨其机制。方法 90只清洁级雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、1,25(OH)2D3组,每组30只。模型组与1,25(OH)2D3组尾静脉注射抗Thy-1单克隆抗体建立肾炎模型,对照组给予等剂量生理盐水。建模后,1,25(OH)2D3组给予1,25(OH)2D30.5μg/d灌胃,连续给药21 d,对照组及模型组给予等体积花生油。分别于给药后第1、3、7、14、21天每组随机处死6只大鼠,处死前1 d收集24 h尿液进行24 h尿蛋白定量;取各组肾组织标本,经HE和PAS染色后进行肾脏病理损害评分,免疫组化法检测肾组织中Ki67、m TOR表达。结果模型组和1,25(OH)2D3组大鼠在建模后第1天尿蛋白水平升高,模型组第3天达高峰,至第14天恢复至正常水平,1,25(OH)2D3组大鼠第1、3、7天的尿蛋白水平均低于模型组(P<0.05)。1,25(OH)2D3组大鼠肾组织病理损害程度第3、7天较模型组减轻(P<0.05),Ki67、m TOR蛋白表达水平较模型组降低(P<0.05)。24 h尿蛋白定量,Ki67表达水平,m TOR表达水平及肾组织病理损害评分彼此间均呈正相关。结论 1,25(OH)2D3可抑制Thy-1肾炎模型大鼠肾小球系膜细胞的增殖,其作用机制可能与减少Ki67、m TOR的表达有关。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过调节Th17/Treg比值和RANKL/OPG轴缓解胶原诱导的关节炎

目的 探讨1,25-二羟基维生素D_(3)[1,25-dihydroxy vitamin D3,1,25(OH)_(2)D_(3)]对胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠关节滑膜炎症和骨破坏的抑制作用及机制。方法 30只DBA/1J小鼠被均分为3组:对照组(CON)、模型组(CIA)和模型干预组(VD)。CIA组和VD组小鼠建立CIA模型,用1,25(OH)_(2)D_(3)对VD组CIA模型进行治疗。用游标卡尺测量小鼠后足爪的肿胀程度。用Micro-CT测量小鼠后足爪的骨密度。酶联免疫吸附剂测定法检测小鼠血清1,25(OH)_(2)D_(3)和炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的水平。流式细胞术检测小鼠脾脏Th17细胞和Treg细胞的比例。采用苏木精-伊红染色观察膝关节的病理特征。Western blot检测小鼠踝关节的蛋白OPG、RANKL、NF-κB和VDR的表达水平。结果 1,25(OH)_(2)D_(3)并没有降低CIA模型的发病率,但却明显缓解了关节炎症。VD组的脚掌厚度、关节炎评分以及膝关节HSS评分均较CIA组明显降低(P均<0.05)。CIA组的骨破坏程度更加明显,BMD及BV/TV明显低于VD组(P均<0.05)。VD组的IL-1β、IL-6、TNF-α水平和Th17/Treg细胞比例明显低于CIA组(P均<0.05)。与CIA组相比,VD组踝关节的VDR和OPG蛋白水平明显增加(P均<0.05),NF-κB和RANKL蛋白水平明显低于CIA组(P均<0.05),RANKL/OPG的比例也明显低于CIA组(P<0.05)。结论 1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过调节Th17/Treg比值和RANKL/OPG轴缓解CIA模型小鼠的关节滑膜炎症并抑制骨破坏。

1,25-(OH)_(2)D_(3)干预糖尿病大鼠模型对P38MAPK与TGF-β1的影响及肾保护作用研究

目的研究1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)_(2)D_(3)]干预糖尿病大鼠模型对P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)与转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法选用雄性大鼠作为实验动物,采用随机数字表法将大鼠分为A、B、C 3组,每组各28只。A组给予常规饲料喂养,B、C组给予高脂高胆固醇饲料喂养6周,糖尿病大鼠模型建模成功后,A组继续常规饲料喂养,B、C组继续给予高脂高胆固醇喂养,同时B组给予1,25-(OH)_(2)D_(3)干预,共7次。处死大鼠,分别在喂养开始时(T1)、建模成功时(T2)及1,25-(OH)_(2)D_(3)干预完成后2周时(T3)取血,检测血肌酐(Scr)、尿肌酐(Ucr)、血尿素氮(BUN)和胱抑素C(Cys-C)肾功能指标水平,计算内生肌酐清除率(Ccr)。处死大鼠后取肾组织,采用免疫组化法和Western blot法检测P38MAPK与TGF-β1表达情况。分析P38MAPK与TGF-β1的关系。结果 3组大鼠T2和T3时Ccr、BUN及Cys-C水平比较有统计学意义(P<0.05),其中T2时B、C 2组Ccr、BUN及Cys-C水平显著高于A组(P<0.05),T3时B组Ccr、BUN及Cys-C显著低于C组(P<0.05)。3组大鼠肾组织P38MAPK与TGF-β1表达差异具有统计学意义(P<0.05)。3组大鼠肾组织P38MAPK与TGF-β1蛋白相对表达量差异有统计学意义(P<0.05),B组大鼠P38MAPK与TGF-β1显著低于C组(P<0.05)。3组大鼠肾组织P38MAPK与TGF-β1蛋白相对表达量呈显著正相关性(r=0.418,P<0.05)。结论 1,25-(OH)_(2)D_(3)干预能显著改善糖尿病大鼠肾功能,这可能与其抑制P38MAPK与TGF-β1表达有关。