慢性肾脏病患者血清STC1、1,25-(OH)2D3与疾病严重程度的关系

目的:检测慢性肾脏病患者血清斯钙素1(STC1)、1,25-羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]水平并探究其与疾病严重程度的关系。方法:选取在本院确诊的126例慢性肾脏病患者作为研究对象(研究组),同期在本院体检健康的受试者56例作为对照组。比较不同严重程度患者血清STC1、1,25-(OH)2D3水平,以Pearson相关性分析1,25-(OH)2D3、STC1在慢性肾脏病患者血清中的相关性。多因素Logistic回归分析影响慢性肾脏病患者肾功能重度损害相关因素。结果:研究组血清STC1、BUN、Scr水平明显高于对照组(P<0.05),1,25-(OH)2D3水平低于对照组(P<0.05);慢性肾脏病1期、2期、3期、4期、5期患者血清STC1水平依次升高(P<0.05),1,25-(OH)2D3水平依次降低(P<0.05);慢性肾脏病3期、4期、5期BUN、Scr水平逐次升高,且均高于1期、2期(P<0.05)。STC1与BUN、Scr水平均呈正相关(r=0.698、0.702,P<0.01),1,25-(OH)2D3与血清BUN、Scr水平均呈负相关(r=0.698、0.702,P<0.01);STC1、BUN、Scr是影响慢性肾脏病患者肾功能重度损害的危险因素,而1,25-(OH)2D3是慢性肾脏病患者肾功能重度损害的保护因素(P<0.05)。结论:慢性肾脏病患者血清STC1表达较高,1,25-(OH)2D3水平呈低表达,与疾病严重程度关系密切,为影响慢性肾脏病疾病严重程度的独立危险因素,且两者呈负相关,可能作为评估慢性肾脏病患者严重程度的有效、潜在指标。

血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平与脑小血管病患者认知功能损害程度的相关性分析

目的研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)_(2)D_(3)]水平与脑小血管病(CSVD)患者认知功能损害(CI)程度的相关性.方法选取2020年7月-2021年8月河北医科大学第一医院神经内科收治的126例CSVD患者,入院后参照简易智能状态检查量表(MMSE)分为CSVD并发CI组(MMSE<27分,n=89)及CSVD无并发CI组(MMSE≥27分,n=37).比较两组同型半胱氨酸(Hcy)、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-硝基酪氨酸(3-NT)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,通过ROC分析Hcy、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-NT、hs-CRP、HDL-C预测CSVD并发CI的价值.根据MMSE量表评分评估患者认知功能,将89例CSVD并发CI患者分为轻度组(21分≤MMSE量表评分<27分,n=46)、中度组(10分≤MMSE量表评分<21分,n=28)、重度组(MMSE量表评分<10分,n=15),比较三组患者Hcy、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-NT、hs-CRP、HDL-C水平差异,通过Spearman相关系数分析血清Hcy、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-NT、hs-CRP、HDL-C与CI严重程度的相关性.结果CSVD并发CI组血清Hcy、3-NT、hs-CRP显著高于CSVD无并发CI组,1,25(OH)_(2)D_(3)、HDL-C水平显著低于CSVD无并发CI组,差异有统计学意义(P<0.05);经ROC分析,Hcy≥14.516μmol·L^(-1)、1,25(OH)_(2)D_(3)≤0.325ng·mL^(-1)、3-NT≥5.741ng·mL^(-1)、hs-CRP≥3.149mg·L^(-1)、HDL-C≤1.160mmol·L^(-1)是预测CSVD并发CI的最佳截断值,曲线下面积分别为0.901、0.894、0.899、0.916、0.904,敏感度为0.932、0.838、0.932、0.943、0.865,特异性为0.865、0.932、0.892、0.865、0.920,且P<0.05;不同CI程度患者血清Hcy、3-NT、hs-CRP比较,轻度组<中度组<重度组;1,25(OH)_(2)D_(3)、HDL-C水平比较,轻度组>中度组>重度组,差异有统计学意义(P<0.05);经相关性分析,CI程度与血清Hcy、3-NT、hs-CRP呈正相关,与1,25(OH)_(2)D_(3)、HDL-C呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05).结论血清Hcy、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-NT、hs-CRP、HDL-C与CSVD并发CI发病机制相关,且CI程度与血清Hcy、3-NT、hs-CRP呈正相关,与1,25(OH)_(2)D_(3)、HDL-C呈负相关.

1,25(OH)_(2)D_(3)及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响

旨在研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊,分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞,用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^(-1)1,25(OH)_(2)D_(3)处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染,同时设置阴性对照组和空白对照组,每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)_(2)D_(3)处理以及VDR基因敲除后,分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达,用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明,1,25(OH)_(2)D_(3)能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD113、gBD116、gBD120、gBD 121以及gBD 123基因的表达(P<0.01),显著提高gBD106、gBD127、gBD 129以及gBD 134基因的表达(P<0.05),而对gBD 110like和gBD 128基因没有显著影响(P>0.05);3个基因敲除载体进行细胞转染后,pCas9-VDR-V1组VDR蛋白表达极显著降低(P<0.01)。VDR基因敲除极显著降低gBD124的mRNA和蛋白表达(P<0.01),显著降低gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.05),同时VDR基因敲除组gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD116、gBD123、gBD127、gBD 128以及gBD 134基因的表达极显著低于其他组(P<0.01),VDR基因敲除组gBD104、gBD106、gBD 120以及gBD 129基因的表达显著低于其他组(P<0.05),而对gBD121、gBD 110like以及gBD 113的相对表达则无显著影响(P>0.05)。综上所述,1,25(OH)_(2)D_(3)可以上调VDR和部分β防御素表达;VDR基因敲除后降低部分β防御素表达,结果表明1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调VD/VDR信号通路关键基因VDR的表达调控山羊附睾头上皮细胞部分β防御素表达。

中青年难治性高血压患者血清1,25-二羟维生素D_(3)、维生素D受体mRNA水平与中心动脉压的相关性

目的探讨1,25二羟维生素D_(3)[1,25(OH)2D_(3)]、维生素D受体(VDR)mRNA在中青年难治性高血压(RH)患者中的水平及与中心动脉压的相关性。方法选取2018年5月至2021年5月石家庄市人民医院收治的RH患者65例为A组,同时选取血压控制达标的高血压患者76例为B组,选择60例血压正常者为C组。采用酶联免疫吸附法检测血清中1,25(OH)2D_(3)水平,采用qRT-PCR检测外周血单个核细胞中VDR mRNA水平,Sphygmocor脉搏波分析系统检测中心动脉压。利用ROC曲线评价血清1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平对中青年RH的预测能力。结果A组与B组患者1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平均低于C组,且A组低于B组,差异均具有统计学意义(F=315.910、217.196,P<0.05);A组和B组患者中心动脉收缩压(CSBP)、中心动脉舒张压(CDBP)、中心动脉脉压(CAPP)均高于C组,且A组高于B组,差异有统计学意义(F=66.192、16.719、116.047,P<0.05);中青年RH患者1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平与CSBP、CDBP、CAPP均呈负相关。ROC曲线分析显示,血清1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平预测RH的曲线下面积分别为0.932、0.883,对应的敏感度分别为81.54%、86.92%,特异度分别为94.74%、71.05%。二者联合的曲线下面积为0.956,敏感度和特异度分别为90.77%、92.11%。结论中青年RH患者中1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平较低,与中心动脉压密切相关,联合检测对诊断中青年RH具有重要意义。

全反式维甲酸和1α,25二羟维生素D_3对肝癌细胞HepG2生长的协同抑制作用

背景与目的:全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)和1α,25二羟维生素D3[1alpha,25-dihydroxyvitaminD3,1,25(OH)2D3]已被证实能诱导肿瘤细胞分化,并用于造血系统肿瘤的治疗,但其对实体瘤的影响研究较少。本研究旨在通过单独和联合使用ATRA和1,25(OH)2D3,观察其对肝癌HepG2细胞生长和细胞周期的影响,并探讨其相关机制。方法:HepG2细胞经过不同浓度的ATRA和1,25(OH)2D3单独或联合用药处理后,用MTT法检测细胞抑制率、显微镜观察细胞形态的改变、流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化,同时分别用逆转录多聚酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)及流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测细胞周期负调节基因p21WAF1/CIP1和p27KIP1的mRNA及蛋白的表达情况。结果:单独使用ATRA或1,25(OH)2D3和联合用药的HepG2细胞生长均受到抑制,并呈浓度和时间依赖关系,其中联合用药组抑制率明显高于单独用药组(P<0.05)。经10nmol/L1,25(OH)2D3及联合用药诱导72h的HepG2细胞G1期细胞占(54.27±3.69)%和(65.64±5.65)%,与对照组[(40.40±1.91)%]相比明显增高(P<0.05),而1μmol/LATRA组的细胞周期与对照组相比无明显差异(P>0.05);同时各实验组均有细胞凋亡产生(P<0.05),并以联合用药组最为显著。RT-PCR显示10nmol/L1,25(OH)2D3和联合用药处理HepG2细胞24h,p21WAF1/CIP1mRNA表达与对照组相比分别增高35%和56%;FCM显示两组细胞的P21WAF1/CIP1和P27KIP1的蛋白表达与对照组相比明显增高(P<0.05),联合用药组更为显著,但经1μmol/LATRA诱导的细胞P21WAF1/CIP1和P27KIP1的蛋白表达未见明显改变。结论:ATRA和1,25(OH)2D3均能够抑制HepG2细胞生长,诱导细胞凋亡,1,25(OH)2D3对细胞周期的影响作用是使细胞阻滞在G1期,其作用机制可能与其上调P21WAF1/CIP1和P27KIP1蛋白的表达有关,当与ATRA联合用药时,能够对HepG2细胞生长产生协同抑制作用。

1,25(OH)_2D_3合成及代谢酶与大鼠施万细胞关系研究

1,25（OH）2D3作为维生素D3的活性代谢产物,是钙磷代谢及机体免疫调节的重要激素,对中枢神经系统具有保护作用[1-3],给予1,25（OH）2D3可降低多发性硬化的发生[4]。推测其可能对周围神经系统也有保护作用,但目前国内外尚未见相关研究报道。施万细胞作为周围神经胶质细胞,对周围神经具有支持、营养及修复作用。CYP27A1、CYP27B1、CYP24作为1,25（OH）2D3活化和代谢的酶类,与其作用紧密相关,可作为1,25（OH）2D3是否与施万细胞作用的标志。该研究通过探讨施万细胞上CYP27A1、CYP27B1和CYP24基因的表达情况,旨在初步探讨1,25（OH）2D3与施万细胞之间的关系。

早期糖尿病肾病患者1,25-(OH)_2D_3及炎性因子的变化及骨化三醇胶丸的干预作用

目的观察维生素D代谢物1,25-二羟维生素D_3[1,25-(OH)_2D_3]对早期糖尿病肾病(DN)患者炎性因子TGF-β、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平的影响。方法2型糖尿病患者150例,其中单纯糖尿病患者60例为DM组,早期DN 90例为DN组。DN组再随机分为治疗亚组和对照亚组各45例。对照亚组常规治疗,治疗亚组常规治疗+骨化三醇胶丸,疗程均3个月,比较各组1,25-(OH)_2D_3、24 h尿蛋白定量及相关炎性因子的变化。结果治疗前,DN组1,25-(OH)_2D_3水平低于DM组(P<0.05);TGF-β、TNF-α、IL-6、hs-CRP,24 h尿蛋白定量、SCr水平均高于DM组(P<0.05);治疗亚组治疗后TGF-β、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平及24 h尿蛋白定量均较治疗前降低(P<0.05),1,25-(OH)_2D_3水平较前升高(P<0.05)。对照亚组与治疗亚组不良反应发生率比较差异无统计学意义(11.1】%vs.11.11%,P>0.05)。结论早期DN患者1,25-(OH)_2D_3缺乏,炎性因子水平增高,补充骨化三醇胶丸可以改善炎性反应状态。

1,25(OH)_2D_3干预实验性自身免疫性甲状腺炎TH1/TH2细胞失衡的研究

目的观察1,25(OH)2D3对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠炎症及Th1/Th2细胞的干预效果。方法 48只雌性Wistar大鼠随机分为预防组(n=10),治疗组(n=10),阳性对照组(n=12)和阴性对照组(n=16)。除阴性对照组外,其余大鼠均给予pTG免疫致敏。预防和治疗组每只大鼠使用维生素D35μg/kg.,隔日腹腔注射,分别从建模0～6周和2～8周作干预,阴性对照组和阳性对照组应用花生油作对照。各组大鼠在处死后取甲状腺组织做病理学检查,检测血清自身抗体,及细胞因子的改变。结果阴性对照大鼠的甲状腺结构完整;阳性对照组大鼠甲状腺滤泡结构破坏严重,部分滤泡萎缩或消失,1,25(OH)2D3干预组大鼠甲状腺结构保持较完整,萎缩滤泡减少,淋巴细胞浸润不明显。与阴性对照组相比,预防组其自身抗体及细胞因子水平均无显著性差异;治疗组大鼠血清抗体水平与同时期的阳性对照相比水平明显降低(P<0.05),但较阴性对照明显升高(P<0.05);与阳性对照组相比,治疗组大鼠IFN-γ及IL-12水平显著下降(P<0.05),IL-4和IL-10水平升高(P<0.01)。结论在EAT大鼠建模开始就使用1,25(OH)2D3可使大鼠甲状腺组织保持较完整形态,维持血清抗体及细胞因子正常范围。对EAT大鼠,1,25(OH)2D3有可能减缓病理损害,调整细胞因子的失衡。

1,25（OH）2D3干预糖尿病肾病模型大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1的变化

背景:1,25(OH)2D3在糖尿病肾病的发展过程中发挥着重要调节作用。目的:探索1,25(OH)2D3对糖尿病肾病大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1表达的影响作用。方法:实验方案经新疆医科大学动物实验中心动物实验伦理委员会批准。将25只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组、糖尿病肾病+花生油组,后2组分别给予骨化三醇(即1,25(OH)2D3,活性维生素D3)0.03μg/(kg?d)治疗、花生油对照处理。37 d后采集标本,以实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot及免疫组织化学方法检测大鼠肾脏组织转化生长因子β1的表达;RT-PCR检测MicroRNA-130b的表达;采用苏木精-伊红及Masson染色对大鼠肾脏形态结构及纤维化程度进行分析。结果与结论:①RT-PCR结果显示,糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组及糖尿病肾病+花生油组MicroRNA-130b的表达明显低于正常对照组(P<0.01),糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组明显高于糖尿病肾病+花生油组(P<0.01);②RT-PCR、Western blot、免疫组织化学及病理结果显示,糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组及糖尿病肾病+花生油组转化生长因子β1 mRNA和蛋白的表达、大鼠肾脏组织结构紊乱及纤维化程度明显高于正常对照组(P<0.01),糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组明显低于糖尿病肾病+花生油组(P<0.01);③结果说明,糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-130b表达水平下降,转化生长因子β1 mRNA及蛋白表达水平升高,肾脏组织结构紊乱及纤维化程度严重;1,25(OH)2D3可上调糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-130b的表达水平,同时还可下调糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子β1的表达水平,改善肾脏组织结构紊乱及纤维化程度。

1,25-二羟维生素D_3对严重烫伤小鼠应激反应的影响

目的探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2VitD3]对严重烫伤小鼠应激状态下胰岛素抵抗和炎症反应的影响。方法 130只小鼠按随机数字表法分为健康组10只,实验组Ⅰ、实验组Ⅱ、对照组各40只。实验组Ⅰ、实验组Ⅱ和对照组制成30%全身体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤模型。每隔1日晨8时,实验组Ⅰ小鼠1,25-(OH)2VitD31μg·kg-1+0.6 mL花生油灌胃;实验组Ⅱ1,25-(OH)2VitD34μg·kg-1+0.6 mL花生油灌胃;对照组0.6 mL花生油灌胃。分别于伤后1、3、7、14 d测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FIns)、血清肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度和创面组织核因子(NF)-κB阳性率。结果 (1)实验组Ⅰ、实验组Ⅱ和对照组各时点胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血清TNF-α水平和创面组织NF-κB表达阳性率均数均高于健康组水平。(2)实验组Ⅰ和实验组Ⅱ伤后同一时点HOMA-IR均低于对照组,且实验组Ⅱ低于实验组Ⅰ(P<0.05);同一组内不同时点伤后第3天HOMA-IR均数最高,以后逐渐降低(P<0.05)。(3)实验组Ⅰ和实验组Ⅱ伤后同一时点血清TNF-α水平、创面组织NF-κB表达阳性率均低于对照组,且实验组Ⅱ低于实验组Ⅰ(P<0.05);同一组内不同时点血清TNF-α水平、创面组织NF-κB表达阳性率均逐渐降低(P<0.05)。结论 1,25-(OH)2VitD3能够减轻严重烫伤小鼠应激状态下胰岛素抵抗作用和炎症反应。

1,25-二羟维生素D3通过调节NF-κB和TGF-β1/Smad通路减轻小鼠非酒精型脂肪性肝炎和肝纤维化

目的:观察脂肪性肝炎肝纤维化小鼠肝组织NF-κB和TGF-β1/Smad通路的变化以及1,25-二羟维生素D3对其干预作用。方法:将32只C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)组、VitD3处理组和hemin处理组。通过饲喂蛋氨酸-胆碱缺乏的食物8周诱导脂肪性肝炎和肝纤维化。用ELISA法检测TGF-β1的变化,用real-time PCR和Western blot方法检测NF-κB和Smad通路中关键分子表达的变化。结果:1,25-二羟维生素D3和hemin的处理减轻了肝脏的损伤,并且抑制了炎症和纤维化相关基因IKK-β、NF-κB、TGF-β1和Smad3的表达,上调了纤维化抑制基因Smad7的表达。结论:NF-κB和TGF-β1/Smad通路参与了非酒精型脂肪性肝炎和肝纤维化的发展,1,25-二羟维生素D3能够通过调节NF-κB和TGF-β1/Smad信号通路减轻肝损伤。

1,25(OH)_2D_3抑制肝星状细胞激活和调控Th细胞分化治疗肝纤维化

目的明确1,25-二羟基维生素D_3[1,25-dihydroxyvitamin D_3,1,25(OH)_2D_3]对肝纤维化的治疗作用及其作用机制。方法病理学检查和肝功能血生化检查评估肝纤维化程度;免疫组化检测α-SMA、TGF-β和collagen I表达观察肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)激活水平;流式细胞实验、ELISA、RT-PCR等衡量1,25(OH)_2D_3对CD4+T细胞亚群分化的影响。结果与肝纤维化模型组相比,1,25(OH)_2D_3治疗组肝细胞状态明显恢复。肝纤维化小鼠肝脏中collagen I、TGF-β和α-SMA表达明显增多(P<0.05),1,25(OH)_2D_3治疗后表达明显下降(P<0.05)。1,25(OH)_2D_3治疗后Th1细胞和Th17细胞比例降低(P<0.05)、Th2细胞比例增加(P<0.05)。1,25(OH)_2D_3治疗组小鼠的IFNγ、IL-17A和IL-22因子浓度水平较肝纤维化小鼠明显降低,IL-4浓度升高(P<0.01);RORγt和T-bet表达量降低,GATA3表达升高(P<0.01)。结论 1,25(OH)_2D_3通过降低肝星状细胞激活水平以及调控肝纤维化中Th细胞的分化减轻肝纤维化。

1,25(OH)_2D_3对甲状旁腺素诱导的肾小管上皮细胞转分化和TGF-β_1的表达的影响

目的:探讨1,25(OH)2D3对甲状旁腺素(PTH)诱导的肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养在含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液中。对照组:加入等体积含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH刺激组:加入终浓度为10-10 mol/L PTH的含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH+1,25(OH)2D3干预组:加入10-10 mol/L PTH,同时加入不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)的1,25(OH)2D3。刺激HK-2细胞48 h。半定量RT-PCR法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1的基因表达;Western blot法检测细胞中α-SMA和TGF-β1的蛋白表达;免疫细胞化学法检测细胞中α-SMA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1的含量。结果:半定量RT-PCR结果显示,对照组HK-2细胞中几乎无α-SMA的mRNA表达,仅有少量的TGF-β1 mRNA表达;PTH刺激组α-SMA和TGF-β1mRNA表达量与对照组比较明显增加;PTH+1,25(OH)2D3干预组表达量比PTH刺激组显著降低,且随着1,25(OH)2D3浓度的升高呈一定的剂量依赖性(P<0.05)。Western blot结果显示,对照组HK-2细胞中无α-SMA的蛋白表达,仅有少量的TGF-β1蛋白表达;10-10 mol/L的PTH能够明显诱导HK-2细胞中α-SMA的蛋白表达,增加TGF-β1的蛋白表达量;PTH+1,25(OH)2D3干预组,α-SMA和TGF-β1的蛋白表达量比PTH刺激组显著降低(P<0.05)。免疫细胞化学法结果显示,对照组几乎无α-SMA阳性表达的细胞,PTH刺激组可见大量细胞α-SMA表达阳性;PTH+1,25(OH)2D3干预组α-SMA表达阳性的细胞数明显低于PTH刺激组(P<0.05)。ELISA结果显示,对照组细胞上清液中可检测到少量的TGF-β1,PTH刺激组含量显著升高,PTH+1,25(OH)2D3干预组与PTH刺激组比较含量明显降低(P<0.05)。结论:1,25(OH)2D3能够部分拮抗PTH诱导的HK-2细胞转分化和TGF-β1的表达。

1,25(OH)_2D_3对成骨细胞增殖及其与乳腺癌细胞黏附的影响

目的：观察1，25二羟基维生素D3[1，25（OH）2D3]对成骨细胞增殖及其与乳腺癌细胞黏附的影响。方法取对数生长期人成骨细胞hFOB1．19，随机分为三组，正常对照组用DMEM/F12培养基培养；溶剂对照组用含0．1mL/L乙醇的DMEM/F12培养基培养；1，25（OH）2D3组分别用含1×10^-7、1×10^-8、1×10^-9、1×10^-10mol/L1，25（OH）2D3的DMEM/F12培养基培养。1-3d后于酶标仪上450nm处测定吸光度值，计算细胞增殖抑制率；采用微量酶标仪法检测hFOB1．19细胞培养上清中碱性磷酸酶（ALP）活力。取对数生长期人乳腺癌细胞MDA-MB-231、T47D，分组及处理同上，各组培养24h后加入对数生长期hFOB1．19细胞，采用细胞黏附法计算MDA-MB-231或T47D与hFOB1．19细胞黏附率。结果正常对照组、溶剂对照组及1×10^-7、1×10^-8、1×10^-9、1×10^-10mol/L1，25（OH）2D3组细胞增殖抑制率第3天分别为0、-1．63％±2．04％、16．02％±1．13％、10．78％±0．98％、8．82％±2．59％、5．55％±0．57％，各组间比较，P均＜0．05；ALP活力分别为（1．77±0．03）、（1．76±0．01）、（2．11±0．02）、（1．96±0．01）、（1．84±0．04）、（1．81±0．03）金氏单位/100mL，1×10-7、1×10-8moL/L1，25（OH）2D3组与其他四组比较，P均＜0．05；MDA-MB-231与hFOB1．19细胞黏附率分别为58．80％±3．11％、59．80％±3．96％、42．00％±1．87％、46．40％±2．30％、53．80％±0．84％、57．00％±3．24％，T47D与hFOB1．19细胞黏附率分别为55．75％±2．22％、56．25％±1．71％、47．80％±3．11％、50．60％±2．07％、54．40％±2．70％、57．20％±1．48％，1×10^-7、1×10^-8moL/L1，25（OH）2D3组与其他四组比较，P均＜0．05。结论1，25（OH）2D3能抑制成骨细胞增殖，促进成骨细胞分化，降低乳腺癌细胞与成骨细胞的黏附。

1,25(OH)_2D_3体外抑制小鼠Th17细胞分化的作用研究

目的探讨1,25(OH)_2D_3对Th17细胞分化的体外抑制作用。方法通过对分离出的脾淋巴细胞进行CD4+T细胞分选,将不同浓度的1,25(OH)_2D_3加入到CD4+T细胞中并在诱导因子的作用下诱导其分化。通过ELISA检测培养上清中IL-17A和IL-22的浓度;流式细胞仪分析Th17细胞的比例及RT-PCR检测Th17细胞分化的转录因子的表达。结果培养上清ELISA检测显示:与对照组相比,1,25(OH)_2D_3组的IL-17A和IL-22浓度随着加入1,25(OH)_2D_3浓度的增大而呈现逐渐降低的现象,差异且具有统计学意义(P<0.01);流式结果显示:诱导分化后对照组Th17细胞比例最多,1,25(OH)_2D_3组处理后Th17细胞比例降低,且呈剂量依赖性;RTPCR检测显示:与对照组相比,1,25(OH)_2D_3组IL-17A、IL-22,RORγt和RORα表达量随着剂量的增加而逐渐降低,并具有统计学意义(P<0.01)。结论体外实验表明,1,25(OH)_2D_3具有抑制Th17细胞分化的作用,表现为Th17细胞比例、分泌的细胞因子及特异的转录因子表达均减少。

脑微出血患者血浆1,25-（OH）2D3,sLRP1水平与头颅SWI影像学特征的相关性

目的研究脑微出血(cerebral microbleeds,CMBs)患者1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25-(OH)2D3],可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1(soluble low density lipoprotein receptor related protein 1,sLRP1)水平与头颅SWI微出血病灶数量及部位等影像学特征的相关关系。方法连续纳入2017年1月~2019年5月就诊于陕西省人民医院的CMBs患者196例(男性152例,女性44例),正常对照组99例(男性67例,女性32例),采集人口学资料及病史。对两组人群进行血浆1,25-(OH)2D3,sLRP1水平的检查。比较两组间血浆1,25-(OH)2D3和sLRP1水平的差异,并统计CMBs组各检验指标与CMBs病灶数量及部位的相关关系。结果CMBs组患者血浆1,25-(OH)2D3,sLRP1水平均低于对照组(23.32±18.91 mmol/L vs 39.60±18.58 mmol/L;237.96±70.62 ng/ml vs 312.61±62.78 ng/ml),差异均具有统计学意义(t=7.07,-9.24,均P<0.01)。CMBs患者血浆sLRP1水平与脑皮质CMBs病灶数量呈负相关(r=0.239,P=0.001),而与脑深部CMBs病灶数量无明显相关(t=-0.096,P>0.05)。结论CMBs患者的血浆1,25-(OH)2D3,sLRP1水平均低于正常人群。高表达的血浆sLRP1可能对脑皮质CMBs的发生具有一定的保护作用。

p21^(wafl)在1,25(OH)_2D_3调节人骨肉瘤细胞系HOS-8603增殖分化中的作用

目的 :探讨p2 1wafl在 1,2 5 (OH) 2 D3调节人骨肉瘤细胞系HOS - 860 3增殖中的作用。方法 :用定量RT-PCR法检测 1,2 5 (OH) 2 D3对p2 1waflmRNA表达的诱导作用 ,并构建稳定表达p2 1wafl真核表达载体的细胞系HOS -p2 1wafl进一步观察该细胞的生长及分化情况。结果 :1,2 5 (OH) 2 D3作用 2h即可诱导HOS - 860 3细胞内源性p2 1wafl的表达 ,4h达高峰 ,2 4h仍未回降。细胞过度表达p2 1wafl后生长速度明显减慢 ,培养 6d时细胞数为未转染细胞的5 0 % ;并且组织化学染色结果表明细胞的分化标志性抗原碱性磷酸酶 (AKP)的表达明显增强。结论 :表明 1,2 5(OH) 2 D3对p2

1,25二羟维生素D3治疗糖尿病肾病的临床研究

目的探讨1,25二羟维生素D3治疗糖尿病肾病的临床疗效。方法对124例符合诊断标准的糖尿病肾病患者进行随机分组,对照组在常规降糖、降压治疗时服用厄贝沙坦片75 mg/d,1次/d,早饭前口服;实验组在对照组基础上给予骨化三醇软胶囊1.0μg/次,1次/d,睡前口服。两组总疗程为12周。比较治疗4、8、12周两组患者生化指标及C反应蛋白(CRP)、转化生长因子β1(TGF-β1)、同型半胱氨酸(Hcy)变化,并对两组疗效进行比较。结果经治疗4周后,两组患者的24 h尿蛋白、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)的差异均具有统计学意义,实验组各指标降低更明显(P<0.05),而经治疗12周后,两组患者的Scr和BUN水平相比无统计学差异(P>0.05)。经治疗4周后,实验组患者的CRP、TGF-β1、Hcy水平显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组疗效比较,实验组的有效率(93.55%)显著高于对照组的有效率(80.65%)(P<0.05)。结论1,25二羟维生素D3能够显著降低机体TGF-β1表达水平,降低对机体的炎症损伤,提高糖尿病肾病临床治疗效果。

1,25-二羟基维生素D_3对乳腺癌MCF-7细胞CYP1B1表达的作用和COX-2/PGE2通路机制

目的分析COX-2、p-ERα、CYP1B1在人乳腺癌组织和ERα阳性表达人乳腺癌细胞系MCF-7中的表达规律,探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在人乳腺癌细胞MCF-7中通过COX-2/PGE2通路对CYP1B1表达和细胞增殖、细胞周期转化的影响及作用机制。方法用免疫组织化学法检测42例人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1的表达,并分析其相关性;MTT法检测1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖的影响,并确定后续实验药物浓度;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测MCF-7细胞COX-2 mRNA水平;ELISA法检测细胞培养上清液中PGE2水平;蛋白质印迹法检测MCF-7细胞COX-2、p-ERK、p-ERα、CYP1B1蛋白水平;免疫细胞荧光检测COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白在MCF-7中的原位表达。结果在人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白呈阳性表达,两两之间均呈正相关性(P<0.05)。1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖具有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。应用100 nmol/L 1,25(OH)2D372 h后,MCF-7细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);细胞COX-2 mRNA表达减少(P<0.05);细胞培养上清中PGE2水平降低(P<0.01);COX-2、p-ERK、p-ERα及CYP1B1蛋白表达均减少(P<0.05)。结论在乳腺癌中,COX-2/PGE2通路对CYP1B1的表达具有正向调控作用。1,25(OH)2D3可通过抑制COX-2/PGE2通路减少CYP1B1的表达,对乳腺癌细胞MCF-7的增殖产生抑制作用。

1,25-(OH)_2D_3对糖尿病大鼠ZO-1表达的影响

目的观察糖尿病(DM)大鼠肾小球ZO-1蛋白的表达,1,25-(OH)2D3对ZO-1蛋白表达及分布的影响。方法Wistar大鼠随机分为3组:对照组、糖尿病组(DM组)、1,25-(OH)2D3组。链脲菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病动物模型,1,25-(OH)2D3组在糖尿病建立时即开始渗透性微量泵按3ng/100g·d皮下给予1,25-(OH)2D3,给药10周处死小鼠,检测血糖、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CysC)、尿红细胞、24h尿蛋白定量(24hUPE);光镜观察肾小球细胞数,细胞外基质(ECM)聚积;Western印迹检测ZO-1蛋白的表达;免疫金荧光染色电镜观察肾小球ZO-1分布的改变。结论DM组大鼠CysC、尿红细胞、24hUPE均高于1,25-(OH)2D3组,差异均有统计学意义(P<0.05)。1,25-(OH)2D3组大鼠较DM组肾小球细胞数减少,细胞外基质聚积减轻(P<0.05或P<0.01)。Western印迹示1,25-(OH)2D3组和对照组肾小球ZO-1表达无显著差异,均明显高于DM组(P<0.01)。免疫金荧光染色显示DM组肾小球ZO-1表达缺失及易位分布明显,1,25-(OH)2D3组ZO-1的表达缺失及易位分布较轻。结论1,25-(OH)2D3可减少尿蛋白的排泄,抑制肾小球细胞数及细胞外基质的增殖,增加足细胞特异蛋白ZO-1的表达,减少其易位,对肾脏有保护作用。