CPM抑制了由1,4NQ诱导的对骨肌肌质网SR钙通道RyR1的激活效应

利用7 -diethylamino -3 -(4' -maleimidylphenyl) -4 -methylcoumarin(CPM)甲基化钙通道RyR1上的特异敏感性硫醇的方法 ,对由1 ,4 -naphthoquinone(1,4NQ)诱导的双相性作用进行了研究 ,发现CPM能明显阻碍由1 ,4NQ诱导的对RyR1的激活 ,但对由1 ,4NQ产生的抑制没有明显作用。用经CPM预处理过和没有处理过的样品与1 ,4NQ温育后离心清洗 ,发现未经CPM处理的样品经激活和抑制浓度的1 ,4NQ温育后 ,离心清洗不能消除1 ,4NQ对RyR1的激活和抑制。而经CPM处理后的样品 ,在1 ,4NQ的激活浓度和抑制浓度下 ,离心清洗后未能观测到1 ,4NQ诱导的激活态 ,但抑制态仍然明显存在。以上结果说明 ,CPM所识别的特异活性硫醇参与了1 ,4NQ激活作用 :CPM与此硫醇发生甲基化作用 ,因此阻断了1 ,4NQ对RyR1上的激活部位硫醇发生作用 。

1.4-Naphthoquinone与兔骨肌肌质网钙通道相互作用表现出的双相特性

利用Ｃａ２＋浓度动态光谱法和［３Ｈ］－ＲｙａｎｏｄｉｎｅＢｉｎｄｉｎｇ法，对具有特异氧化硫醇基团的抗肿瘤剂１，４－Ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ（１，４ＮＱ）与兔骨肌肌质网（ＳＲ）钙通道（ＲｙＲ）的作用机制进行了研究．探讨了氧化态１，４ＮＱ激发载钙ＳＲ囊泡的Ｃａ２＋释放机制，并首次揭示出１，４ＮＱ对ｒｙａｎｏｄｉｎｅｂｉｎｄｉｎｇ的影响具有强烈依赖于浓度和时间的双相特性。实验结果表明，ＲｙＲ蛋白上至少存在两个硫醇调控部位，它们的氧化还原态决定着ＲｙＲ的门控功能。这个结果对ＲｙＲ氧化还原模型是一个新发展。

1,4萘醌和谷胱甘肽对Ryanodine受体初始结合率的影响及其意义

采用ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 动态结合方法，考察了１，４ 萘醌（１，４ＮＱ） 和谷胱甘肽（ＧＳＳＧ） 作用于兔骨骼肌肌质网（ＳＲ）ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 敏感钙通道（ＲｙＲ） 所产生的对ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 初结合率（Ｒ０） 的影响。类似于１，４ＮＱ 对ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 平衡结合的实验结果［７ ］ ，１ ，４ＮＱ 对Ｒ０ 也诱导出浓度依赖性的多相性变化规律，还原态１ ， ４ＮＱ 的Ｒ０ 曲线则没有这种多相性。而ＧＳＳＧ 在３７°Ｃ 时所有浓度或时间区间都没有对ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 结合对或Ｒ０ 诱导出明显的多相性行为；还原态的谷胱甘肽（ＧＳＨ） 亦只能产生出单相的抑制作用。这些氧化还原试剂也对ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 结合率系数ｋ ＋ １ ，但不是ｋ － １ ，产生了相应的影响。

萘醌老化黑碳对Treg分化的影响及机制研究

目的探讨萘醌老化黑碳(1,4NQ-BC)对Treg细胞分化的影响及其机制方法从6~8周龄C57BL/6小鼠的浅表淋巴结中用磁珠分选法提取幼稚CD4^+T细胞,分为对照组(Th0)、TGF-β诱导组(TGF-β)和在TGF-β基础上加入1,4NQ-BC的处理组(5 ng/ml的TGF-β+50μg/ml的1,4NQ-BC),于体外诱导分化,3 d后收集细胞,用Foxp3-PE染色后进行流式检测;取适量各组细胞提取蛋白,进行Western blot实验,检测Smad2蛋白量结果 TGF-β诱导组相对于对照组Treg细胞比例从0.75%增加到43.4%(P<0.05),加入1,4NQ-BC的处理组相较于TGF-β诱导组,Treg细胞比例从43.4%下降至10.33%(P<0.05);Western blot实验显示相对于TGF-β诱导组, 1,4NQ-BC处理组TGF-β通路上的Smad2蛋白量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 1,4NQ-BC在体外抑制幼稚CD4^+T细胞向Treg分化,其作用机制可能是通过抑制TGF-β通路上的Smad2蛋白达到抑制分化的作用。