一例1q41q44重复及3p26.2p26.1缺失患儿的表型与遗传学分析

目的:探讨1例发育落后患儿染色体拷贝数变异的性质及来源,分析基因型与疾病表型的相关性。方法:应用常规G显带分析患儿及其父母的外周血染色体核型,并对患儿进行二代测序(next generation sequencing, NGS)检测。结果:染色体G显带核型分析显示患儿存在染色体结构异常,核型描述为46,XX,−3, der (3),t (1;3) (q41;p26.1),其父亲染色体核型为46,XY,t (1;3) (q32;p25),其母亲核型未见异常。NGS检测显示患儿染色体1q41q44区存在约29.093 Mb的重复,3p26.2p26.1区存在约1.717 Mb的缺失。结论:患儿染色体异常是来自其父亲的平衡易位。1q41q44重复及3p26.2p26.1缺失是导致患儿表型异常的遗传学病因。

MCM-41负载磷钨酸催化剂的制备及其对乙酰化反应的催化性能

采用水热合成法制备了介孔分子筛 MCM-41,并利用浸渍方法将磷钨酸负载在 MCM-41分子筛上,经煅烧得到 PW/MCM-41催化剂;利用 X 射线衍射、傅里叶变换红外光谱、N_2吸附-脱附和 NH_3程序升温脱附等手段对催化剂进行了表征;考察了 PW/MCM-41催化剂对苯甲醚及1,4-二甲氧基苯的乙酰化反应的催化性能。表征结果显示,磷钨酸负载到 MCM-41分子筛上后,保持了 Keggin 结构,MCM-41分子筛保持了介孔结构。实验结果表明,PW/MCM-41催化剂的活性随磷钨酸负载量的增大而降低;磷钨酸质量分数为30%的 PW/MCM-41催化剂上反应底物的转化率最高,使用该催化剂0.8 g,以10 mL 二氯甲烷为溶剂,在苯甲醚用量0.01 mol、乙酸酐用量0.02 mol、反应温度140℃、反应时间4 h 的条件下,苯甲醚转化率可达77.0%,对甲氧基苯乙酮的选择性为96.5%。

解淀粉芽孢杆菌41B-1对花生白绢病的生防效果

本文旨在研究解淀粉芽孢杆菌41B-1对花生白绢病的生物防治效果。采用对峙培养法,测定41B-1对白绢病菌的抑制效果;在温室盆栽条件下,用41B-1发酵菌液对花生进行灌根,然后挑战接种白绢病菌,检测对白绢病的防效。结果表明,41B-1能抑制白绢病菌的菌丝生长速率,破坏菌丝结构,减少菌核数量;41B-1能在培养基质和植株根系内部长期生存,并诱导植株产生防御反应,灌根处理植株对白绢病表现出明显的抗性,防效高达93.9%。因此,41B-1菌株可以作为防治花生白绢病的生防菌剂。

问号钩端螺旋体lipL32/1-lipL41/1融合基因原核表达系统的构建及其应用

目的 :构建问号钩端螺旋体 (简称钩体 ) lip L 32 / 1- lip L 4 1/ 1融合基因及其原核表达系统 ,了解钩体野生株 lip L32和 lip L4 1基因携带和表达情况及钩体患者的血清抗体水平。方法 :采用连接引物 PCR构建 lip L32 / 1- li-p L4 1/ 1融合基因 ,常规方法构建其原核表达系统。采用 SDS- PAGE检测目的重组蛋白 r L ip L32 / 1- r L ip L4 1/ 1表达情况。采用 Western blot鉴定 r Lip L32 / 1- r Lip L4 1/ 1的免疫原性。采用 PCR和 MAT分别检测 97株问号钩体野生株 lip L32和 lip L4 1基因及其表达情况。采用 EL ISA检测 2 2 8例钩体患者血清 lip L32和 lip L4 1基因产物的抗体。结果 :与报道的相关序列比较 ,lip L 32 / 1- lip L 4 1/ 1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为 99.9%和99.8%。目的重组蛋白 r Lip L32 / 1- r Lip L4 1/ 1表达产量约为细菌总蛋白的 10 % ,主要以包涵体形式存在。r L ip L32 /1和 r Lip L4 1/ 1兔抗血清均能与 r L ip L32 / 1- r L ip L4 1/ 1结合。 97.9%和 87.6 %问号钩体野生株分别有 lip L32和 li-p L4 1基因。95 .9%和 84 .5 %问号钩体野生株分别与 r Lip L32 s和 r Lip L4 1s兔抗血清出现效价 ,为 1∶ 4～ 1∶ 12 8的MAT阳性结果。分别有 94 .7%～ 97.4 %和 78.

解淀粉芽孢杆菌41B-1R对棉花黄萎病的防效研究

棉花黄萎病严重危害棉花生产,尚无有效的控制方法。为提高棉花对黄萎病的抗性,本研究将从棉花根系中分离的对棉花黄萎病菌有较好抗性的内生细菌解淀粉芽孢杆菌41B-1R菌株添加到育苗基质中,培育苏棉22和中棉所41 2个棉花品种的幼苗,并评价生物育苗基质对棉花生长及抗黄萎病的效应。结果表明,育苗基质适合作为41B-1R的保存载体;添加生防菌41B-1R的育苗基质对棉花幼苗生长无不良影响;41B-1R能稳定地定殖于棉花幼苗根系内部。育苗后移栽,可有效减少非落叶型棉花黄萎病菌V1070在苏棉22和中棉所41幼苗根部的定殖,显著提高棉苗对黄萎病的抗性,防治效果分别达到46.7%和28.6%。本研究表明,用添加41B-1R菌株的育苗基质育苗可以有效降低棉花黄萎病的危害,为棉花黄萎病的防治提供了新途径。

苯-长链烯烃烷基化固体酸催化剂的研究Ⅱ.SiW_(12)/HAlMCM-41催化剂的组成、酸性及催化性能

制备了不同负载量的SiW1 2 /HAlMCM -4 1催化剂。通过NH3-TPD、N2 吸附技术和苯 -C=1 2 烷基化反应考察了在不同预处理温度下SiW1 2 /HAlMCM -4 1催化剂的组成、酸性及孔结构对催化性能的影响。结果表明 ,经 470～480K(N2 )预处理后的 5 0 0 % (质量分数 )SiW1 2 /HAlMCM -4 1催化剂具有总酸量和中强酸中心比率较大、中孔分布窄的特性和较高的催化活性。在相对较低的反应温度下 ,烷基化反应的C=1 2 转化率、线性烷基苯 (LAB)选择性和线性度均在 98 5 %以上 ,2位线性烷基苯 ( 2 -LAB)异构体比率达 3 4 5 %。

HIV-1 gp41基因的分段克隆和表达

目的在大肠杆菌中表达HIV-1gp41N肽和C肽基因。方法用PCR方法从含HIV-1gp160基因的质粒中扩增HIV-1gp41N肽和C肽基因,重组入pGEX-4T-1载体,并亚克隆入pGEM7zf+中测定核苷酸序列,限制性酶切鉴定后进行原核表达。结果成功地扩增到HIV-1gp41N肽和C肽基因,酶切鉴定及测序结果与已知HIV-1亚型的gp41N肽区和C肽区基因序列一致,SDS-PAGE结果显示,表达出与预期分子量大小相同的蛋白。结论N肽和C肽基因的成功表达,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。

基于gp41的HIV亚单位疫苗研究进展

艾滋病疫苗是当今时代最具挑战性的科学难题之一,现有的以诱导体液免疫为目的的H IV-1抗原均难以诱导产生有效的、持续的广谱中和抗体。近年来,一些具有广谱中和活性的H IV单克隆抗体(mAb)的发现及其相应抗原表位的阐明,给以诱导H IV体液免疫的疫苗研究带来了新的希望。相比于gp120,H IV gp41的序列更为保守,糖基化位点更少,更适合作为疫苗的抗原。本文综述了靶向gp41的广谱中和抗体及其抗原表位,并阐述了对目前国际上基于gp41的H IV亚单位疫苗设计思路及进展。

模拟HIV-1 gp41 CHR表位短肽的筛选及研究

目的 利用针对HIV 1跨膜蛋白gp4 1CHR序列合成肽C34的单克隆抗体 1G1筛选噬菌体 12肽库 ,旨在找寻模拟C34肽表位的序列 ,同时探索该短肽成为HIV 1gp4 1NHR与CHR结合抑制物的可能性。方法 以 1G1为钓饵蛋白对噬菌体 12肽库进行亲和筛选 ,以双夹心ELISA鉴定阳性克隆。结果 经 3轮筛选后 ,随机挑选 17个噬菌体克隆 ,其中 6个克隆与1G1显示出较强的结合活性。上述 6个阳性克隆经DNA测序 ,氨基酸序列相同 :HYEFWAWNWEAN ,其明显的疏水性质类似于C34N末端 ,特异性鉴定显示这些克隆均能够与HIV 1gp4 1N多肽结合。结论 该噬菌体克隆展示肽可模拟HIV 1gp4 1CHR多肽表位 。

BF_3·Et_2O/MCM-41固体酸催化剂及其催化性能的研究

A solid acid catalyst has been prepared by grafting Boron trifluoride on mesoporous molecular sieve MCM 41 and characterized by XRD and FTIR techniques. The XRD and FTIR results indicated that the BF 3·Et 2O interlocks with the silicon groups of MCM 41 surface to form strong solid acid. The solid acid catalyst would effectively promote the opening of epichlorohydrin with isobutanol to form 1 isobutoxy 3 chloropropanol, and showed a nice activity and selectivity.

蒙脱石原位合成高热稳定性Al-MCM-41

采用蒙脱石作为硅铝源前驱体,在矿物表面硅源和溶液硅源的共同作用下,在活化蒙脱石表面原位合成了高热稳定性Al-MCM-41。利用矿物表面硅源使得合成所用模板剂用量降低,合成产物的热稳定性较高,溶液硅源与表面硅源共同作用在模板剂上,聚合、沉淀得到长程结构较好的Al-MCM-41。本文对合成样品的XRD、比表面积、热稳定性、电子显微镜等进行了测试,对模板剂用量、NaOH的浓度和活化时间等进行了讨论。合成产物的热稳定性高,在800℃煅烧2h后仍具有很高的比表面积,达800m^2/g在1200℃煅烧2h后仍具有较高的比表面积,达100m^2/g以上。

狐狸MC1R基因编码区c. 40A>C和c. 41C>T相邻变异研究

为了检测狐狸MC1R基因多态性及其与毛色表型的相关性,本研究采集两个狐属12种毛色共计163只狐狸的皮肤组织样,利用PCR扩增和产物直接测序的方法获得狐狸MC1R基因1 054bp长的核苷酸序列,并进行了SNPs筛查。用PopGen32和SHEsis软件对突变位点进行了群体遗传学分析,用PANTHER软件评估了突变对基因产生的功能影响,用SPSS二元变量相关统计方法分析了多态位点与毛色表型间的相关性。结果表明,狐狸MC1R基因编码区40(c.40A>C)和41位点(c.41C>T)存在2个相邻错义突变,导致其编码的第14位氨基酸发生了变异:当第40位点为A时,氨基酸由苏氨酸(Thr)转变为异亮氨酸(Ile);当第40位点为C时,氨基酸由脯氨酸(Pro)转变为亮氨酸(Leu)。北极狐属狐在41位点基因型全部为TT型,而狐属狐大部分个体均为CC型,不存在TT型,推测该位点可能是区分狐狸属间的一个重要功能位点。PANTHER预测获知第41位点突变导致的氨基酸替换(p.Pro14Leu)对MC1R功能有显著影响。SPSS二元变量相关分析结果表明,41位点多态性与狐狸毛色表型存在显著低度相关性,推测狐狸MC1R基因编码区第41位点可能是参与其毛色形成的一个相对重要功能位点。

抗HIV-1 gp41合成多肽C34单抗的制备及生物学活性

目的制备针对C34和C46单抗, 并以此为工具研究gp41表位,进一步 了解HIV-1包膜蛋白的作用机理和病毒的感染机制,为寻找新的治疗靶点提供抗体工具。 方法常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗C34与C46的单克隆抗体,并鉴定其 特异性位点，还用ELISA法、MTT法及荧光分子探针技术对单抗的生物学活性进行研究。结果获得了3株抗C34单克隆抗体、2株抗C46单抗。此5个单抗均与C34结合 , 并抑制N36肽与C34肽复合物的形成；其中效价最高的1G1对H9/HIVⅢB细胞的生长有刺 激作用 ,对H9/HIVⅢB细胞和MT-2细胞的融合无明显影响。结论得到5株 可与C34反应,并可抑制C34与N36多肽结合的单抗, 其中1G1所识别的表位可能为增强性或刺激性表位。

HIV-1膜蛋白基因gp120和gp41的合成及在毕赤酵母中的表达

目的合成适合酵母表达的HIV-1膜蛋白gp120和gp41基因,在毕赤酵母中高效表达分泌型重组HIV-1 gp120和gp41抗原。方法选用酵母偏爱的同义密码子替换野生型gp120和gp41基因的酵母稀有密码子,采取基因搭桥法及聚合酶链反应(PCR),合成HIV-1 gp120和gp41基因,构建分泌型重组质粒并转化毕赤酵母菌株GS115,经甲醇诱导表达HIV-1外膜糖蛋白gp120和gp41。结果DNA测序证实合成的HIV-1 gp120和gp41基因正确克隆到表达载体中;聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹显示gp120和gp41在毕赤酵母中高效分泌表达。结论gp120和gp41合成基因在毕赤酵母表达系统高效分泌表达。

气氛对Al-MCM-41热稳定性的影响

研究了在不同气氛(氧气、氮气和氨气)条件下Al-MCM-41的热稳定性能,通过比表面积、孔径分布及X射线衍射对Al-MCM-41热稳定性的研究表明:在不同气氛条件下,Al-MCM-41的热稳定性有很大的差异,在氨气或氮气气氛下,处理温度高达1010℃条件下,Al-MCM-41仍然具有良好的介孔结构,但在氧气中介孔结构热稳定温度不超过900℃。

HIV-1gp41 C-螺旋模拟位的筛选和鉴定

目的 :筛选可作为小分子先导化合物的HIV 1gp4 1C螺旋模拟位 ,为开发抗HIV 1早期感染的小分子药物奠定基础。方法 :以源于HIV 1gp4 1N端的肽N36为靶 ,对噬菌体环七肽库进行亲和筛选。利用ELISA鉴定噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析。结果 :3轮筛选后随机挑取 2 6个噬菌体克隆 ,ELISA鉴定表明有 16个克隆可与N36结合 ,将其中 10个克隆DNA测序并推导氨基酸序列 ,每一克隆至少含有 2个疏水氨基酸 ,其中 9个克隆均有WW ,7个克隆有WWH保守序列。挑选阳性噬菌体克隆No 8进一步鉴定 ,游离N36肽阻断No 8克隆与固相化N36结合 ,C34肽竞争抑制N36肽与No 8克隆结合 (IC50 为 12 5 μg ml)。 结论 :表达WW保守序列的肽模拟HIV 1gp4 1C螺旋与N螺旋结合 ,该结果为设计针对HIV介导融膜的抑制剂提供技术支持。

应用疏水层析纯化HIV-1跨膜蛋白gp41截短体包涵体

目的对表达HIV-1跨膜蛋白gp41截短体包涵体进行纯化。方法将收获的表达菌体洗涤、超声波破菌、预处理后进行疏水层析。结果纯化后的gp41截短体的融合蛋白纯度达到90％,并且具有较好的抗原性和特异性。结论利用疏水层析可以将目的蛋白进行有效的纯化,为下一步的应用打下基础。

HIV-1 gp41的酵母表面展示及表达优化

以His标签检测蛋白的表达,利用酿酒酵母表面展示系统,成功地将HIV-1 gp41片段锚定在酵母表面,并检测到gp41的活性。以pMD18T-gp41为模板,通过PCR技术克隆了gp41基因,将gp41基因通过双酶切连接到载体pICAS-His上,构建了gp41酵母表面展示载体,并将其转化至酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)MT8-1中。重组菌经培养,利用免疫荧光染色方法进行染色,显微镜观察发现重组酵母细胞表面有绿色荧光,流式细胞仪结果进一步证实gp41正确折叠展示于酵母细胞表面。采用不同浓度的葡萄糖培养基进行表达优化。当葡萄糖浓度为1%时,82.46%的酵母细胞表达了gp41抗原;随着葡萄糖浓度升高,蛋白表达受到抑制。

HIV-1跨膜蛋白gp41重组抗原的表达及其免疫反应性

目的为开发和建立敏感、特异的抗HIV-1抗体的检测方法研制重组gp41抗原。方法根据HIV-1的基因序列,设计并合成了1对PCR扩增引物,应用PCR技术从HIV-1外膜基因组中扩增出HIV-1的gp41截短体,将扩增的基因片段插入质粒pET-28a中构建成重组表达质粒pET-gp41。诱导表达并纯化gp41重组抗原,对gp41进行了初步应用分析。结果gp41在大肠埃希菌BL21(DE3)中获得高表达,表达量占菌体总蛋白量的26.08%。纯化后截短体gp41的纯度为97.94%。经间接ELISA和免疫印迹检测,纯化后的表达产物gp41具有很高的抗原特异性和免疫反应性。结论研制的重组抗原gp41有较强的抗原性和潜在的应用价值。

HIV-1囊膜糖蛋白gp41三聚体结构域基因的表达及其单克隆抗体的制备

目的 :表达HIV 1囊膜糖蛋白gp4 1三聚体结构域基因N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,并制备针对该融合蛋白的单克隆抗体 (mAb) ,为筛选抗HIV多肽及分析gp4 1表位的免疫原提供抗体工具。方法 :在BL2 1(DE3)中诱导表达N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,经mAbNC 1鉴定后 ,采用小鼠腹股沟皮下NC膜免疫的方法免疫小鼠 ,并进行细胞融合、克隆化制备抗N5 1(L6 )C4 6mAb ,用ELISA法初步鉴定其特异性位点。结果 :获得了高表达的N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,并能与识别特异性空间构象的mAbNC 1反应。用该融合蛋白免疫小鼠后 ,获得了 6株抗N5 1(L6 )C4 6的mAb ,这 6株mAb均特异识别兔抗N36 (L6 )C34抗体捕获的融合蛋白 ,但不与N36或C34多肽片段反应。结论 :得到高效表达融合蛋白N5 1(L6 )C4 6 ,并呈现gp4 1核心结构空间构象。用此蛋白免疫小鼠得到 6株特异结合gp4