1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病细胞模型中细胞焦亡的抑制作用

目的探讨1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型中细胞焦亡的抑制作用及其机制。方法将PC12细胞分为对照组、模型组、Caspase-1-siRNA组、NC-siRNA组、1,25(OH)_(2)D_(3)组、联合干预组。对照组仅用DMEM高糖培养基培养细胞;模型组用20μmol/L Aβ_(1-42)处理细胞以造模;Caspase-1-siRNA组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);NC-siRNA组先用50 nmol/L NC-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);1,25(OH)_(2)D_(3)组用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预后加入20μmol/L Aβ_(1-42);联合干预组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,然后用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预,最后加入20μmol/L Aβ_(1-42)。细胞免疫荧光检测凋亡相关斑点蛋白(ASC)蛋白的表达;Western blot检测细胞焦亡通路相关蛋白表达,包括:NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-Caspase-1)、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、消皮素D-N端(GSDMD-N)、IL-1β、IL-1β前体(pro-IL-1β)、IL-18和IL-18前体(pro-IL-18)蛋白;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色检测细胞膜通透性。结果与对照组相比,模型组ASC蛋白荧光强度增强(P<0.01),细胞焦亡通路相关蛋白表达均增加(P<0.05),细胞膜通透性变大(P<0.01)。与模型组相比,1,25(OH)_(2)D_(3)组和Caspase-1-siRNA组ASC蛋白荧光强度减弱(P<0.01),pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD-N、pro-IL-1β、IL-1β、pro-IL-18和IL-18蛋白表达均下调(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。与Caspase-1-siRNA组相比,联合干预组GSDMD-N和IL-18蛋白表达降低(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。结论Aβ_(1-42)能够诱导PC12细胞发生细胞焦亡现象。1,25(OH)_(2)D_(3)可以通过抑制Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞发生焦亡来发挥其抗炎的神经保护作用,其机制与Caspase-1的抑制密切相关。

特发性矮小症儿童血清IGFBP-3、25(OH)D、Nesfatin-1和骨钙素水平及其临床意义

目的探讨特发性矮小症(ISS)儿童血清胰岛素生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)、25羟维生素D[25(OH)D]、摄食抑制因子-1(Nesfatin-1)、骨钙素水平及其临床意义。方法选取矮小症儿童286例为观察组,其中ISS组152例,生长激素缺乏(GHD)组134例;同时选取健康儿童100例为对照组。比较各组血清IGFBP-3、25(OH)D、Nesfatin-1、骨钙素水平差异,及其与体格发育等临床特征的关系。结果观察组儿童身高、骨龄指数、血清IGFBP-3、25(OH)D、骨钙素水平低于对照组,而Nesfatin-1高于对照组(P<0.05)。ISS组儿童身高、骨龄指数、血清IGFBP-3、25(OH)D、骨钙素水平高于GHD组,而Nesfatin-1低于GHD组(P<0.05)。血清IGFBP-3、25(OH)D和骨钙素水平身高≥125 cm儿童高于<125 cm儿童、骨龄指数≥0.90儿童高于<0.90儿童;而Nesfatin-1趋势相反(P<0.05)。ISS儿童血清IGFBP-3、25(OH)D、骨钙素与儿童身高、骨龄指数呈正相关(P<0.05),Nesfatin-1与儿童身高、骨龄指数呈负相关(P<0.05)。结论与健康儿童相比,ISS儿童血清IGFBP-3、25(OH)D、骨钙素水平较低,Nesfatin-1水平较高,可能与儿童体格发育存在相关性。

DA、CARM1、25-(OH)-D 3在糖尿病患者外周血中的表达及与NAFLD发生的关系

目的探讨多巴胺(DA)、共激活剂相关精氨酸甲基转移酶1(CARM1)、25-羟维生素D 3[25-(OH)-D 3]在糖尿病患者外周血中的表达及与非酒精性脂肪肝(NAFLD)发生的关系。方法选取2021年5月至2023年2月在该院治疗的2型糖尿病(T2DM)合并NAFLD患者70例作为T2DM合并NAFLD组,同时选取单纯T2DM患者66例作为T2DM组,选取体检健康者70例作为健康组,比较各组外周血DA、CARM1、25-(OH)-D 3水平,同时分析T2DM合并NAFLD组不同血糖控制、严重程度患者外周血DA、CARM1、25-(OH)-D 3水平。采用Pearson相关分析外周血DA、CARM1、25-(OH)-D3水平与糖化血红蛋白(HbA1c)、受控衰减参数(CAP)的相关性,受试者工作特征曲线分析外周血DA、CARM1、25-(OH)-D 3诊断重度NAFLD的价值。结果T2DM合并NAFLD组外周血DA和25-(OH)-D 3水平明显低于T2DM组和健康组(P<0.05),而CARM1水平明显高于T2DM组和健康组(P<0.05);T2DM组外周血DA和25-(OH)-D 3水平明显低于健康组(P<0.05),而CARM1水平明显高于健康组(P<0.05)。T2DM合并NAFLD组血糖控制差者DA和25-(OH)-D 3水平明显低于血糖控制好者(P<0.05),而CARM1水平明显高于血糖控制好者(P<0.05)。重度患者DA和25-(OH)-D 3水平明显低于轻中度患者(P<0.05),而CARM1水平明显高于轻中度患者(P<0.05)。外周血DA、25-(OH)-D 3水平与HbA1c、CAP呈负相关(P<0.05),CARM1水平与HbA1c、CAP呈正相关(P<0.05)。CARM1、25-(OH)-D 3、DA诊断重度NAFLD的曲线下面积分别为0.858(95%CI 0.768~0.948)、0.922(95%CI 0.856~0.989)、0.571(95%CI 0.427~0.715)。结论DA和25-(OH)-D 3水平在T2DM患者外周血中降低,而CARM1水平升高,尤其在T2DM合并NAFLD患者中变化更加明显;DA、CARM1、25-(OH)-D 3水平与血糖控制、NAFLD严重程度存在相关性,其中CARM1、25-(OH)-D 3水平在诊断重度NAFLD方面有一定应用价值。

维生素D3对小儿反复呼吸道感染的干预效果及对血清IGF-1、25-(OH)D3和IFN-γ水平的影响

目的 观察维生素D3对小儿反复呼吸道感染的干预效果及对血清人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、25-羟基维生素D3[25-(OH)D3]、干扰素-γ(IFN-γ)的影响。方法 选取2020年5月—2021年1月在广州市红十字会医院就诊的1~5岁反复呼吸道感染患儿200例,应用随机数字表法分为药物+膳食组和单纯膳食组各100例。药物+膳食组在日常饮食干预基础上给予维生素D3软胶囊口服,单纯膳食组给予日常饮食干预,2组均干预12个月。比较2组干预效果,干预前后呼吸道感染发作次数及实验室指标[IGF-1、25-(OH)D3、IFN-γ]变化。结果 药物+膳食组干预总有效率为86.0%,高于单纯膳食组的70.0%(χ^(2)=7.459,P=0.006);干预12个月内,2组呼吸道感染发作次数低于干预前,且药物+膳食组低于单纯膳食组(P均<0.01);干预12个月后,2组IGF-1、25-(OH)D3水平高于干预前,IFN-γ水平低于干预前,且药物+膳食组高于、低于单纯膳食组(P均<0.01)。结论 维生素D3对小儿反复呼吸道感染干预效果较好,可减少呼吸道感染发作次数,有效调节免疫功能。

骨质疏松症患者PINP、25-(OH)VitD_(3)、BMP-2与中医辨证分型的相关性研究

目的:分析骨质疏松症患者血清总I型胶原氨基末端前肽(PINP)、25-羟维生素D3[25-(OH)VitD_(3)]及骨形态发生蛋白2(BMP-2)与其中医辨证分型的相关性。方法:收集我院2020年8月~2023年8月医院收治的157例骨质疏松症患者的一般资料及中医四诊资料进行回顾性分析,并统计骨质疏松症患者中医辨证分型结果,对不同症型患者基本资料、PINP、25-(OH)VitD_(3)、BMP-2水平进行比较。结果:157例骨质疏松症患者中医辨证分型属肾阳虚证34例,脾肾阳虚证43例,肝肾阴虚证49例,血瘀气滞证31例。不同中医辨证分型的骨质疏松患者血清PINP、25-(OH)VitD_(3)及BMP-2水平整体相比,差异有统计学意义(P<0.05);其中,血瘀气滞组PINP水平显著高于肾阳虚组、脾肾阳虚组及肝肾阴虚组患者(P<0.05),而其余3组两两间相比,差异无统计学意义(P>0.05);脾肾阳虚证患者25-(OH)VitD_(3)水平明显低于肾阳虚组、肝肾阴虚组及血瘀气滞组(P<0.05),且肾阳虚组低于肝肾阴虚组及血瘀气滞组(P<0.05),而其余两组相比差异无统计学意义(P>0.05);血瘀气滞组BMP-2水平显著低于肾阳虚组、脾肾阳虚组及肝肾阴虚组患者(P<0.05),而其余3组两两间相比,差异无统计学意义(P>0.05);二分类logistics回归分析结果显示,血瘀气滞与PINP呈正相关(P<0.05),与BMP-2呈负相关(P<0.05);脾肾阳虚与25-(OH)VitD_(3)呈负相关(P<0.05)。结论:骨质疏松症患者的血清PINP、25-(OH)VitD_(3)、BMP-2水平与其中医辨证分型具有一定相关性,可作为评估患者中医辨证分型的参考指标。

儿童矮小症与25羟基维生素D,IGF-1,IGFBP-3的相关性

目的探讨儿童矮小症与25-(OH)D、IGF-1、IGFBP-3的相关性。方法以60例儿童矮小症作为观察组;另选择同期于本院体检健康的儿童32例作为参照组。采用化学发光免疫分析法测定IGF-1,IGFBP-3表达;采取酶联免疫吸附试验对血清内的25-(OH)D含量开展检测。比较两组25-(OH)D、IGF-1、IGFBP-3表达阳性率,分析其与儿童矮小症的相关性。结果入组儿童的性别、年龄以及父母身高比较无差异(P>0.05);相比参照组,矮小症三组患儿的25-(OH)D、IGF-1、IGFBP-3均呈下降趋势,其中ISS组、PGHD组的25-(OH)D、IGF-1、IGFBP-3水平高于CGHD组,差异有统计学意义(P<0.05),ISS组、PGHD组的25-(OH)D、IGF-1、IGFBP-3水平比较无差异(P>0.05),25-(OH)D、IGF-1、IGFBP-3水平与矮小症均呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论儿童矮小症与25-(OH)D、IGF-1、IGFBP-3之间关系密切,对矮小症的诊断和综合评价具有重要意义,可作为该病的确诊指标之一。

1α,25-二羟基维生素D_(3)对哮喘小鼠SIRT1、GATA-3表达及气道炎症水平的影响

目的探究1α,25-二羟基维生素D_(3)对哮喘小鼠气道炎症变化的影响及可能机制。方法将24只SPF级BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、哮喘+1α,25-二羟基维生素D_(3)(哮喘+VD_(3))组,每组8只。哮喘组和哮喘+VD_(3)组小鼠于第1、8、15天给予卵清蛋白(OVA)混悬液0.2 ml致敏,对照组给予生理盐水0.2 ml;哮喘组和哮喘+VD_(3)组于第22~28天使用1%OVA雾化吸入激发,对照组给予等量生理盐水雾化吸入,每次雾化30 min,1次/d,连续激发7 d;哮喘+VD_(3)组每次雾化前30 min给予1α,25-二羟基维生素D_(3)注射液(4μg/kg),对照组和哮喘组给予等量生理盐水。最后一次激发后麻醉处理采集小鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本。采用HE染色和PAS染色观察肺组织病理学改变及气道黏液水平的变化;ELISA法检测血清IgE及BALF中炎性因子白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13水平;免疫组化、Western blotting检测小鼠肺组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)和GATA结合蛋白-3(GATA-3)的表达情况。采用Pearson直线相关分析肺组织SIRT1、GATA-3表达水平(SIRT1、GATA-3的平均OD值)与小鼠血清IgE及BALF中IL-4、IL-5、IL-13浓度的相关性。结果与对照组比较,哮喘组小鼠肺组织气管及伴行血管周围炎性细胞浸润明显增多,其中以嗜酸性粒细胞为主,支气管管腔狭窄,气道黏膜上皮增生,气管内黏液分泌增多;哮喘+VD_(3)组小鼠上述改变较哮喘组减轻。与对照组比较,哮喘组小鼠血清IgE和BALF中IL-4、IL-5、IL-13等炎性因子水平及肺组织中GATA-3表达均增高(P<0.05),肺组织中SIRT1表达降低(P<0.05);与哮喘组比较,哮喘+VD_(3)组小鼠血清IgE和BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平及肺组织GATA-3表达均降低(P<0.05),肺组织SIRT1表达增高(P<0.05)。相关性分析结果显示,小鼠肺组织SIRT1表达水平与GATA-3表达量、血清IgG及BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平均呈负相关(P<0.05);小鼠肺组织GATA-3表达水平与血清IgG及BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平均呈正相关(P<0.05)。结论1α,25-二羟基维生素D_(3)可缓解哮喘小鼠的气道炎症,其机制可能是通过上调肺组织中SIRT1的表达,抑制GATA-3的表达,进而降低炎性因子(IL-4、IL-5、IL-13)水平。

1,25(OH)2D3通过稳定线粒体DNA对GCDC诱导的HiBECs凋亡的作用研究

目的:探讨骨化三醇(1,25(OH)2D3)对甘氨鹅脱氧胆酸盐(GCDC)诱导的人肝内胆管上皮细胞(HiBECs)凋亡的影响,并初步阐明其潜在的作用机制。方法:采用1 nM GCDC处理HiBECs建立原发性胆汁性胆管炎细胞模型,并采用不同浓度(0.1 nM、1 nM、10 nM、100 nM) 1,25(OH)2D3处理12 h。流式细胞术检测细胞凋亡水平,ELISA检测细胞培养液中炎症因子IL-6和IL-8水平,qPCR检测PDC-E2、PGC-1α、NrF-1和NrF-2的mRNA相对表达水平,Western blot检测细胞内Bcl-2、PDC-E2表达水平。结果:1 mM GCDC可以降低HiBECs细胞增殖活性,诱导HiBECs凋亡,提高细胞培养液中IL-6和IL-8水平,上调PDC-E2蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,抑制COX-1、PGC-1α、NrF-1和NrF-2 mRNA相对表达水平。可以提高GCDC诱导的HiBECs细胞增殖活性,抑制GCDC诱导HiBECs细胞凋亡,降低细胞培养液中IL-6和IL-8水平,下调PDC-E2蛋白表达水平,提高COX-1、PGC-1α、NrF-1和NrF-2 mRNA相对表达水平。结论:1,25(OH)2D3可抑制诱导HiBECs细胞凋亡,其作用机制可能与线粒体DNA稳定有关。

矮小症儿童血清IGF-1、25(OH)D及营养指标相关分析

目的探讨矮小症儿童血清胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)、血清25-羟维生素D[25-hydroxyvitamin D,25(OH)D]及营养指标变化状况。方法选取符合矮小症诊断标准儿童286例,0~6岁142例,7~14岁144例;健康儿童100例,0~6岁和7~14岁各50例;均检测血清IGF-I、25(OH)D、前白蛋白(prealbumin,PA)、转铁蛋白(transferrin,TRF)、白蛋白(albumin,ALB)、视黄醇结合蛋白(retinol-binding protein,RBP)及游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)水平。结果0~6岁组矮小症儿童血清IGF-I、25(OH)D、PA、TRF、RBP低于健康组,差异均有统计学意义(P<0.05),两组ALB差异无统计学意义(P>0.05);7~14岁组矮小症儿童血清IGF-I、25(OH)D、PA、RBP低于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),血清TRF、ALB差异无统计学意义(P>0.05)。两年龄组矮小症儿童FFA均高于健康组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论矮小症儿童存在低水平血清IGF-I、25(OH)D、PA、RBP,高水平血清FFA,早期检测血清IGF-I、25(OH)D及营养指标水平对有效评估和干预营养性矮小症有重要意义。

1,25-(OH)_2D_3及LPS对2型糖尿病肾病尿毒症患者单核细胞维生素D受体表达的影响

目的探讨1,25-(OH)2D3及TLR4配体(脂多糖,LPS)对2型糖尿病(T2DM)和糖尿病肾病(diabetic ne-phropathy,DN)尿毒症患者血清干预的单核细胞维生素D受体(VDR)表达的影响,进一步探索1,25-(OH)2D3在T2DM和DN炎症性免疫反应中的作用。方法分离研究对象(健康对照组、T2DM组和DN尿毒症组)外周血血清,孵育THP-1单核细胞,然后于含或不含10-7mol/L的1,25-(OH)2D3培养液中培养48 h后,再用终浓度为1μg/ml的LPS干预24 h,收集单核细胞和培养上清。采用RT-PCR检测VDR mRNA表达,Western blot、免疫荧光检测THP-1单核细胞内VDR蛋白表达。ELISA法检测细胞培养上清IL-6和IL-10浓度。结果与正常对照组比较,在LPS的刺激下T2DM组和DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR mRNA水平下调[对照组(0.99±0.25);T2DM组(0.65±0.24);DN尿毒症组(0.62±0.27),P<0.05];DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR蛋白表达比正常对照组和T2DM组显著下调[对照组(0.48±0.05);T2DM组(0.50±0.06);DN尿毒症组(0.20±0.01),P<0.01],且LPS增强以上患者血清孵育的THP-1单核细胞炎症细胞因子IL-6的分泌[对照组(15.13±1.61);T2DM组(24.06±2.92);DN尿毒症组(70.77±5.48),P<0.05];而1,25-(OH)2D3可部分阻断上述作用。结论 LPS能下调T2DM和DN尿毒症患者单核细胞VDR mRNA和蛋白的表达,引起促炎和抗炎细胞因子失调。1,25-(OH)2D3可部分逆转LPS的作用,对T2DM和DN尿毒症可能具有一定的保护作用。

血清circCOL1A2和miR-25-3p水平与T2DM合并DR的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清环状Ⅰ型胶原α2(circCOL1A2)和微小RNA-25-3p(miR-25-3p)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法纳入2020年5月—2022年6月在沧州市中心医院进行治疗的T2DM患者108例(216只眼),根据是否发生DR分为DR组56例(112只眼),非DR(NDR)组52例(104只眼),同时选取同期到本院进行体检的健康者45例(90只眼)作为对照组。分别采集对照组体检时、DR组和NDR组入院后的静脉血4~6 mL。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测3组circCOL1A2、miR-25-3p相对表达量,并检测血清生化指标。分析血清circCOL1A2、miR-25-3p水平的相关性,及二者与DR发生的相关性,并评估对DR发生的影响价值。结果(1)circCOL1A2、miR-25-3p水平:3组间血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=685.891,P=0.000)。NDR、DR组血清circCOL1A2水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=15.969、qDR=50.526,均P=0.000),DR组血清circCOL1A2水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=35.641,P=0.000)。3组间血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=583.834,P=0.000)。NDR、DR组血清miR-25-3p水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=10.101、qDR=45.157,均P=0.000)。DR组血清miR-25-3p水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=36.169,P=0.000)。(2)生化指标:DR组和NDR组生化指标比较,DR组患者血清C反应蛋白(CRP)、尿酸(UA)水平均高于NDR组,差异均有统计学意义(tUA=3.320,P=0.001;tCRP=8.705,P=0.000)。2组患者其余血清生化指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)不同分期DR患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平比较:Ⅰ期到Ⅴ期患者血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=32.900,P=0.000)。且Ⅰ期到Ⅴ期患者circCOL1A2水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=4.102,P=0.042;qⅡ-Ⅲ=4.674,P=0.014;qⅢ-Ⅳ=4.359,P=0.026;qⅣ-Ⅴ=4.347,P=0.027)。Ⅰ期到Ⅴ期患者血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=32.407,P=0.000)。且Ⅰ期到Ⅴ期患者miR-25-3p水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=5.206,P=0.005;qⅡ-Ⅲ=4.187,P=0.036;qⅢ-Ⅳ=4.165,P=0.037;qⅣ-Ⅴ=4.064,P=0.045)。(4)circCOL1A2、miR-25-3p水平与DR的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平均与DR发生呈正相关(rcircCOL1A2=0.382、rmiR-25-3p=0.479,均P=0.000)。(5)血清circCOL1A2与miR-25-3p的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2与miR-25-3p呈正相关(r=0.564,P=0.000)。(6)T2DM患者DR发生的相关因素分析:CRP、UA、circCOL1A2、miR-25-3p水平为T2DM患者发生DR的危险因素。结论T2DM患者发生DR时血清circCOL1A2、miR-25-3p表达上调,二者与DR发生呈正相关,联合检测对T2DM患者发生DR具有一定的预测价值。

1,25-(OH)_2-VD_3下调糖尿病肾病肾脏组织p38MAPK和胶原蛋白的表达

目的研究2型糖尿病肾间质纤维化中p38丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）、Ⅲ型胶原蛋白（Col3）和Ⅳ型胶原蛋白（Col4）表达，及1，25-（OH）2-VD3对其表达的影响；探讨p38MAPK与Col3和Col4表达的相关性。方法以高糖高脂饮食联合30mg／kg链脲佐菌素（STZ）诱导大鼠2型糖尿病模型。将60只大鼠随机平均分为对照组、模型组、1，25-（OH）2-VD3治疗组[建模后给予6ng／（100g·d）1，25-（OH）2-VD3治疗]、胰岛素组（建模后给予2～3U胰岛素治疗）。干预8周后检测4组血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、24h蛋白尿水平；过碘酸希夫反应（PAS）染色观察肾脏病变情况；采用Western blot及免疫组织化学染色检测大鼠肾间质p38MAPK、CoD和Col4的表达；采用Spearman法进行相关性分析。结果与模型组相比，1，25-（OH）2-VD3治疗组和胰岛素治疗组血清肌酐、尿素氮、24h蛋白尿和肾间质受损面积均降低；与对照相比，模型组p38MAPK、Col3和Col4水平增加，1，25-（OH）2-VD3治疗组和胰岛素治疗组明显降低；相关性分析发现24h蛋白尿与p38MAPK、CoB和Col4免疫组织化学的结果呈正相关，p38MAPK的表达与Col3和Col4表达呈正相关。结论2型糖尿病大鼠肾间质组织p38MAPK、Col3和Col4表达上调，1，25-（OH）2-VD3可能通过p38MAPK下调Col3、Col4的表达改善糖尿病肾病肾组织纤维化。

阿胶强骨口服液对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度、生物力学、25-(OH)D_3和1,25-(OH)_2D_3的影响

目的:研究阿胶强骨口服液对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度(BMD)、生物力学、25(OH)D3和1,25(OH)2D3的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗原发性骨质疏松症的疗效机制。方法:4月龄健康雌性SD大鼠36只,随机分为3组,每组12只,分别为模型组,假手术组,阿胶强骨口服液治疗组。除假手术组外所有大鼠手术摘除双侧卵巢后导致雌激素缺失从而诱导骨质疏松症模型,分别在实验的第4、8、12周采用DEXA法分析股骨头及粗隆部的骨密度,生物力学技术分析股骨头生物力学参数,酶联免疫吸附方法检测25(OH)D3和1,25(OH)2D3的含量。结果:阿胶强骨口服液治疗组与模型组比较,股骨头及粗隆部骨密度明显提高(P<0.05);最大载荷(ML)及最大压应变(MS)等指标明显增强(P<0.05);血液、肝脏和肾脏组织中25(OH)D3和1,25(OH)2D3的含量明显提高,且组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。阿胶强骨口服液治疗组与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:阿胶强骨口服液在雌激素缺失早期即可在蛋白水平上调节25(OH)D3和1,25(OH)2D3的表达,激活骨代谢,提高骨密度,增强骨质量,起到预防骨质疏松的作用。

1,25-(OH)_2D_3对肺纤维化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中Ca^(2+)浓度和PI3K/AKT/mTOR通路的影响

目的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种慢性炎症性疾病,病因不明,缺乏有效的治疗方法。文中旨在探讨肺泡Ⅱ型上皮细胞中Ca^(2+)和PI3K/AKT/mTOR通路在大鼠IPF中的作用,以及1,25-(OH)_2D_3对Ca^(2+)浓度和PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法 150只雄性SD大鼠随机分为:预防组(对照组Ⅰ、模型组Ⅰ、给药组Ⅰ,每组20只)和治疗组(对照组Ⅱ、模型组Ⅱ、给药组Ⅱ,每组30只)。对照组Ⅰ/Ⅱ行气管暴露手术,气管内给以200μL/只的无菌等渗盐水,并分别于第2和14天开始腹腔注射等渗盐水(200μL/只);模型组Ⅰ/Ⅱ气管内灌注博来霉素(5 mg/kg),并分别于手术后第2和14天开始腹腔注射维生素D3的溶剂(0.1%乙醇和99.9%的丙二醇,1μL/g体重);给药组Ⅰ/Ⅱ气管内灌注博来霉素(5 mg/kg),并分别于手术后第2和14天开始腹腔注射1,25-(OH)_2D_3(2μg/kg体重)。大鼠气管内注射博来霉素建立IPF模型,给药组腹腔注射1,25-(OH)_2D_3进行预防和治疗。检测各组大鼠肺组织中羟脯氨酸的含量,分离肺泡Ⅱ型上皮细胞并用Fluo-3AM荧光负载,激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca^(2+)浓度。RT-PCR方法检测PI3K、AKT、mTOR mRNA的表达水平。结果模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中大鼠肺组织中羟脯氨酸的含量、肺泡Ⅱ型上皮细胞内Ca^(2+)浓度以及PI3K、AKT、mTOR mRNA表达,在各时间点与相应对照组Ⅰ/Ⅱ相比均明显升高(P<0.05或P<0.01);给药组Ⅰ/Ⅱ与模型组Ⅰ/Ⅱ相比,上述指标均有显著降低(P<0.05或P<0.01)。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中Ca^(2+)浓度与PI3K、AKT、mTOR mRNA表达之间具有显著正相关(r=0.598 8、r=0.623 0、r=0.6603,P<0.01;r=0.7012、r=0.6323、r=0.7403,P<0.01)。结论 PI3K-AKT-mTOR通路在大鼠IPF的发生发展中起重要作用,1,25-(OH)_2D_3可以降低肺泡Ⅱ型上皮细胞内Ca^(2+)的浓度,抑制PI3K-AKT-mTOR通路,进而抑制IPF的发生发展。

1,25(OH)_2D_3对甲状旁腺素诱导的肾小管上皮细胞转分化和TGF-β_1的表达的影响

目的:探讨1,25(OH)2D3对甲状旁腺素(PTH)诱导的肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养在含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液中。对照组:加入等体积含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH刺激组:加入终浓度为10-10 mol/L PTH的含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH+1,25(OH)2D3干预组:加入10-10 mol/L PTH,同时加入不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)的1,25(OH)2D3。刺激HK-2细胞48 h。半定量RT-PCR法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1的基因表达;Western blot法检测细胞中α-SMA和TGF-β1的蛋白表达;免疫细胞化学法检测细胞中α-SMA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1的含量。结果:半定量RT-PCR结果显示,对照组HK-2细胞中几乎无α-SMA的mRNA表达,仅有少量的TGF-β1 mRNA表达;PTH刺激组α-SMA和TGF-β1mRNA表达量与对照组比较明显增加;PTH+1,25(OH)2D3干预组表达量比PTH刺激组显著降低,且随着1,25(OH)2D3浓度的升高呈一定的剂量依赖性(P<0.05)。Western blot结果显示,对照组HK-2细胞中无α-SMA的蛋白表达,仅有少量的TGF-β1蛋白表达;10-10 mol/L的PTH能够明显诱导HK-2细胞中α-SMA的蛋白表达,增加TGF-β1的蛋白表达量;PTH+1,25(OH)2D3干预组,α-SMA和TGF-β1的蛋白表达量比PTH刺激组显著降低(P<0.05)。免疫细胞化学法结果显示,对照组几乎无α-SMA阳性表达的细胞,PTH刺激组可见大量细胞α-SMA表达阳性;PTH+1,25(OH)2D3干预组α-SMA表达阳性的细胞数明显低于PTH刺激组(P<0.05)。ELISA结果显示,对照组细胞上清液中可检测到少量的TGF-β1,PTH刺激组含量显著升高,PTH+1,25(OH)2D3干预组与PTH刺激组比较含量明显降低(P<0.05)。结论:1,25(OH)2D3能够部分拮抗PTH诱导的HK-2细胞转分化和TGF-β1的表达。

rhIL-1α与1,25-(OH)_2D_3联合作用对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG的影响

目的:研究rhIL-1α与1,25-(OH)2D3联合作用对HPDLFs表达RANKL和OPG的影响,探讨牙槽骨改建的调节机制。方法:10μg/L rhIL-1α与1×10-8 mol/L1,25-(OH)2D3联合作用于体外培养的HPDLFs,于48h后收集细胞,利用荧光定量RT-PCR技术检测RANKL mRNA和OPG mRNA的表达,探讨RANKL/OPG比值的变化。结果:rhIL-1α和1,25-(OH)2D3都调节HPDLFs表达RANKL和OPG。rhIL-1α单独作用上调HPDLFs表达RANKL和OPG,增加RANKL/OPG比值(P<0.05);1,25-(OH)2D3单独作用则上调表达RANKL,下调表达OPG,增加RANKL/OPG比值(P<0.05)。这2种调节因子联合作用对HPDLFs RANKL表达有协同作用,但对RANKL/OPG比值的影响无协同效应。结论:rhIL-1α和1,25-(OH)2D3都通过RANKL-OPG途径调节HPDLFs参与牙槽骨改建,2种调节因子联合作用对RANKL表达的影响明显优于单因素诱导效果,但对RANKL/OPG比值的影响并没有产生协同效应或累加效应。

1，25-(OH)2D3负向调节糖尿病模型大鼠血管紧张肽活性

目的研究1,25-(OH)2D3对糖尿病(DM)模型大鼠肾素-血管紧张肽-醛甾酮系统(RAAS)活性的影响及对肾小球足细胞的保护作用。方法将40只SD大鼠分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)灌注组(C组)、AngⅡ+1,25-(OH)2D3灌注组(D组)。B、C、D组均腹腔注射链脲菌素(STZ)制作DM大鼠模型。C组皮下埋置渗透性微量泵,给予AngⅡ400ng·kg-1·min-1;D组经两条渗透性微量泵通路分别给予AngⅡ(400ng·kg-1·min-1)+1,25-(OH)2D3(450ng·kg-1·min-1)。两组均连用10周。检测大鼠血糖(BG)、收缩压(SBP)、24h尿蛋白定量(TP)和肾素活性(PRA)、血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)和醛甾酮(Ald)水平。检测尿沉渣足细胞特异性标志蛋白podocalyxin以检测尿液足细胞(UPC)水平,免疫荧光染色观察肾小球上皮细胞蛋白-1(GLEPP1)的分布。结果B组BG、SBP、UPC、TP、PRA、AngⅡ、Ald均较A组明显升高。C组SBP、UPC、TP、PRA、AngⅡ、Ald较B组均明显升高(P<0.05或P<0.01)。D组SBP、UPC、TP、AngⅡ、Ald较C组明显降低,D组AngⅡ较B组明显降低。病理组织肾小球荧光染色示A组GLEPP1正常分布,C组呈明显缺失,B和D组亦缺失。UPC与TP、AngⅡ呈正相关(rs=0.51,0.35,P<0.01,P<0.05)。结论1,25-(OH)2D3可能是RAAS的负向调节因子,通过下调RAAS活性,防止足细胞脱落排泄介导其肾保护作用。

1,25-(OH)_2D_3对糖尿病肾病大鼠血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨1,25-(OH)2D3对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织VEGFmRNA及蛋白质表达的影响。方法SD大鼠分为3组,对照组,糖尿病肾病(DN)组,1,25-(OH)2D3组。链脲菌素腹腔注射诱导DM大鼠模型,尿蛋白定量≥30mg/24h为DN大鼠,诱导成功后1,25-(OH)2D3组给予3ng/(100g.d)皮下注射。实验12周末检测大鼠体重、血糖、血肌酐、24h尿白蛋白。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGFmRNA及蛋白质的表达。结果DN组大鼠体重、血糖、尿白蛋白,肾脏VEGFmRNA及蛋白质的表达,肾小球细胞数,细胞外基质(ECM)均高于对照组(P<0.01)。与DN组相比,1,25-(OH)2D3组大鼠体重、血糖、尿白蛋白,肾脏VEGFmRNA及蛋白质的表达,肾小球细胞数,ECM聚积显著降低(P<0.01或P<0.05)。尿VEGF与尿白蛋白呈正相关(rs=0.41,P=0.037),与体重、血糖、血肌酐无相关性(rs分别为0.18,0.13,0.21,P>0.05)。结论1,25-(OH)2D3可减轻DN大鼠尿白蛋白的排泄,抑制肾小球系膜增殖,降低VEGFmRNA及蛋白质的表达。

1,25-(OH)_2D_3对肺纤维化大鼠中PI3K、AKT、mTOR表达的影响及其机制研究

目的观察1,25-(OH)_2D_3对特发性肺纤维化(IPF)大鼠中PI3K、AKT、m TOR表达的影响,并探讨其对IPF的作用机制。方法90只雄性SD大鼠随机分为模型组、治疗组及对照组,每组30只。模型组和治疗组按5 mg/kg的剂量气管内注射博来霉素,复制肺纤维化模型,对照组注入无菌生理盐水(200μl/只)。注射后第2天起,治疗组腹腔注射1,25-(OH)_2D_3(2μg/kg),模型组和对照组分别腹腔注射1,25-(OH)_2D_3溶剂(200μl/只)和无菌生理盐水(200μl/只),均隔天1次。各组于第14、21和28天分别处死10只,检测各组大鼠肺组织中羟脯氨酸的含量,实时聚合酶链反应(real-time PCR)和免疫组织化学方法分别从m RNA水平和蛋白质水平检测肺组织中PI3K、AKT、m TOR的表达。结果模型组和治疗组大鼠肺组织羟脯氨酸的含量,PI3K、AKT、m TOR 3种基因的转录表达和蛋白质表达量,在第14、21和28天均高于对照组(P<0.05),且治疗组中的上述指标,在各时间又均低于模型组(P<0.05)。结论IPF的发生发展过程中,PI3K-AKT-m TOR通路具有重要作用,1,25-(OH)_2D_3对IPF有一定的治疗作用,其机制可能是通过抑制PI3K-AKT-m TOR通路发挥其治疗作用。

肥胖大鼠白色脂肪组织中PPAR_γ、UCP2基因与血清1_α,25-(OH)_2-D_3的相关性研究

目的:探讨高脂饮食诱导下肥胖大鼠白色脂肪组织(whiteadiposetissue,WAT)中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomeproliferator-activatedreceptor-γ,PPARγ)、解偶联蛋白2(uncouplingprotein2,UCP2)基因与血清1α,25-(OH)2-D3的相关性。方法:①36只SD大鼠,标准饲料平衡1周后,随机分成2组,肥胖组和标准对照组,分组后分别用高脂饲料和标准饲料继续饲养6周;②采用ELISA方法测定血清1α,25-(OH)2-D3;③RT-PCR技术分析WAT中PPARγ和UCP2基因mRNA的表达水平。结果:①肥胖组大鼠的体重增值高于标准对照组(P<0.05),提示肥胖模型制备成功。②肥胖大鼠血清1α,25-(OH)2-D3低于标准对照组(P<0.05)。③WAT中PPARγ和UCP2mRNA表达均高于标准对照组(P<0.05)。结论:肥胖大鼠WAT中PPARγ诱导UCP2高表达,1α,25-(OH)2-D3与UCP2mRNA表达趋势相反。