高速逆流分离红豆杉中紫杉烷类化合物及相关抗炎活性研究

目的 建立高速逆流色谱法分离纯化红豆杉中10-DABⅢ类和紫杉醇类部位化合物的方法,分析化合物相关抗炎活性.方法 通过调整分离系统中的流速和溶剂比例筛选出最佳的高速逆流分离系统.薄层色谱法和高效液相色谱法鉴定和检测10-DABⅢ和紫杉醇含量.通过CCK-8法测定化合物用药的安全浓度.并用化合物作用于脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症模型,ELISA检测IL-10的分泌量.结果 高速逆流色谱最佳分离系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-乙醇-水=5:5:5:1:6.5,薄层色谱和高效液相色谱法测定化合物1为含量41.32%的10-DABⅢ类部位化合物,化合物2为48.70%的紫杉醇类部位化合物.化合物1和化合物2在浓度3.125~12.5μg/ml间无明显细胞毒性.ELISA结果显示浓度为12.5μg/ml的10-DABⅢ类部位化合物促进IL-10分泌,10-DABⅢ类部位为抗炎活性成分部位.结论 此方法稳定、高效、经济实用,为红豆杉有效部位的提取分离提供有效的研究依据.

南方红豆杉试管微芽诱导培养及其紫杉醇类化合物的积累

以南方红豆杉幼茎段和茎尖为外植体,以WPM为基本培养基,单一添加不同浓度的KT、TIBA、ZT和6-BA进行芽诱导培养。结果表明:各自添加0.4mg·L-1KT、3.0mg·L-1TIBA、0.1mg·L-1ZT和0.01mg·L-16-BA时的芽诱导率最高。培养50d的试管微芽中紫杉醇和10-去乙酰基巴卡亭III(10-DABIII)的积累量比天然南方红豆杉嫩枝高2倍以上,试管微芽中10-DABIII比紫杉醇高,且二者均随芽诱导率的增加而增加,当芽诱导率达最高时亦达到最高。TIBA所诱导芽短而粗壮。