产印楝素前体tirucalla-7,24-dien-3β-ol的酿酒酵母细胞工厂构建

印楝素是从印楝属植物印楝种子中提取的一种高度氧化的柠檬苦素类三萜化合物,是公认无害的植物源杀虫剂。在植物中含量很低,化学合成步骤繁琐,通过生物合成的方式来获取印楝素将对印楝素的商业用途提供很大的帮助,但生物合成途径未知限制了利用合成生物学进行外源合成。该研究在实验室优化过的甲羟戊酸途径(MVA)的代谢流的酿酒酵母菌株中,通过异源表达来自苦楝和印楝中的氧化鲨烯环化酶(OSCs)AiOSC1和MaOSC1基因,验证了上述2个OSC为苦楝素和印楝素合成的三萜骨架化合物。进一步将印楝氧化鲨烯环化酶基因(AiOSC1),连同拟南芥来源鲨烯合酶基因(AtAQS2),以及酿酒酵母来源截短的3-羟基-3-甲基戊二酰单酰辅酶A还原酶基因(PgtHMGR)共同整合到酿酒酵母染色体的delta位点上,构建了高产印楝素合成起始三萜骨架tirucalla-7,24-dien-3β-ol的酵母菌株。进一步将苦楝来源的细胞色素氧化酶基因(MaCYP71BQ5)导入上述高产tirucalla-7,24-dien-3β-ol酵母细胞中,成功在酵母细胞中检测到MaCYP71BQ5的产物。该研究不仅为tirucalla-7,24-dien-3β-ol生物合成奠定了基础,也为后期在酵母中研究印楝素生物合成途径中的细胞色素氧化酶(CYP450)提供了优势底盘菌株。

角果木内生真菌活性分子对HeLa细胞增殖凋亡的影响

为了解红树林植物角果木(Ceriops tagal)内生壳囊孢属真菌Cytospora sp.提取物WP-1[(22E,24R)-5,8-epidioxy-5α,8α-ergosta-6,9(11),22E-trien-3β-ol]抑制人宫颈癌HeLa细胞的效果,笔者采用MTT比色法、克隆形成实验、Hoechst 33258染色和蛋白免疫印迹法来研究WP-1对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。结果表明,随着WP-1浓度增加,HeLa细胞的存活率显著降低,而且该提取物能明显抑制HeLa细胞的克隆形成,当其浓度达到10μmol·L−1时,HeLa细胞出现染色质浓缩以及核小体碎裂的凋亡现象。蛋白免疫印迹法结果显示,随着WP-1剂量的增加,与凋亡相关的蛋白Caspase-3及Caspase-9的表达下调,Cleaved Caspase-3,Cleaved Caspase-9的表达明显上调。本实验结果显示,WP-1可以抑制HeLa细胞的增殖,并促进HeLa细胞发生凋亡。

大接骨丹的化学成分研究(Ⅲ)

目的研究大接骨丹Torricellia angulata var.intermedia根皮的化学成分。方法采用硅胶、大孔树脂、Sephadex LH-20和ODS等色谱手段进行化学成分的分离纯化;依据理化性质、波谱数据和相关文献进行结构鉴定。结果分离鉴定了10个化合物,分别鉴定为丁香树脂酚(1)、豆甾醇(2)、3,4,5,7-四羟基-苯乙酸(3)、豆甾-5,11-二烯-3β-醇(4)、22,23-二氢豆甾醇(5)、β-胡萝卜苷(6)、26,27-dinor-4,4-dimethyl-cholesta-8,14-dien-3-ol(7)、硬脂酸(8)、软脂酸(9)、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛(10)。结论其中化合物3为新的天然产物,化合物1、2、4、5、7、10为首次从该植物中分离得到。

山沉香中两个新倍半萜的结构鉴定和抗菌活性(英文)

目的:对山沉香中化学成分的分离鉴定和抗菌活性进行研究。方法:运用柱层析等方法对山沉香氯仿层进行分离纯化,并通过波谱解析和理化鉴别进行结构鉴定。同时对分离得到化合物的抗菌活性进行了评估。结果:从山沉香分离得到2个倍半萜类化合物:guai-9-en-4β-ol(1)和14, 15-dinorguai-1, 11-dien-9, 10-dione(2)。化合物1对Bacillus coagulas具有良好的活性而对Proteous vulgaris活性较差; 化合物2对Eschecheria coli具有良好的活性而对Staphylococcus aureus活性较差。结论:化合物1和2为新化合物, 具有较好的抗菌活性。

UPLC-Q/TOF法同时定性定量分析滇芹药材中主要化学成分

目的建立UPLC-Q/TOF法同时定性、定量分析滇芹中主要化学成分。方法采用超高效液相色谱串联飞行时间质谱法进行分析,色谱柱为Agilent Poroshell 120 Hilic,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min;定性、定量采用Q-TOF正负离子全扫描+IDA(信息关联采集)模式。结果利用已建立的筛查数据库将满足质量误差小于5×10-6、同位素分布正确且含有二级碎片的离子作为分析目标化合物,结合软件Formula Finder、Mass Calculators等功能、在线数据库(Human Metabolome Database、Pub Chem、Chemical Book等)及二级碎片裂解规律,共鉴定出23个化合物,滇芹首次发现4个化合物。确定阿魏酸为定量分析指标性成分,其定量、定性离子分别为178和149;阿魏酸检测质量浓度线性范围为1.14~1 140 ng/m L(r=1.000),检测限、定量限分别为0.87、2.91 ng/m L,精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2%,加样回收率为98.13%~101.25%(RSD=1.37%,n=5)。结论该方法灵敏度高、重现性好,分析快速、准确、可靠,可用于同时定性、定量检测滇芹药材中主要化学成分;云南滇芹中阿魏酸含量要高于西藏滇芹。

疣孢黄枝瑚菌化学成分研究

目的对疣孢黄枝瑚菌子实体的化学成分进行分离鉴定。方法采用溶剂法进行提取和萃取,采用色谱和重结晶等方法进行分离纯化,利用波谱法进行结构鉴定。结果从疣孢黄枝瑚菌中分离得到了11个化合物,分别鉴定为腺嘌呤(Ⅰ),5α,8α-过氧化麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(Ⅱ),5α,8α-过氧麦角甾-6,9(11),22-三烯-3β-醇(Ⅲ),苯乙酸(Ⅳ),邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(Ⅴ),5α,8α-过氧化麦角甾-6,9(11)-二烯-3β-醇(Ⅵ),豆甾醇(Ⅶ),D-阿洛醇(Ⅷ),α-D-(+)-葡萄糖(Ⅸ),3-O-β-D-吡喃葡萄糖-22E,24R-5α,8α-过氧麦角甾-6,22-二烯(Ⅹ),3-O-β-D-吡喃葡萄糖-22E,24R-5α,8α-过氧化物麦角甾-6,9,22-三烯(Ⅺ)。结论 11个化合物均为首次从该菌中分离得到。

Two new ar-bisabol sesquiterpenes from the stem bark of Fraxinus sielboldiana

Two new ar-bisabol sequiterpenes,(+)-(7S,10S)-10-epi-7,10-epoxy-3-hydroxy-ar-bisabol-11-ol(1)and(+)-(7R,8R,10S)-10-epi-7,10-epoxy-8-hydroxy-ar-bisabol-11-ol(2),have been isolated by a combination of various column chromatographic techniques including reversed-phase semipreparative HPLC from an ethanol extract of the stem bark of Fraxinus sielboldiana.Their structures were determined by spectroscopic methods including IR,MS,and 1D and 2D NMR experiments.This is the first report of sequiterpenes in the genus Fraxinus.

二妙丸HPLC指纹图谱及UPLC-LTQ-Orbitrap成分分析

目的建立二妙丸的HPLC指纹图谱质量评价方法,并对二妙丸中的化学成分进行UPLC-LTQ-Orbitrap定性分析。方法指纹图谱采用HPLC法,色谱柱为Shiseido C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 m L/min,检测波长为330 nm,以黄柏、苍术混合对照药材生成的色谱图为标准对照图谱,采用"中国药典委员会相似度评价软件(2012A)"对样品进行相似度评价;采用UPLC-LTQ-Orbitrap技术对二妙丸中化学成分进行定性分析,色谱柱为Thermo Scientific Syncronis C18柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm),乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,经DAD检测器后采用LTQ-Orbitrap Elite质谱正离子模式采集,各成分的一级全扫描离子在离子阱内进行CID多级质谱、FT检测高分辨质谱数据分析。结果所建立的指纹图谱有10个共有色谱峰,20批样品的相似度在0.869~0.992。通过对照品指认、文献比对以及高分辨质谱数据解析,鉴定了21个化学成分,分别为neo-chlorogenic acid、木兰箭毒碱、竹叶椒碱、木兰花碱、3-O-feruloylquinic acid、蝙蝠葛碱、demethyleneberberine、oxyberberine、非洲防己碱、药根碱、小檗红碱、巴马汀、小檗碱、丁香酸、咖啡酸、(E)-4-(3-hydroxyprop-1-en1yl)-2-methoxyphenol、白术内酯II、acetosyringone、白术内酯I、selina-4(14),7(11)-dien-8-one、苍术素。结论建立的二妙丸HPLC指纹图谱专属性强,重现性好,结合液质联用技术的定性分析,可全面评价二妙丸的内在质量。