14,15-EET减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的作用及其机制

目的探讨14,15-环氧二十碳三烯酸(14,15-EET)减轻脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及其机制。方法将32只6~8周的C57BL/6J雄性小鼠按照随机数字表法分为4组:对照组、LPS组、LPS+铁死亡抑制剂(Fer-1)组以及LPS+14,15-EET组,每组各8只。对照组小鼠气管内滴注无菌磷酸盐缓冲液(PBS)50μL,另外3组小鼠气管内分别滴注0.2 mg/mL LPS 50μL。气管内滴注LPS刺激6 h后,LPS+Fer-1组尾静脉注射Fer-1(0.8 mg/kg),LPS+14,15-EET组尾静脉注射14,15-EET(100 nmol/L),分别作用16 h。造模成功后取小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF),苏木精-伊红染色观察各组小鼠肺组织病理学变化,测量肺湿/干(W/D)比重;记录各组小鼠BALF中总蛋白浓度及总细胞数量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测小鼠肺组织白细胞介素(IL)-1β和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达;采用冰冻切片活性氧簇(ROS)染色观察肺组织中ROS的生成;分别使用试剂盒检测肺组织丙二醛水平及铁含量;采用蛋白质印迹法检测铁死亡相关分子谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、环氧化物酶2(COX2)的表达水平。结果与对照组相比,LPS组肺损伤评分及W/D值均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与LPS组相比,LPS+Fer-1组和LPS+14,15-EET组肺损伤评分及W/D值均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,LPS组BALF中总蛋白浓度、细胞数量明显升高,肺组织中IL-1β和MCP-1 mRNA表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与LPS组相比,LPS+Fer-1组和LPS+14,15-EET组BALF蛋白、细胞的数量及肺组织中IL-1β和MCP-1表达均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,LPS组ROS红色荧光信号明显增强,丙二醛、铁离子、COX2水平均显著升高,GPX4水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与LPS组相比,LPS+Fer-1组和LPS+14,15-EET组肺组织中ROS红色荧光信号明显减弱,丙二醛、铁离子、COX2水平显著降低,GPX4水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。LPS+Fer-1组和LPS+14,15-EET组以上各指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论14,15-EET可能通过抑制铁死亡减轻LPS诱导的小鼠ALI,发挥肺部保护作用。

子痫前期14,15-EET、15-HETE表达及妊娠结局分析

目的:研究妊娠期高血压疾病(hypertensive disorder of pregnancy,HDP)孕妇及正常孕妇孕晚期血清花生四烯酸代谢产物14,15-环氧二十碳烯酸(14,15-epoxyeicosatrienoic acid,14,15-EET)和15-羟二十烷四烯酸(15-hydroxyeicosateraenoic acid,15-HETE)的表达差异及其与妊娠结局的关系。方法:选取子痫前期及正常分娩各6例胎盘组织,采用液相色谱联合质谱分析胎盘组织中花生四烯酸19种代谢产物含量。选取妊娠期高血压疾病患者149例(其中妊娠期高血压53例,子痫前期51例,重度子痫前期45例)作为观察组,正常健康孕妇50例为对照组。采用酶联免疫吸附实验检测血清14,15-EET及15-HETE水平。将重度子痫前期分为不良妊娠结局组20例和正常妊娠结局组25例,比较两组血清14,15-EET及15-HETE水平。结果:子痫前期患者胎盘中14,15-EET、15-HETE及9-羟基十八碳二烯酸(9-hydroxy octadecadienoic acid,9-HODE)含量较对照组增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清14,15-EET及15-HETE水平重度子痫前期组高于子痫前期组、妊娠期高血压组和对照组,子痫前期组高于妊娠期高血压组和对照组,妊娠期高血压组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。重度子痫前期妊娠不良结局组血清14,15-EET及15-HETE水平高于妊娠正常结局组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:14,15-EET和15-HETE可能参与妊娠期高血压疾病的病理生理过程,重度子痫前期孕妇血清14,15-EET及15-HETE水平增高与妊娠不良结局有关。

14,15-EET对氧糖剥夺/再灌注模型中星形胶质细胞分泌BDNF及共培养体系中神经元凋亡的影响

目的通过外源性应用14,15-环氧二十碳三烯酸(14,15-EET)干预星形胶质细胞,探讨14,15-EET对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型中星形胶质细胞分泌脑源性神经营养因子(BDNF)及共培养体系中神经元凋亡的影响。方法采用氧糖剥夺法建立体外神经元与星形胶质细胞缺血损伤模型,于再灌注期使用外源性14,15-EET孵育星形胶质细胞,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同时间点星形胶质细胞分泌BDNF的变化,随后应用Transwell小室和神经元共培养,采用Tunnel染色检测神经元凋亡。结果与对照试剂组相比,14,15-EET可显著刺激OGD/R损伤后星形胶质细胞分泌BDNF,其作用时间可持续至撤药后至少48 h。此外,14,15-EET孵育的OGD星形胶质细胞可减少共培养体系中OGD神经元的凋亡,这种神经保护作用可被BDNF TrkB受体抑制剂k252a部分逆转。结论在OGD损伤的情况下,外源性应用14,15-EET可刺激星形胶质细胞释放BDNF,后者通过与共培养体系中的神经元TrkB受体相结合,激活下游信号通路,发挥神经元保护作用。

14,15-环氧化二十碳三烯酸对棕榈酸盐诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:观察14,15-环氧化二十碳三烯酸(14,15-EET)对棕榈酸盐(Palmitate)诱导的H9c2大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法:传代培养大鼠心肌细胞H9c2,分为正常组、溶媒组、Palmitate组、Palmitate+14,15-EET组,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡以及Western blot检测Bax,Bcl-2蛋白表达。结果:Palmitate的刺激可显著降低H9c2细胞的存活率并呈剂量依赖效应,14,15-EET呈剂量依赖性增加不同浓度Palmitate刺激后H9c2细胞存活率;Palmitate可诱导H9c2细胞凋亡,14,15-EET的作用显著抑制了Palmitate诱导的H9c2细胞的凋亡,联用胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)及蛋白激酶B(PKB或AKT)信号通路抑制剂显著抑制了14,15-EET的抗凋亡作用。Palmitate的诱导使Bax表达增加,Bcl-2表达减少;14,15-EET可下调Bax,上调Bcl-2的表达,联用ERK1/2及AKT信号通路抑制剂能显著抑制14,15-EET对Palmitate诱导后H9c2细胞Bax表达水平的下调及Bcl-2表达水平上调的作用(P均<0.05)。结论:Plamitate可诱导H9c2细胞凋亡,14,15-EET可通过下调Bax,上调Bcl-2的表达抑制Palmitate诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用。这些作用可由ERK1/2和AKT信号通路介导。