14,15-EET通过线粒体途径减轻烟雾诱导的肺上皮细胞凋亡

目的观察14,15-环氧二十碳三烯酸(14,15-EET)对香烟烟雾提取物(CSE)刺激肺上皮细胞凋亡的影响,并观察14,15-EET对线粒体膜电位、线粒体形态变化的影响,初步探讨其可能的机制。方法培养支气管肺上皮细胞(Beas-2B),实验分为对照组、CSE刺激组(加入5%CSE液)、CSE+14,15-EET组(1 mmol/L 14,15-EET预处理1 h后再加入5%CSE)及CSE+14,15-EET+14,15-环氧二十碳-5(Z)-烯酸(14,15-EEZE)组(1 mmol/L 14,15-EEZE预处理1 h后加入1 mmol/L 14,15-EET孵育1 h,最后加入5%CSE)。采用TUNEL方法检测肺上皮细胞细胞凋亡情况,应用JC-1染色的方法观察线粒体膜电位的变化,用透射电镜观察线粒体超微结构改变,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞DRP1及PINK1 mRNA含量变化。结果CSE刺激组较对照组[(23.80±6.54)%vs.(6.20±2.59)%]肺上皮细胞细胞凋亡指数明显增加,CSE+14,15-EET组[(13.00±3.54)%]较CSE刺激组凋亡指数明显降低,而CSE+14,15-EET+14,15-EEZE组[(22.20±7.53)%]较CSE+14,15-EET组细胞凋亡指数明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。CSE刺激组较对照组(2.28±0.54 vs.4.03±0.63)线粒体膜电位降低,CSE+14,15-EET组(3.22±0.20)较CSE刺激组粒体膜电位升高,而CSE+14,15-EET+14,15-EEZE组(2.13±0.27)较CSE+14,15-EET组线粒体膜电位明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CSE刺激组较对照组(2.09±0.25 vs.1、1.88±0.28 vs.1)DRP1及PINK1 mRNA表达水平明显增加,CSE+14,15-EET组(1.14±0.17、1.11±0.23)较CSE组DRP1及PINK1 mRNA表达水平显著降低,而CSE+14,15-EET+14,15-EEZE组(1.64±0.24、1.75±0.29)较CSE+14,15-EET组DRP1及PINK1 mRNA表达水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论14,15-EET可能通过线粒体途径减轻CSE诱导的肺上皮细胞凋亡。

14,15-EET通过TRPV4-SK_(Ca)复合物调节气管平滑肌收缩机制研究

目的探讨花生四烯酸细胞色素P450(CYP)表氧化酶代谢产物14,15-环氧化二十碳三烯酸(14,15-EET)对小鼠气管平滑肌收缩功能的影响及其机制。方法采用离体气管实验,通过运用特异性钙激活钾通道阻断剂和瞬时受体电位离子通道4(TRPV4)通道阻断剂,观察14,15-EET对卡巴胆碱引起的小鼠气管收缩的影响;采用免疫共沉淀实验检测TRPV4通道蛋白与小电导钙激活钾通道(SKCa)蛋白在小鼠气管平滑肌组织中的相互作用。结果与对照组相比,300 nmol/L 14,15-EET预处理小鼠气管后,卡巴胆碱引起的收缩显著减弱;大、中电导钙激活钾通道阻断剂Ib TX和TRAM34没有显著影响14,15-EET对卡巴胆碱引起的小鼠气管收缩的抑制效应;而SKCa阻断剂Apamin和TRPV4通道阻断剂RN-1734都分别显著阻断了14,15-EET对卡巴胆碱引起的小鼠气管收缩的抑制作用。免疫共沉淀结果显示TRPV4通道蛋白和SKCa通道蛋白可以彼此相互共沉淀。结论在小鼠气管平滑肌中,14,15-EET通过TPRV4-SKCa钙信号复合物调节气管平滑肌的收缩。

14,15-环氧化二十碳三烯酸对缺血性脑损伤神经元凋亡的影响

目的研究14,15-环氧化二十碳三烯酸(14,15-epoxyeicosatrienoic acids,14,15-EET)对缺血性大鼠脑损伤神经元凋亡的影响及干预机制。方法运用大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)方法建立大鼠脑缺血模型,实验分为假手术(sham)组、MCAO组、MCAO+sEH shRNA组、MCAO+14,15-EET组;应用氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)处理SY-5Y神经元细胞的方法建立脑缺血的细胞模型,实验分为正常(control)组、OGD组、OGD+sEH siRNA组、OGD+14,15-EET组;TTC法测定大鼠脑梗死面积;采用Longa进行大鼠神经功能评分;Nissl染色法检测大鼠脑组织神经元细胞数量;MTT法检测细胞存活率;TUNEL方法检测细胞凋亡;ELISA方法检测caspase-3的活性。结果与假手术组相比,MCAO大鼠脑梗死面积明显增加、神经功能损伤加重、神经元丢失增多,凋亡蛋白caspase-3活性增加;给予sEH shRNA可明显减少脑梗死面积、神经功能的损伤及神经元的丢失,并可抑制caspase-3的活性;然而,给予外源性的14,15-EET也可显著减少脑梗死面积、神经功能的损伤及神经元的丢失,同时可减少caspase-3的活性;与正常神经元细胞SY-5Y相比,OGD处理组中,细胞存活减少、凋亡增多,caspase-3活性增加;给予sEH siRNA可明显增加细胞存活,减少凋亡及caspase-3的活性;给予外源性的14,15-EET也可显著增加细胞存活,减少细胞凋亡、caspase-3活性。结论 14,15-EET可减少缺血性大鼠脑损伤神经元凋亡、抑制sEH活性,可能成为缺血性脑血管疾病的潜在治疗靶点。

CYP4X1的结构、分布、表达调控及功能的研究进展

CYP4X1是CYP4新的亚家族成员,也是重要的Orphans CYPs成员之一。其核苷酸序列同源性分析显示CYP4X1结构在跨物种间是高度保守的,这预示着它具有重要的生物学功能。CYP4X1广泛存在于人体各组织中,尤其选择性在脑内高表达,提示其可能在神经血管功能中扮演关键作用。CYP4X1的表达存在昼夜节律调节、明显的性别差异和年龄差异以及外源物可诱导其表达。CYP4X1重要的生物学功能之一是代谢内源性大麻素Anandamide生成唯一的单加成产物14,15-EET-EA以及参与脂肪的代谢。EET-EAs可能发挥着EETs相似的生物学功能。此外,CYP4X1与肿瘤的分级有关,其可能成为肿瘤治疗的潜在药物靶标。