血清14-3-3β蛋白联合呼出气一氧化氮及常规通气肺功能参数对儿童支气管哮喘的诊断效能

目的探讨血清14-3-3β蛋白联合呼出气一氧化氮(fractional exhaled nitric oxide,FeNO)及常规通气肺功能参数对儿童支气管哮喘(简称“哮喘”)的诊断效能。方法前瞻性纳入136例初次诊断为哮喘且处于急性发作期的儿童为哮喘组,选择同期85例健康体检儿童为健康对照组,比较两组血清14-3-3β蛋白浓度的差异,分析血清14-3-3β蛋白与临床指标的相关性,评估14-3-3β蛋白联合FeNO及常规通气肺功能参数对儿童哮喘的诊断效能。结果哮喘组血清14-3-3β蛋白浓度高于健康对照组(P<0.001)。血清14-3-3β蛋白与中性粒细胞百分比、血清总免疫球蛋白E呈正相关,与常规通气肺功能参数呈负相关(P<0.05)。联合指标交叉验证显示14-3-3β蛋白+FeNO+用力呼出75%肺活量的呼气流量占预测值百分比预测哮喘的曲线下面积为0.948,灵敏度和特异度分别为88.9%和93.7%,具有较好的诊断效能(P<0.001),模型的外推性最好。结论血清14-3-3β蛋白联合FeNO、用力呼出75%肺活量的呼气流量占预测值百分比可以显著提高儿童哮喘的诊断效能。

14-3-3β蛋白对胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的探讨14-3-3β蛋白对胶质瘤细胞系生物学行为的影响。方法应用分子生物学技术构建14-3-3β蛋白的真核表达质粒pc DNA 3.1(-)-14-3-3β及干扰质粒pc DNATM6.2-GW/Em GFPmiR-14-3-3β,应用MTT、集落形成、Transwell侵袭试验研究14-3-3β蛋白对人胶质瘤细胞株U251增殖及侵袭等生物学行为的影响。结果过表达14-3-3β能够明显促进U251细胞(人胶质瘤系)的侵袭和增殖过程;而应用干扰质粒抑制14-3-3β表达后,U251细胞的侵袭和增殖能力则受到显著抑制。结论 14-3-3β对于U251细胞(人胶质瘤系)蛋白的侵袭和增殖能力起到明确的促进作用,其在人类胶质瘤的发生和发展过程中可能也起到促癌作用。

14-3-3β在人脑星形细胞瘤中的表达及意义

目的探讨14-3-3β在人脑星形细胞瘤中表达与肿瘤病理分级的关系。方法采用免疫组化法检测14-3-3β亚型在80例人脑星形细胞瘤和10例正常脑组织标本中的表达水平。结果在正常脑组织中,14-3-3蛋白β亚型只表达于神经元胞体和突起,在胶质细胞中未见表达。β亚型在人脑星形细胞瘤的表达阳性率及免疫反应评分(IRS)分别为60%、1.86±1.83。Ⅰ～Ⅳ级脑星形细胞瘤中β亚型表达阳性率分别为40%(8/20)、50%(10/20)、70%(14/20)和80%(16/20)。Ⅰ～Ⅳ级脑星形细胞瘤中β亚型IRS分别为0.88±0.27、1.15±0.28、2.19±0.37和3.23±0.47。不同恶性级别的脑星形细胞瘤中,14-3-3蛋白β亚型的阳性表达率无显著差异,但其IRS有显著差异(P<0.05)。结论14-3-3β在人脑星形细胞瘤中高表达,且随着星形细胞瘤病理级别的增高而表达增强,14-3-3蛋白β亚型在脑星形细胞瘤的发生过程中具有重要作用。

良性前列腺增生上皮对间质细胞14-3-3β基因表达的影响

目的观察良性前列腺增生(BPH)上皮对间质细胞14-3-3β基因表达的影响。方法分离BPH组织的间质细胞与上皮细胞,构建上皮、间质细胞共培养模型。分别提取单独(对照组)、与上皮细胞共培养间质细胞(观察组)的mRNA,采用RT-PCR法检测14-3-3β mRNA。结果观察组14-3-3β mRNA的表达量为0.75±0.36,明显低于对照组的0.88±0.37,P<0.01。结论 BPH上皮细胞可抑制间质细胞14-3-3β基因的表达。

Kaposi肉瘤组织中14-3-3β,PI及AI的检测

目的探讨Kaposi肉瘤(Kaposi’s sarcoma,KS)组织中细胞增殖、细胞凋亡与14-3-3β蛋白表达的关系。方法应用免疫组化Envision二步法和原位细胞凋亡标记技术(TUNEL)对14例KS及12例健康人正常皮肤组织进行14-3-3β,细胞增殖指数(PI)及细胞凋亡指数(AI)的检测。结果14-3-3β蛋白在KS组织中的阳性率显著高于正常皮肤组织(P<0.01),其阳性反应程度在两组差异有显著性(P<0.01);KS组织中PI和AI均明显高于正常皮肤组织(P<0.01);KS组织中14-3-3β蛋白与PI呈正相关(r=0.671,P<0.01),与AI呈正相关(r=0.649,P<0.05)。结论细胞增殖与细胞凋亡均参与了Kaposi肉瘤的发生、发展。14-3-3β的过表达与KS瘤细胞的失控性增殖有关,KS细胞的凋亡与多种途径有关,并可能受到多种负向调节因子的作用。

新疆卡波氏肉瘤中c-myc、14-3-3β的表达

为探讨原癌基因c-myc、14-3-3β在新疆卡波氏肉瘤中的表达及意义,应用免疫组织化学Envision二步法检测新疆14例卡波氏肉瘤及对照组12例健康人正常皮肤组织内c-myc,14-3-3β的表达水平,结果显示:卡波氏肉瘤组织c-myc、14-3-3β蛋白均呈胞浆阳性,所有病例均呈阳性表达(14/14),阳性率均为100%;c-myc蛋白在正常皮肤组织中多数病例呈阴性表达(3/12),阳性率为25%,14-3-3β蛋白在正常皮肤组织中多数病例呈阴性表达(2/12),阳性率为16.7%,c-myc、14-3-3β蛋白在KS中的表达明显高于在正常皮肤组织中的表达,差异均有统计学意义(P<0.01)。表明:c-myc1、4-3-3β蛋白的异常表达在KS的发展过程中可能发挥了重要作用。

实时荧光PCR检测14-3-3β基因在新疆经典型Kaposi肉瘤中的表达

目的应用实时荧光PCR技术,检测14-3-3β基因在新疆Kaposi肉瘤(Kaposi’s sarcoma,KS)中的表达并分析其与KS发生发展的关系。方法2005至2006年收集新疆部分地区的7例经典型KS患者的肿瘤和正常皮肤组织,并经病理活检证实为KS。以SYBRGreenⅠ为荧光指示剂,GAPDH作内参照,建立检测14-3-3βmRNA表达的实时荧光PCR反应体系。分析14-3-3βmRNA的表达与KS发生发展的关系。结果①通过对实验参数的优化,适宜的反应条件为退火温度60℃,循环次数45次;②KS组14-3-3βmRNA的表达明显高于正常对照组(P<0.05)。结论采用SybrGreenⅠ的Smartcycler系统的实时荧光PCR方法检测14-3-3βmRNA快速、简便、稳定性好。14-3-3βmRNA的表达与KS的发生发展有重要关系。

14-3-3β蛋白与常见疾病关系的研究进展

14-3-3β蛋白(YWHAB)是14-3-3蛋白家族中含量最高的成员,参与生物体内多种信号转导、蛋白跨膜转运等过程。YWHAB可调节细胞增殖与生长,与肿瘤的发生、发展密不可分。YWHAB可与多种蛋白相互作用,与神经系统疾病的病理形成过程以及引起非酒精性脂肪肝等肝脏疾病的糖脂代谢异常有关。

14-3-3β对奶牛乳腺上皮细胞内质网应激相关基因以及泌乳效应的影响

以奶牛乳腺组织和正常生长的奶牛乳腺上皮细胞为研究对象,通过使用qRT-PCR检测青春期、泌乳期和退化期奶牛乳腺组织中14-3-3β(tyrosine 3-monooxygenase/tryptophan 5-monooxygenase activation protein beta)、eIF2α(eukaryotic translation initiation factor 2 subunit alpha)和ATF4(activating transcription factor 4)的mRNA表达水平以及Western Blot检测14-3-3β、p-eIF2α和ATF4的蛋白表达水平。结果表明,在泌乳期的奶牛乳腺组织中14-3-3β蛋白表达水平最低,而p-eIF2α蛋白表达水平最高。运用RNAi技术将乳腺上皮细胞中14-3-3β基因敲除,用毒胡萝卜素(TG,Thapsigargin)诱导细胞内质网应激,检测14-3-3β、eIF2α、ATF4、CHOP(DNA damage inducible transcript 3)、Caspase-3的mRNA表达水平的变化,同时检测β-酪蛋白的mRNA和蛋白水平的表达变化,以及用甘油三酯检测试剂盒和MTT细胞增殖检测试剂盒检测奶牛乳腺上皮细胞的乳脂含量、增殖情况的变化。结果表明,在14-3-3β敲除之后,eIF2α、ATF4、CHOP和Caspase-3的mRNA表达水平显著升高,而β-casein的mRNA和蛋白表达水平都显著降低,同时乳脂含量和细胞增殖率也显著下降。揭示14-3-3β参与奶牛乳腺上皮细胞内质网应激关键因子eIF2α和ATF4的调控并调节泌乳效应,进一步完善了14-3-3β与泌乳调控和内质网应激有关的分子机制。

稽留流产患者血清中缺氧诱导因子-1α、血红素氧合酶-1及14-3-3β的表达及临床意义

目的检测稽留流产患者血清中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血红素氧合酶-1(HO-1)及14-3-3β的表达情况,并探讨其临床意义。方法收集2019年1-12月高安市人民医院妇科住院部收治的稽留流产患者的血清标本74例,设为实验组;同期正常宫内早孕要求终止妊娠的患者血清标本58例,设为对照组。运用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组标本中HIF-1α、HO-1及14-3-3β的浓度水平,进行对比分析。结果实验组血清HIF-1α、HO-1及14-3-3β表达水平均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血清中HIF-1α、HO-1及14-3-3β水平能作为为进一步研究稽留流产提供一定线索。

14-3-3β蛋白特性及与卡波肉瘤的关系

酪氨酸3-加单氧酶/色氨酸5-加单氧酶激活蛋白(14-3-3蛋白)是高度保守的可溶性酸性蛋白家族,它们在细胞有丝分裂、生长、分化、增殖和凋亡等过程中起重要的调控作用。其中14-3-3β蛋白在卡波肉瘤组织中高表达,与其发生、发展相关。本文就14-3-3β蛋白的特性以及与卡波肉瘤的关系予以综述。

人类14-3-3β真核表达系统的构建

目的:构建人类14-3-3β基因真核表达载体并观察其转染的ECV-304细胞中14-3-3β的表达。方法:用基因重组技术将人类14-3-3βcDNA的开放阅读框克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,经酶切鉴定及测序分析并以脂质体介导转染ECV-304细胞,Western-blot检测其在细胞内的表达。结果:酶切鉴定及测序分析表明重组pcDNA3.1-14-3-3β表达质粒克隆成功,经Westem-blot检测14-3-3β蛋白在ECV-304细胞中获得表达。结论:以脂质体介导pcDNA3.1-14-3-3β质粒转染真核细胞为进一步研究14-3-3β基因的功能奠定了实验基础。

新疆经典型Kaposi肉瘤14-3-3β表达与细胞增殖、凋亡的关系

目的:探讨新疆经典型Kaposi肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)组织中14-3-3β蛋白表达与细胞增殖及细胞凋亡的关系。方法:应用免疫组织化学Envision二步法和原位细胞凋亡标记技术(TUNEL)对新疆10例经典型Kaposi肉瘤及对照组12例健康人正常皮肤组织进行14-3-3β表达、细胞增殖指数(proliferating index,PI)及细胞凋亡指数(apoptotic index,AI)的检测。结果:14-3-3β蛋白在KS组织中的阳性表达率显著高于在正常皮肤组织中的表达(P<0.001),其阳性反应程度在2组比较差异有统计学意义(t=14.661,P<0.01);KS组织中PI和AI均明显高于正常皮肤组织(t=5.427、2.712,P<0.05);KS组织中14-3-3β蛋白与PI、AI均呈正相关(r=0.770、0.879,P<0.01)。结论:14-3-3β的过表达与新疆经典型Kaposi肉瘤细胞的失控性增殖有关,KS细胞的凋亡与多种途径有关,并可能受到多种负向调节因子的作用。

14-3-3β蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨14-3-3β蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义。方法利用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测85例非小细胞肺癌14-3-3β蛋白的表达,并与临床病理因素及预后进行统计分析。结果14-3-3β蛋白在非小细胞肺癌中总的阳性表达率为47%,在肺鳞癌中的表达显著高于腺癌中的表达(57%vs32%,P<0.05);14-3-3β蛋白表达阳性患者及阴性患者中位生存期分别为56个月和42个月,二者有显著统计学差异(P<0.05);14-3-3β蛋白的表达与年龄、性别、吸烟状况、肿瘤大小、淋巴结状态、肿瘤分期无关。结论14-3-3β蛋白在非小细胞肺癌中存在阳性表达,14-3-3β蛋白在鳞癌中表达高于腺癌,且阳性表达者预后好于阴性表达者。

布地奈德对哮喘大鼠肺组织14-3-3蛋白及14-3-3β mRNA表达的影响

目的:观察14-3-3蛋白及14-3-3βmRNA在哮喘大鼠肺组织中的表达,探讨布地奈德的抗炎作用机制。方法:利用鸡卵白蛋白(OVA)复制哮喘模型,分别采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测肺组织14-3-3蛋白及14-3-3βmRNA的表达水平。结果:哮喘组肺组织14-3-3蛋白OD值为0.353±0.023,14-3-3βmRNA OD值为1.78±0.36,显著高于对照组0.211±0.028、1(P<0.01)。布地奈德组14-3-3蛋白OD值为0.310±0.024,显著低于哮喘组(P<0.01);14-3-3βmRNA(1.39±0.51)的表达水平与哮喘组(1.78±0.36)比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:哮喘急性期14-3-3蛋白及14-3-3βmRNA呈现过度表达,可能发挥促炎的作用,但这种表达可以被布地奈德抑制。

胡萝卜14-3-3基因家族的鉴定与分析

以胡萝卜为试材,采用分子生物学和生物信息学方法对胡萝卜14-3-3基因家族各成员进行鉴定,研究分析其理化特性、基因结构、保守结构域、复制事件、系统进化及顺式作用元件,以期为进一步研究胡萝卜14-3-3蛋白的功能提供参考依据。结果表明:胡萝卜中共鉴定到11个14-3-3基因,不均匀分布在6条染色体上,含有3~7个外显子,其中1对基因发生片段复制事件;编码的蛋白序列长度为236~264 aa,分子量为26.64~30.14 kD,等电点为4.65~5.33,具有7个Motif,全部为酸性非分泌型蛋白,定位在细胞核。系统进化分析显示,胡萝卜14-3-3蛋白分为ε类(3个)与非ε(8个)类2个亚族。此外,顺式作用元件分析结果表明,胡萝卜14-3-3基因含有大量激素与逆境胁迫相关元件。

烟粉虱MED隐种14-3-3基因克隆及时空表达谱分析

【目的】真核生物中,14-3-3蛋白是一类可与多种蛋白互作的调节蛋白,能够参与信号转导、免疫反应、生长发育和胁迫响应等。本研究旨在克隆烟粉虱Bemisia tabaci MED隐种的14-3-3基因的全长cDNA序列,了解该基因编码的蛋白特征和该基因的时空表达模式。【方法】使用RT-PCR技术克隆烟粉虱MED隐种的14-3-3基因全长cDNA序列,通过生物信息学软件和在线网站分析14-3-3基因的生物学特性;使用RT-qPCR测定14-3-3基因在烟粉虱MED隐种不同发育阶段(卵、1-4龄若虫和成虫)、雌雄成虫以及雌成虫头、胸和腹中的表达量。【结果】克隆并鉴定了烟粉虱MED隐种14-3-3基因的两个亚型:Bt14-3-3 epsilon(GenBank登录号:XM_019046102.1)和Bt14-3-3 zeta(GenBank登录号:XM_019057395.1),开放阅读框(ORFs)分别长771和744 bp,分别编码256和247个氨基酸,编码的蛋白是无跨膜螺旋区和信号肽的亲水性蛋白,其二级结构主要由α旋螺旋组成。系统发育树分析表明,Bt14-3-3 epsilon与褐飞虱Nilaparvata lugens、温带臭虫Cimex lectularius和茶翅蝽Halyomorpha halys的14-3-3 epsilon聚为一支,同源性较高;Bt14-3-3 zeta与褐飞虱的14-3-3 zeta的亲缘关系更近。RT-qPCR结果表明,Bt14-3-3 epsilon和Bt14-3-3 zeta在烟粉虱MED隐种的卵、雌成虫和雌成虫腹部中的表达量较高。【结论】明确了烟粉虱MED隐种14-3-3基因的两个亚型的全长序列、编码蛋白特征及时空表达特点,为后续研究14-3-3蛋白的分子功能奠定了基础。

GM130通过14-3-3ζ对卵巢癌细胞增殖的影响及机制研究

目的探讨高尔基体基质蛋白130(GM130)通过14-3-3ζ对卵巢癌细胞增殖的影响及可能机制。方法采用免疫组化法检测在20例正常卵巢上皮组织和42例卵巢上皮恶性肿瘤中GM130和14-3-3ζ的表达,分析二者相关性。采用Western blot和RT-PCR法检测卵巢癌SKOV3/A2780细胞株GM130和14-3-3ζ蛋白及其mRNA表达情况,筛选出高表达细胞株。采用免疫荧光染色法检测GM130与14-3-3ζ在卵巢癌细胞中的共表达情况。将设计好的重组表达质粒shRNA-GM130片段稳转进入卵巢癌细胞中,采用Western blot和RT-PCR筛选出降低GM130的最佳片段。细胞分为三组:空白组(WT)、对照组(NC)、低表达组(313),采用CCK法和流式细胞术分别检测各组卵巢癌细胞生殖情况及周期变化情况,采用Western blot法检测各组14-3-3ζ、GRASP65、P115及增殖相关蛋白表达水平。结果GM130和14-3-3ζ在卵巢恶性肿瘤组织中的表达水平高于正常卵巢组织(P<0.001)。在卵巢恶性肿瘤组织中,GM130和14-3-3ζ呈正相关关系(r=0.873,P<0.001)。GM130蛋白及其mRNA在SKOV3细胞中的表达量高于A2780细胞(P<0.05),14-3-3ζ蛋白及其mRNA在SKOV3细胞和A2780细胞中比较差异无统计学意义(P>0.05)。后续实验选用SKOV3细胞。免疫荧光共定位染色显示,GM130与14-3-3ζ主要在胞质表达,前者近核膜部分呈堆叠样表达量较高,后者胞核中表达较少,二者可能存在共定位关系。转染313组片段后,对GM130的抑制效果最好。转染质粒313组细胞增殖能力降低,细胞在G1期阻滞的数量增多,G2期阻滞数量减少,S期阻滞的细胞数量稍减少,GM130、14-3-3ζ、P115、Cyclin A、Cdc25A蛋白相对表达水平降低,P21蛋白相对表达水平升高(P<0.05)。结论抑制GM130可抑制卵巢癌细胞增殖,其机制可能与抑制14-3-3ζ表达,影响卵巢癌细胞周期有关。

菊芋14-3-3基因家族的鉴定及其对非生物胁迫响应的分析

[目的]本文旨在鉴定菊芋14-3-3基因家族成员并分析它们对高温、低温、盐和干旱胁迫响应的表达模式,为研究14-3-3蛋白功能及菊芋育种提供依据。[方法]采用克隆和生物信息学研究基因性质,采用RNA-seq数据分析和RT-qPCR研究基因对非生物胁迫的响应模式。[结果]从菊芋中克隆到14-3-3基因家族的10个成员HtGRF1—HtGRF10,GenBank登录号为OP132618—OP132627。根据进化关系将其分为2个亚家族:HtGRF1—HtGRF7属于非ε组,HtGRF8—HtGRF10属于ε组,通常形成同源或异源二聚体。组织表达分析表明,HtGRF2/3/6/9在芽、根、茎、叶中的表达丰度较高,HtGRF3/5/9在块茎发育过程中前高后低。综合分析根和叶中HtGRF对非生物胁迫响应时发现,HtGRF6表达水平在高温、盐和干旱胁迫下下降;HtGRF2/3/7/8/9表达水平在盐胁迫下下降,而在干旱胁迫下上升;HtGRF1表达水平在低温胁迫下上升;HtGRF4/5表达水平在干旱胁迫下下降;而HtGRF10表达水平变化不显著。[结论]菊芋14-3-3蛋白是一个高度保守的多基因编码家族,在菊芋的生长发育和适应复杂环境中起着重要作用。

14-3-3ɛ蛋白与肿瘤发生发展关系的研究进展

14-3-3ε蛋白也被称为YWHAE蛋白,是属于14-3-3蛋白家族的一种小相对分子质量的蛋白质。不同于蛋白激酶,14-3-3ε蛋白在细胞内并不参与蛋白质磷酸化反应,而是通过形成特殊的二聚体结构并与特定的磷酸化蛋白质结合,调节蛋白质配体的活性和亚细胞定位,从而参与多种细胞生命活动的调节。目前,在多种肿瘤中均已发现14-3-3ε蛋白的异常表达,异常表达的14-3-3ε蛋白对蛋白质配体的调节效应改变,进而影响蛋白质配体的亚细胞定位和酶活性,导致肿瘤细胞发生发展和侵袭转移。14-3-3ε蛋白的二聚体结构是其在肿瘤发生发展过程中发挥生物学功能的重要结构基础,破坏这一二聚体结构可有效靶向攻击肿瘤细胞。现基于国内外对14-3-3ε蛋白的研究成果,针对14-3-3ε蛋白的结构、作用机制及其在胃癌、肝癌、皮肤癌和其他多种肿瘤中发生发展过程中的影响及作用机制进行综述。