华支睾吸虫15/16ku蛋白的纯化与部分氨基酸顺序测定

目的 进一步证明华支睾吸虫成虫 15 / 16 ku蛋白 (Cs15 / 16 )用于诊断的免疫活性 ,同时测定其部分氨基酸顺序 ,便于今后对此蛋白的人工合成等分子生物学研究及其相关免疫学研究。 方法 用高效液相色谱技术 (HPL C)自华支睾吸虫粗抗原 (Clonorchis sinensis adultworm antigens,CAA)中提纯 15 / 16 ku蛋白 ,用酶联免疫吸附实验 (EL ISA)测定其抗原活性 ,并使用蛋白质自动测序仪测定其 N端部分氨基酸顺序。 结果 3个具有抗原活性的纯化样品 (H3、H11及H13)中 ,H13的诊断效果接近 CAA,敏感性达 90 % ,特异性 95 %。分别测获 3个纯样的 N端 15、14和 2 0个氨基酸残基 (aa) ,其中 H11的 N端 14个 aa与 H13的前 14个完全相同。 结论 进一步证明了 Cs15 / 16为有效的诊断抗原 ,测获的部分氨基酸顺序可为更深入的研究提供参考。