16 SrRNA基因聚合酶链反应检测细菌感染的研究

目的：探索快速可靠的检测细菌感染的新方法。方法：通过自行设计合成的细菌１６ＳｒＲＮＡ基因高度保守区引物，对２０ 种标准菌株、１２ 种２７ 株临床分离的细菌株、人基因组ＤＮＡ及巨细胞病毒进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。结果：对所测细菌株均获得３７１ ｂｐ 扩增产物，而与人基因组ＤＮＡ、巨细胞病毒无交叉阳性反应，ＰＣＲ最低能检测ｌｐｇ 大肠杆菌ＤＮＡ。结论：建立了用共同引物ＰＣＲ扩增以判断是否存在细菌感染的方法，该方法检测快速，敏感性和特异性高。

基于16SrRNA基因测序对腹膜透析患者肠道微生态环境特征分析研究

目的探讨基于16SrRNA基因测序对腹膜透析患者肠道微生态环境的特征分析。方法选取2019年2—9月赣州市人民医院收治的60例接受规律性腹膜透析的患者作为观察组,另选取2019年5月于本院进行常规体检的60名受试者作为对照组。对所有受试者进行粪便提取和检测。比较两组炎症指标水平[C反应蛋白CRP)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)],分析观察组16SrRNA基因测序结果和肠道微生态检测结果。结果观察组CRP、hs-CRP、IL-6水平均高于对照组,TNF-α水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。60例患者中,腹膜透析透出液培养检出革兰阳性菌41例,阳性率为68.3%;观察组革兰阴性菌22例(其中大肠埃希菌14例),革兰阳性菌38例(其中表皮葡萄球菌13例,头状葡萄球菌、唾液链球菌均5例)。结论16SrRNA基因测序可准确评估腹膜透析患者的肠道情况,健康人群肠道微生物的群落较复杂,但基本稳定,为肠道菌群结构和功能研究提供了参考依据。

基于16SrRNA测序分析高尿酸血症及尿酸性肾病肠道菌群特征分析

目的观察高尿酸血症(HUA)患者肠道微生物菌群的变化,分析HUA与肾脏损害的相关性。方法选择2022年6月至2023年6月HUA患者20例(HUA组)及尿酸性肾病患者20例(HN组)。另选择同年龄段的健康者20例为健康对照组(NC组),采集粪便及血液样本,采用16S rRNA测序技术对粪便样本进行分析,血液样本测定肾功能等临床指标。结果三组肠道菌群差异有统计学意义(P<0.05),HUA组与HN病组Alpha多样性分析及Beta多样性分析差异有统计学意义(P<0.05),菌群组成上,差异主要体现在酸杆菌门、疣菌门、硝化螺旋菌门、绿弯菌门、丹毒丝菌纲、芽孢杆菌纲、δ-变形菌纲、丹毒丝菌目、乳杆菌目、丹毒丝菌科。HUA及HN患者与尿酸值、血肌酐、尿素氮、肾小球滤过率(eGFR)存在相关性(P<0.05)。结论HUA、尿酸性肾病患者与健康人群相比存在菌群紊乱,而其各自又存在特有的肠道菌群特征。HUA及尿酸性肾病患者的肠道菌群与临床指标存在相关性。

基于16SrRNA序列分析脾虚证骨质疏松症患者肠道菌群分布特点

【目的】研究脾虚证骨质疏松症患者肠道菌群的分布特点。【方法】根据世界卫生组织(WHO)关于骨质疏松症的诊断标准以及中医脾虚证的辨证分型标准,于2022年1月至2023年9月从广州中医药大学顺德医院就诊人群中,选择26例骨量正常且无脾虚证的健康人为正常骨量组,23例骨量减少且符合脾虚证诊断的患者为脾虚证骨量减少组,69例骨质疏松且符合脾虚证诊断的患者为脾虚证骨质疏松组,共计118例。收集各组受试者的性别、年龄、身高、体质量、体质量指数(BMI)等相关信息,测定其骨密度及血清钙和碱性磷酸酶(ALP)水平,收集其粪便,测定粪便16SrRNA V3~V4区序列,并对测序结果进行物种注释,分析组间群落差异及骨密度与肠道菌群之间的相关性。【结果】(1)正常骨量组的肠道菌群相对丰度与脾虚证骨质疏松组存在显著性差异的有:厚壁门菌(t=2.490,P=0.016)、疣微菌门(t=2.180,P=0.003)、梭杆菌门(t=2.270,P=0.026),酸氨基球菌目(t=3.003,P=0.003)、乳杆菌目(t=3.150,P=0.002)、双歧杆菌目(t=7.248,P=0.001),粪杆菌属(t=2.810,P=0.006)、罗氏菌属(t=2.810,P=0.006)。(2)正常骨量组的肠道菌群相对丰度与脾虚证骨量减少组存在显著性差异的有:乳杆菌目(t=3.841,P=0.001)、双歧杆菌目(t=2.712,P=0.01),粪杆菌属(t=2.466,P=0.017)。(3)脾虚证骨质疏松组的肠道菌群相对丰度与脾虚证骨量减少组存在显著性差异的有:厚壁门菌(t=2.321,P=0.025)、拟杆菌门(t=2.393,P=0.020)、疣微菌门(t=3.109,P=0.031)。(4)Logistic回归分析结果显示:在脾虚证骨质疏松组中,乳杆菌目与腰椎骨密度呈显著负相关(R=0.355,P=0.003),双歧杆菌目与腰椎骨密度呈显著负相关(R=0.366,P=0.002);拟杆菌属与腰椎骨密度呈显著正相关(R=0.245,P=0.042),罗氏菌属与腰椎骨密度呈显著负相关(R=0.330,P=0.006)。【结论】肠道菌群中某些菌与脾虚证骨质疏松症患者骨密度有相关性,正常骨量组与脾虚证骨质疏松组的肠道菌群分布存在显著性差异,这为基于肠道菌群变化进行预防和治疗脾虚证骨质疏松症提供了一定理论依据。

16SrRNA基因测序技术在呼吸系统疾病与气道微生物中的研究进展

呼吸系统疾病是世界各地病死率较高的疾病之一,呼吸道病毒和细菌感染已经被确定为人口病死的主要原因。根据感染的区域不同,主要分为上呼吸道感染和下呼吸道感染两种类型。定植于健康人肺部的微生物群大多属于四个门类:厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门和变形菌门,它们与人体气道局部黏膜免疫系统相互作用共存,维持呼吸系统的免疫平衡与稳定。近年来,宏基因组学技术的发展为研究共生菌提供了可能性,随着SrRNA和基因测序技术的应用,微生物菌群与呼吸系统疾病之间的关系引起广泛的关注,也证明了呼吸系统疾病与呼吸道微生物菌群之间有着密不可分的关系,这不仅有助于呼吸系统疾病的诊断,而且为患者的治疗及预后提供方向。本文就目前关于呼吸系统疾病与气道微生物的相关研究在PubMed、中国知网、万方医学和维普医学上检索“呼吸系统疾病、16SRrRNA、慢性阻塞性肺疾病、哮喘、慢性咳嗽、囊性纤维化、气道微生物”等关键词,对相关文献进行回顾和总结并作简要综述。

基于16S rRNA基因测序技术探讨湿疹儿童肠道微生态的变化及苡仁祛湿汤的调节作用

目的:探讨湿疹儿童肠道微生态的变化及苡仁祛湿汤的调节作用。方法:选取30例湿疹患儿作观察组,予苡仁祛湿汤口服治疗2周,另随机选择同期健康体检儿童30例为对照组。通过16S rRNA高通量测序技术检两组患者干预前后粪便菌群的物种构成及相对丰度。结果:湿疹患儿与健康儿童β多样性存在差异,LEfSe分析显示,湿疹患儿与健康儿童瘤胃球菌、梭菌科、埃希-志贺菌、乳杆菌等10个显著差异物种(均P<0.05)。干预前后菌群多样性无差异性,拟杆菌门及拟杆菌属有所增高(均P>0.05),Butyricicoccus及Trichococcus相对丰度高于干预前(均P<0.05)。结论:湿疹儿童与健康儿童的肠道菌群构成存在差异,苡仁祛湿汤可上调肠道拟杆菌门、拟杆菌属、Butyricicoccus及Trichococcus的相对丰度,减轻肠道炎症。

靶向代谢组学联合16SrRNA基因测序分析地黄炮制前后对肾阴虚证大鼠肠道菌群的影响

目的探讨地黄炮制前后对肾阴虚证大鼠肠道菌群的影响。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组、益生菌组(0.35 g·kg^(-1))、熟地黄高/中/低剂量组(3.5、1.75、0.875 g·kg^(-1))、生地黄高/中/低剂量组(3.5、1.75、0.875 g·kg^(-1)),每组9只。除空白组外,其余各组大鼠均肌肉注射地塞米松磷酸钠注射液(0.35 mg·kg^(-1)),每日1次,持续21 d。于造模第7天开始灌胃给药,每日1次,连续给药14 d。采用HE染色法观察肾上腺组织病理变化;ELISA法检测大鼠血清环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(c GMP)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺激素释放激素(ACTH)、皮质酮(CORT)水平;采用靶向代谢组学方法联合16Sr RNA基因测序检测各组大鼠粪便中短链脂肪酸的含量及肠道菌群多样性变化。结果(1)与空白组比较,模型组大鼠第7、14、21天体质量明显下降(P<0.05,P<0.01);血清中c AMP、CRH、ACTH、CORT含量及c AMP/c GMP比值均显著升高(P<0.01),c GMP含量显著降低(P<0.01);肾上腺皮质变薄,皮质各层边界不清。与模型组比较,熟地黄给药组大鼠第21天的体质量均明显增加(P<0.05,P<0.01),大鼠血清中c AMP、CRH、ACTH、CORT含量及c AMP/c GMP比值均明显降低(P<0.05,P<0.01),c GMP含量明显升高(P<0.05,P<0.01);生地黄给药组大鼠体质量变化不明显(P>0.05),生地黄高剂量组大鼠血清中CRH、CORT含量明显降低(P<0.01),生地黄中剂量组大鼠血清中ACTH含量明显降低(P<0.05);各给药组大鼠肾上腺皮质均有所改善,尤其熟地黄给药组大鼠肾上腺皮质各层增厚明显,改善作用优于生地黄组。(2)与空白组比较,各组间覆盖度指数(Coverage)的差异无统计学意义(P>0.05),各组覆盖度良好;模型组丰度指数(Sobs、Ace、Chao)、多样性指数(Shannon)显著升高(P<0.01),Simpson指数显著降低(P<0.01)。与模型组比较,熟地黄中、高剂量组的Sobs指数明显降低(P<0.05),熟地黄给药组及生地黄高剂量组的Chao指数显著降低(P<0.05,P<0.01),熟地黄高剂量组的Simpson指数明显升高(P<0.05)。生地黄对肾阴虚大鼠肠道微生物群落丰富度和多样性的改变较小,而熟地黄可以更好地维持肾阴虚大鼠肠道微生物群落丰富度和多样性的稳定。(3)与空白组比较,模型组大鼠粪便中的厚壁菌门丰度显著降低,拟杆菌门、放线菌门的丰度显著升高;乳杆菌属的丰度显著降低(P<0.01),norank_f__Muribaculaceae及Bifidobacterium的丰度显著升高(P<0.01)。与模型组比较,益生菌组和熟地黄高剂量组的菌群丰度恢复趋势与空白组更加相近,显示其对菌群比例的调节作用最佳;各给药组的乳酸菌丰度均有所上升,其中益生菌组显著升高(P<0.01);norank_f__Muribaculaceae及Bifidobacterium丰度均有所下降,其中益生菌组及熟地黄中、高剂量组显著降低(P<0.01),效果明显优于生地黄组。各组样本的COG功能主要集中于氨基酸转运与代谢,碳水化合物转运与代谢,翻译、核糖体结构与生物发生,复制、重组和修复等方面,但各功能在不同组间的丰度信息不同,可能是由于肠道菌群失调导致的差异。(4)与空白组比较,模型组大鼠粪便中的乙酸、丁酸、丙酸、己酸水平明显降低(P<0.05,P<0.01),异丁酸水平明显上升(P<0.01)。与模型组比较,益生菌组及熟地黄低、中、高剂量组大鼠粪便中的乙酸、丁酸、丙酸水平明显升高(P<0.05,P<0.01),异丁酸水平明显降低(P<0.05,P<0.01);生地黄给药组的上述指标虽然有所改善,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论地黄经炮制后对肾阴虚证大鼠治疗作用增强,可能与其对肠道菌群的调节作用有关。

16SrRNA高通量测序技术分析肾移植患者唾液菌群分布特征

目的 以高龋均患者唾液菌群为参照,应用高通量测序技术分析肾移植患者唾液菌群分布情况。方法 选取9名肾移植术后1年的患者为实验组,9名高龋均的患者(DMFT≥6)为对照组,采集唾液,提取DNA进行PCR扩增、测序,分析两组唾液菌群结构及多样性差异。结果 肾移植组患者与高龋均组患者唾液菌群有相似的多样性指数,指数比较差异无统计学意义(P> 0.05)。肾移植组与高龋均组患者唾液菌群均具有特定的优势菌,且保持相对稳定性,在相对丰度上存在差异,其中厚壁菌门(Firmicutes),梭杆菌门(Fusobacteria),纤毛菌属(Leptotrichia spp.),坦纳菌属(Tannerella spp.),梭菌属(Clostridium spp.)在两组间具有显著差异。结论 肾移植患者口腔微生物群落结构与高龋均人群存在差异。

基于16S rRNA技术探讨健脾祛痰法调节血脂异常患者肠道菌群变化特征

目的通过观察健脾祛痰法对脾虚痰浊型血脂异常患者的血脂水平、中医证候积分的影响,分析高脂人群采用健脾祛痰法治疗前后肠道菌群的结构变化,检测精炼方颗粒剂中绞股蓝皂苷A、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷的含量,以明确健脾祛痰法降脂的临床疗效,探究健脾祛痰法发挥临床疗效的有效药理成分。方法在辽宁中医药大学附属医院纳入脾虚痰浊血脂异常受试者共计120例,按照就诊顺序随机分为模型组、治疗组,每组60例。两组均予健康宣教,治疗组予精炼方颗粒剂冲服,疗程为2个月。采用全自动生化分析仪检测所有受试者血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,用中医证候积分量表评定患者中医证候疗效,16S rRNA高通量测序技术检测受试者粪便标本肠道菌群的结构变化。结果治疗组患者血脂水平、中医证候积分较治疗前明显改善,血脂疗效、中医证候总有效率显著优于模型组。治疗组患者用药后肠道菌群样本间差异明显,各分类水平物种组成比例发生变化。用药后肠道中的肠杆菌目(Enterobacteriales)减少,肠道菌群平衡有所恢复。结论健脾祛痰法能够显著降低血脂异常患者TC、LDL水平,改善中医证候,恢复肠道菌群平衡,并通过绞股蓝皂苷A、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷等活性成分发挥降脂作用。

基于16S rRNA测序分析阻塞性睡眠呼吸暂停患者肠道靶标菌群的变化

目的分析阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)患者和健康人群肠道菌群的差异,探讨肠道菌群在OSA发病中的作用及意义。方法随机纳入2022年1月~12月就诊于本院诊断为OSA的患者39例作为OSA组,健康志愿者20例作为对照组。收集两组人群的粪便标本,通过16SrRNA高通量测序分析其微生物组成,分析两组人群肠道菌群之间的Alpha多样性、Beta多样性、物种差异与标志物种和差异生物功能代谢通路功能预测分析。结果Alpha多样性分析显示,OSA组的物种多样性指数Shannon和Simpson、物种丰度指数Observedspecies及菌群均匀度指数Pielou均低于对照组(P<0.05);Beta多样性分析显示,两组间群落结构存在差异(P<0.05)。OSA组肠道菌群群落结构上与对照组存在差异,潜在致病菌属如假单胞菌属、巨单胞菌属等菌群丰度增加(P<0.05)。LEfSe分析结果显示,与对照组相比,OSA组假单胞菌属、巨单胞菌属、梭杆菌属丰度升高(P<0.05)。关联网络分析结果显示,影响宿主稳态的为差异标志菌群;随机森林分析和ROC曲线结果显示,假单胞菌属是具有重要鉴别意义的生物标志菌属。差异代谢通路预测功能显示,维持肠道菌群稳态起主要作用功能的是生物合成功能,假单胞菌属参与了芳香族生物胺降解和酮葡萄糖酸代谢。结论OSA患者存在肠道菌群紊乱,肠菌中假单胞菌属可能通过参与物质代谢影响OSA发生发展,可望作为防治OSA的潜在肠菌靶标。

基于16S rRNA测序技术分析桶装水中野生铜绿假单胞菌的系统发育

目的以铜绿假单胞菌16S rRNA为研究对象,利用16S rRNA测序分析技术构建系统发育树,研究湖南省内28株野生水源性铜绿假单胞菌的系统发育。方法收集28株野生阳性铜绿假单胞菌,利用27F/1492R通用引物进行16S rRNA PCR扩增,将胶回收产物进行测序,测序结果利用MEGA 11.0构建系统发育树,并进行遗传距离计算。结果28株铜绿假单胞菌可分为3支,一株来源于永州的菌株单独为一支,3株分别来源于常德、永州、郴州的菌株聚为一支,其余24株聚为一支;28株铜绿假单胞菌平均遗传距离为0.0064。结论28株野生铜绿假单胞菌之间具有高度同源性,通过实验进一步完善了水源性铜绿假单胞菌溯源数据库,为桶装水铜绿假单胞菌污染源监测提供了理论依据。

中国对虾线粒体16SrRNA基因序列分析(英文)

中国对虾(Fenneropenaeuschinensis)是我国海洋渔业重要的经济虾种之一。本研究以相应引物对野生群体和人工培育第1代、第4代、第5代、第6代群体(CP1、CP4、CP5、CP6)的各2个个体的线粒体16SrRNA基因片段进行了PCR扩增和序列测定分析。分析结果表明,测得的16SrRNA基因片段长为520bp,10个中国对虾个体间无碱基差异,其A、T、G、C含量分别为171bp(32.88%)、176bp(33.85%)、104bp(20.00%)、69bp(13.27%),AT含量明显高于GC含量。利用其中长度为413bp的同源序列,以环斑鼓虾(Alpheusarmillatus)为外群探讨了对虾科(Penaeidae)中的对虾属、美对虾属、明对虾属、囊对虾属和滨对虾属5个属(Penaeus,Farfantepenaeus,Fenneropenaeus,Marsupenaeus,Litopenaeus)12种对虾间的系统关系。以NJ法构建的分子系统树显示可将以上12种虾类分为两个大群:中国对虾和斑节对虾先聚到一起后与日本对虾聚成一大群;美对虾属、滨对虾属个体各聚成1支后聚成一大群,最后与中国对虾等聚到一起。同时可见,小褐美对虾(F.subtilis)与保罗美对虾(F.paulensis)、南方滨对虾(L.schmitti)与白滨对虾(L.setiferus)种间的亲缘关系较近。

新疆部分地区鼠类无形体和埃立克体的调查及16srRNA序列分析

目的调查新疆部分地区鼠类携带无形体和埃立克体的状况。方法对新疆博乐、石河子、乌鲁木齐3个地区捕获的鼠类(沙鼠、褐家鼠、田鼠)401份,采集肺脏、脾脏提取总DNA,通过巢式PCR扩增无形体和埃立克体16SrRNA片段并与GenBank中相应基因序列进行比对分析。结果在沙鼠样本中扩增到无形体和埃立克体16SrRNA片段,而在其它两种鼠类未扩增到目的片段,扩增片段经测序、比对后确定为Anaplasma phagocytophilum和Erhlichia chaffeenisis。在312份沙鼠检测样本中,检出无形体17份,占5.45%;埃立克体48份,占15.38%;无形体和埃立克体均检出12份,占3.84%。结论新疆地区存在无形体和埃立克体病原,其主要存在与荒漠和半荒漠地带生存的沙鼠中,新疆存在这两种病原的自然疫源地,而且两种病原可以共同存在于同一宿主动物。

中国对虾16SrRNA基因序列多态性的研究

利用PCR技术扩增获得中国对虾 (Penaeuschinensis)线粒体DNA的 16SrRNA基因片段 ,通过测定该基因片段的序列 ,分析了取自我国烟台、长岛、青岛近海和宁波养殖的 17只中国对虾遗传多态性。结果发现 ,不同地理种群存在丰富的DNA序列多态性 ,17只个体具有 17种基因型 ,在扩增的长为 5 2 3bp的基因片段中 ,共检测到 3 7个多态性核苷酸位点 ( 7 0 7% )。UPGMA法构建的分子系统树表明不同地理种群中国对虾存在一定程度的遗传分化 ,长岛群体与烟台群体遗传关系较近 ,宁波群体次之 ,青岛群体为相对独立的一支。

3个不同群体罗氏沼虾线粒体16SrRNA基因序列分析及遗传差异

利用PCR技术扩增获得罗氏沼虾线粒体16SrRNA基因的部分片段,通过序列测定和用限制性内切酶MboI、AluI和TaqI分别对上述PCR产物进行限制性片段长度多态分析(RFLP),分析了取自缅甸引进种子代、广西养殖群体及江苏养殖群体3个不同群体罗氏沼虾的遗传差异。结果表明:在3个群体间序列同源性对比无变异,PCR-RFLP未发现有片段多态性,3个群体间不存在遗传结构差异。可能表明这3个群体的罗氏沼虾起源同一个种群,且分化较低。

我国北方蜱中人粒细胞埃立克体16SrRNA基因的检测

本文应用人粒细胞埃立克体病 ( HGE)的病原体的 1 6S r RNA基因序列的特异引物对采自我国北方地区的一些蜱标本进行扩增 ,首次从内蒙古大兴安岭采集的全沟硬蜱、森林革蜱和嗜群血蜱 ,以及从新疆精河采集的全沟硬蜱和草原革蜱中扩增出该病原体的 1 6S r RNA基因片段。所测出的 967bp序列与美国 HGE株 ( Gen Bank U0 2 52 1 )的同源性为 1 0 0 %

中国沿海鳓不同地理群体16SrRNA基因的遗传变异分析

为阐述过度捕捞后中国现存鳓(Ilisha elongata)资源的种质状况,采用16SrRNA基因测序技术对青岛、舟山、厦门和广州4个鳓地理群体的种群结构及遗传变异进行研究。通过对4个鳓群体共45个个体的线粒体16SrRNA基因进行测序,获得1个长度为657bp的同源序列。45个个体中共检测到32个多态位点,多态位点比例达4.88%,其中插入或缺失位点10个;45个个体中检测出20个单倍型,单倍型多样性指数(H)达0.812,核苷酸多样性指数(Pi)达0.0031,平均核苷酸差异数(K)达2.016。结果表明,中国现存鳓种群仍具较高的遗传多样性水平。对4个群体的遗传结构进行检测表明,青岛群体与其他3个群体间存在显著的遗传分化,两个类群间存在1个固定位点的核苷酸差异,分化系数(Fst)达0.3852(P<0.01),基因流(Nm)为0.7980;而舟山、厦门和广州这3群体内部则无显著遗传分化(P>0.01);AMOVA检测显示,69.48%的遗传差异存在于群体内部,而30.52%的遗传差异存在于群体间;聚类分析结果和单倍型网络关系图也证实上述鳓群体的地理分化。推测青岛群体的分化可能与晚更新世以来频繁的海平面变化有关。

山东莱洲湾湿地长角血蜱无形体16SrRNA检测分析

目的调查山东莱洲湾湿地优势硬蜱——长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)人粒细胞无形体病原携带及分子流行病学特征。方法 2010年5月至10月,对莱洲市第一人民医院ICU及感染科收治的26名无形体确诊病例及6名可疑病例家居环境采集游离蜱114只,家畜山羊、牛及狗体表寄生硬蜱456只,分类鉴定后分组研磨提取DNA,巢氏PCR扩增无形体16SrRNA基因并测序及序列分析。结果 69组样本PCR扩增阳性率为43.5%。序列进化分析显示无形体病原主要分3个基因群,T1优势群占检出序列的60%,该群与我国安徽无形体院内感染患者及山东沂源地区发热患者检出序列归为一类。这一群在我国周边国家日本、韩国及德国野生动物及媒介蜱中均有检出。结论东北亚环西太平洋鸟类迁徒的重要"中转站"及越冬、栖息和繁殖地—莱洲湾湿地长角血蜱存在较高无形体病原体携带率,加强当地临床发热病人无形体鉴别诊断并采取必要防控措施具有重要临床及公共卫生意义。

慢性肝脏疾病患者肝组织中螺杆菌相关基因16SrRNA的检测

目的对慢性肝脏疾病患者肝组织中螺杆菌(Hp)基因16SrRNA进行检测,了解慢性肝脏疾病患者肝组织中Hp感染状况,进一步揭示Hp感染与慢性肝脏疾病的关系。方法(1)收集肝穿活检和手术治疗肝脏组织标本,其中正常人、慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者肝组织各30例,经病理证实。(2)应用PCR扩增Hp16SrRNA基因及测定序列。结果肝组织16SrRNA基因PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳,于紫外检测仪下均可见16SrRNA基因阳性扩增带为109bp;18例原发性肝癌标本检出Hp16SrRNA基因,阳性率60.0%;14例肝硬化标本检出检出Hp16SrRNA基因,阳性率47%;正常人、慢性肝炎组均无检出检出Hp16SrRNA基因。肝组织螺杆菌16SrRNA测序对比分析,与Hp16SrRNA片段的基因有98.8%同源性。结论慢性肝脏疾病患者肝组织中存在Hp,Hp感染与肝癌可能存在相关性。

线粒体16srRNA和ND4基因在种属鉴定中的应用研究

目的 构建一种用于种属鉴定的线粒体DNA（mtDNA）16srRNA和ND4基因荧光标记复合扩增检测体系。方法 利用引物设计软件（Primer 5）对两个mtDNA序列ND4基因和16srRNA基因设计两对引物，每对引物中的一条在5’端标记荧光素（6-FAM）。按传统复合扩增技术建立复合扩增体系，用ABIPRISM 310基因分析仪对产物进行分析。结果 人类DNA扩增产物出现两个峰，片段大小分别为110bp的人类特异片段和149bp的人与动物共有片段，而动物DNA扩增产物出现一个峰，片段大小为149bp。对30个实验室存放5～15年的陈旧人血痕也能明确判断其种属来源。结论 该体系可以明确区分人源性生物检材与其它常见动物样本，对实验室长期存放的陈旧检材也具有较好的检测能力。