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基于16S核糖体DNA基因测序技术探讨分消走泄法对支气管哮喘大鼠肠道菌群的影响
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作者 刘璐佳 杨阳 +1 位作者 景伟超 王有鹏 《环球中医药》 CAS 2024年第2期223-231,共9页
目的 采用16S核糖体DNA(16S ribo-somal DNA,16S rDNA)基因测序技术,研究白果温胆汤对支气管哮喘大鼠肠道菌群结构的影响。方法 将72只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组及白果温胆汤高、中、低剂量组,每组12只。以卵... 目的 采用16S核糖体DNA(16S ribo-somal DNA,16S rDNA)基因测序技术,研究白果温胆汤对支气管哮喘大鼠肠道菌群结构的影响。方法 将72只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组及白果温胆汤高、中、低剂量组,每组12只。以卵清蛋白致敏并激发制备哮喘大鼠模型。实验过程中观察记录各组大鼠的精神状态、食量、饮水量、呼吸及毛发光泽等情况的变化;观察各组大鼠肺组织HE染色病理改变结果;采用16S rDNA Miseq高通量测序观察肠道菌群情况,通过OTU聚类分析方法、Alpha多样性分析方法、Beta多样性分析方法分析肠道菌群多样性,通过SPSS 25.0分析比较不同干预方法下大鼠肠道菌群结构的差异。结果 (1)行为学观察结果:白果温胆汤高、中、低剂量组及地塞米松组大鼠精神状态、饮食饮水量、毛发、呼吸均有不同程度的改善。(2)模型组大鼠肺气管上皮破损,肺间隔增厚,炎性细胞增多。各治疗组与模型组比较,均有一定改善。(3)造模后,与空白组比较,模型组大鼠肠道菌群丰度Chao1指数及Observed_species指数、Faith’s PD指数、Pielou_e指数、Shannon指数均有下降趋势;地塞米松组大鼠肠道菌群各指数均有明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与地塞米松组比较,白果温胆汤低、中剂量组Pielou_e指数、Shannon指数均有明显上升,差异均具有统计学意义(P<0.05),白果温胆高剂量组Chao1指数、Observed_species指数、Faith’s PD指数、Shannon指数均有明显上升,差异均具有统计学意义(P<0.05);与白果温胆低剂量比较,白果温胆汤高剂量组Faith’s PD指数有明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)经过Beta多样性分析,造模后大鼠肠道菌群空白组与模型组、空白组与地塞米松组、模型组与各治疗组、地塞米松组与白果温胆汤各剂量组、白果温胆汤低剂量组与白果温胆汤中、高剂量组之间具有差异性(P<0.05)。(5)在科水平上,模型组大鼠乳杆菌科和梭菌科相对比例升高,脱硫弧菌科、消化链球菌科、瘤胃球菌科和拟杆菌门S24-7菌科相对比例降低。结论 白果温胆汤可改善哮喘大鼠肺组织炎症浸润,其作用机制可能与其恢复肠道菌群的多样性、丰富度及调节菌群结构有关。 展开更多
关键词 哮喘 分消走泄法 白果温胆汤 肠道菌群 16s核糖体dna
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基于1H-NMR和16S rDNA测序技术探讨针与灸不同刺激方法对大鼠结肠代谢物和肠道菌群的影响 被引量:4
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作者 曹思慧 陈琳 +3 位作者 何灏龙 李祖强 刘琼 刘密 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1620-1633,共14页
目的:观察针刺与艾灸两种不同干预方法对健康SD大鼠结肠代谢物和肠道菌群调节作用的差异。方法:将33只健康SD大鼠随机分为空白组、针刺组和艾灸组,每组各11只。空白组大鼠仰卧固定在治疗台上,不予任何干预,连续7 d;针刺组以不锈钢针灸... 目的:观察针刺与艾灸两种不同干预方法对健康SD大鼠结肠代谢物和肠道菌群调节作用的差异。方法:将33只健康SD大鼠随机分为空白组、针刺组和艾灸组,每组各11只。空白组大鼠仰卧固定在治疗台上,不予任何干预,连续7 d;针刺组以不锈钢针灸针针刺大鼠双侧上巨虚穴和天枢穴,留针15 min,连续干预7 d;艾灸组采用温和灸,将艾条置于大鼠双侧上巨虚穴和天枢穴上方3~5 cm处,使皮肤温度维持在(45±5)℃之间,每次15 min,连续干预7 d。干预结束后,取各组大鼠结肠组织和粪便样品,运用质子核磁共振(proton nuclear magnetic resonance,1H-NMR)技术检测各组大鼠结肠组织代谢物,分析并筛选大鼠结肠组织差异代谢物;16S核糖体DNA(ri-bosomal DNA,rDNA)测序技术检测各组大鼠肠道菌群丰度和多样性的变化情况,并比较差异菌群。结果:代谢组学检测结果显示,与空白组相比,针刺组大鼠结肠组织中代谢物组氨酸、缬氨酸和丁酸含量显著上升(P<0.05),艾灸组大鼠结肠组织中代谢物胆碱和肌醇含量显著上升(P<0.05或P<0.01);与针刺组相比,艾灸组大鼠结肠组织中代谢物甲酸和乙酸含量显著上升(P<0.05)。菌群多样性分析显示,与空白组相比,针刺组和艾灸组大鼠肠道菌群的Chao1指数和基于丰度的覆盖估计值(abundance-based coverage estimator,ACE)均显著上升(P<0.05);在菌群门和属水平上,针、灸干预后部分有益菌丰度上升,部分条件致病菌丰度下降。结论:针刺与艾灸两种不同干预方法对健康SD大鼠结肠代谢物和肠道菌群的调节存在差异性:针刺更擅长调节酸类代谢失衡所导致的胃肠道疾病,艾灸更适用于脂质代谢异常引发的代谢类疾病;针刺与艾灸对肠内微生态环境具有良性调节作用;针刺能通过影响肠道菌群的结构和丰度缓解胃肠道疾病。 展开更多
关键词 针灸 代谢组学 肠道菌群 质子核磁共振 16s核糖体dna测序
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16S核糖体DNA宏基因组测序中细菌核酸提取方法的比较研究 被引量:2
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作者 王伟 王玉琢 +7 位作者 舒鹏 米志强 安小平 裴广倩 刘文丽 袁文俊 史套兴 童贻刚 《生物技术通讯》 CAS 2015年第4期551-555,共5页
目的:探究细菌核酸提取方法对16S核糖体DNA(r DNA)宏基因组测序的影响。方法:分别采用TRIzol提取、试剂盒提取、溶葡酶+试剂盒提取、超声波+试剂盒提取、超声波+溶葡酶+试剂盒提取、匀浆+试剂盒提取、匀浆+溶葡酶+试剂盒提取... 目的:探究细菌核酸提取方法对16S核糖体DNA(r DNA)宏基因组测序的影响。方法:分别采用TRIzol提取、试剂盒提取、溶葡酶+试剂盒提取、超声波+试剂盒提取、超声波+溶葡酶+试剂盒提取、匀浆+试剂盒提取、匀浆+溶葡酶+试剂盒提取共7种方法对模拟样本进行细菌核酸提取,特异性地扩增16S r DNA的V1~V2高变区,测序后分析模拟样本中各种细菌的含量和相对分布。结果:超声波处理结合试剂盒提取方法中不同细菌数据分布及含量都相对均匀,是一种广谱、高效的细菌核酸提取方法。结论:超声波处理结合试剂盒提取方法适用于细菌宏基因组测序中样本核酸的提取。 展开更多
关键词 16s核糖体dna 核酸提取 基因组测序
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油菜内生细菌16S核糖体DNA的RFLP分析 被引量:13
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作者 杨瑞先 孙广宇 +1 位作者 张荣 陈立军 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期606-609,共4页
植物内生细菌定殖在植物组织内部但不引起明显的病害症状。从健康油菜植株的不同器官中分离到大量内生细菌,这些细菌菌落形态存在明显的差异,表明油菜组织中存在大量内生细菌,且类群丰富。分离到的122株内生细菌根据菌落形态可以划分为3... 植物内生细菌定殖在植物组织内部但不引起明显的病害症状。从健康油菜植株的不同器官中分离到大量内生细菌,这些细菌菌落形态存在明显的差异,表明油菜组织中存在大量内生细菌,且类群丰富。分离到的122株内生细菌根据菌落形态可以划分为35类;利用细菌通用引物对16S核糖体DNA进行扩增,获得约1.5kb片段,分别用内切酶HaeⅢ和MspⅠ对扩增产物进行限制性酶切,产生不同的酶切图谱,根据酶切图谱聚类分析结果,所有供试菌株被归为39类,这一结果从遗传上显示油菜内生细菌类群的多样性。两种方法归类结果比较发现菌落特征所反映的信息量有限,只能作为初步的参考指标,核糖体DNA的限制性片段长度多态性分析快速、准确,可以作为油菜内生细菌多样性分析的一种有效方法。 展开更多
关键词 多样性 16s核糖体dna 限制性片段长度多态性
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16S核糖体DNA Amplicon测序法分析2型糖尿病患者口腔微生物多样性 被引量:7
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作者 李宗泽 赵泽 +3 位作者 张文菲 陶荣 孙雪飞 田宇 《转化医学杂志》 2017年第3期151-156,共6页
目的探讨2型糖尿病患者口腔微生物多样性及结构的差异。方法采集23例2型糖尿病患者与23名正常人的唾液与龈上菌斑样本,提取口腔菌群的总DNA,利用16S核糖体DNA(16S ribosome DNA,16Sr DNA)Amplicon测序法进行测序,使用Pandaseq、Qiime等... 目的探讨2型糖尿病患者口腔微生物多样性及结构的差异。方法采集23例2型糖尿病患者与23名正常人的唾液与龈上菌斑样本,提取口腔菌群的总DNA,利用16S核糖体DNA(16S ribosome DNA,16Sr DNA)Amplicon测序法进行测序,使用Pandaseq、Qiime等软件分析菌群多样性及结构。结果 2型糖尿病患者和正常人口腔菌群丰度及优势菌属差异无统计学意义(P>0.05)。2型糖尿病患者样本中布雷德菌属、瘤胃菌科、幽门螺杆菌科丰度较高,正常人样本中韦荣菌科、Selenomonadales目、Negativicutes纲、月形单胞菌属、丁酸弧菌属、Anaeroglobus属、Candidatus-Saccharibacteria门、Saccharibacteria_genera_incertae_sedis属、诺卡菌科、气微菌属丰度较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论用16Sr DNA Amplicon测序法分析2型糖尿病患者与正常人口腔菌群结构具有相似性,幽门螺杆菌与2型糖尿病之间的关系还有待于进一步的研究。 展开更多
关键词 2型糖尿病 口腔菌群 16s核糖体dna
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膜生物反应器脱氮除磷及细菌16S rDNA多样性研究
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作者 伍阳 谢晴 +1 位作者 王川南 邓仕槐 《四川有色金属》 2012年第3期49-52,共4页
采用一体式膜生物反应器(MBR)处理富含氮磷、有机物、高悬浮物的畜禽养殖废水。在最佳的处理条件下,采用分子生物学手段,构建16S rDNA基因文库,并通过16SrDNA序列的系统发育分析,对膜生物反应器中的细菌种群多样性和群落结构进行了研究... 采用一体式膜生物反应器(MBR)处理富含氮磷、有机物、高悬浮物的畜禽养殖废水。在最佳的处理条件下,采用分子生物学手段,构建16S rDNA基因文库,并通过16SrDNA序列的系统发育分析,对膜生物反应器中的细菌种群多样性和群落结构进行了研究。实验结果表明,反应器中的细菌种群多样性十分丰富,系统中的优势菌群为γ-变形细菌(proteobacteria)和β-变形细菌(proteobacteria)。 展开更多
关键词 膜生物反应器 畜禽废水 16s核糖体dna 菌群多样性
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基于16S rDNA测序技术研究惠州市水产养殖中的耐药菌
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作者 冀霞 黄奕睿 +3 位作者 余若菁 李旭康 朱康溢 郭铭娜 《惠州学院学报》 2022年第6期29-33,共5页
为有效防范惠州市水产养殖中细菌病害的发生,对惠州市水产养殖致病菌的耐药情况进行分析。首先,在28℃和37℃下,经6种抗生素平板筛选惠州市水产养殖采集水样中的耐药菌株;然后,随机选取分离得到的70株菌,对其16S rDNA进行测序,并获得46... 为有效防范惠州市水产养殖中细菌病害的发生,对惠州市水产养殖致病菌的耐药情况进行分析。首先,在28℃和37℃下,经6种抗生素平板筛选惠州市水产养殖采集水样中的耐药菌株;然后,随机选取分离得到的70株菌,对其16S rDNA进行测序,并获得46株阳性扩增产物的测序结果;最后对16S r DNA测序结果进行分析,得出分离菌株中耐药菌的种属。研究发现,从养殖水样中分离得到的菌株分别属于产气单胞菌属、丛毛单胞菌属等8个属,养殖水体中的细菌主要对氨苄西林和诺氟沙星耐药,对四环素耐药率较低。因此,在水产养殖过程中,应尽量避免使用氨苄西林和诺氟沙星类抗生素,首选耐药率低的四环素作为水产养殖的药物。 展开更多
关键词 水产养殖 耐药菌 16s r dna 系统进化树
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复方嗜酸乳杆菌片对腹膜透析患者胃肠道症状的疗效及肠道菌群的影响
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作者 闫慧玲 王宇晖 +1 位作者 翁宁 童孟立 《浙江医学》 CAS 2024年第10期1027-1033,I0004,共8页
目的观察伴有胃肠道症状的腹膜透析患者口服复方嗜酸乳杆菌片治疗的效果,以及治疗前后肠道菌群的变化。方法回顾性选取2021年6至9月在杭州市中医院腹膜透析中心行持续性非卧床腹膜透析治疗并伴有胃肠道症状的患者40例。患者在常规治疗(... 目的观察伴有胃肠道症状的腹膜透析患者口服复方嗜酸乳杆菌片治疗的效果,以及治疗前后肠道菌群的变化。方法回顾性选取2021年6至9月在杭州市中医院腹膜透析中心行持续性非卧床腹膜透析治疗并伴有胃肠道症状的患者40例。患者在常规治疗(降血压、调脂、降糖,以及纠正甲状旁腺功能亢进、电解质紊乱、贫血等)基础上联合口服复方嗜酸乳杆菌片治疗6个月。通过评估患者治疗前和治疗后胃肠道症状评定量表(GSRS)评分观察对胃肠道症状的疗效。收集患者治疗前后的粪便样本,采用16S核糖体DNA(16S rDNA)技术测定患者治疗前后肠道菌群多样性、物种组成差异。结果复方嗜酸乳杆菌片对患者胃肠道症状的治疗有效率分别为便秘80.6%,消化不良72.7%,腹痛82.6%,腹泻92.3%,反流72.7%,总体有效率为85.0%。消化不良、腹痛、腹泻、反流症群GSRS评分与特定肠道菌群在属水平丰度上均存在一定相关性(均P<0.05)。患者治疗前后肠道菌群的Alpha多样性及Beta多样性差异均有统计学意义(均P<0.05)。物种差异LEfSe分析提示肠道菌群在治疗前后共有2个门、3个纲、3个目、1个科、1个属、1个种的显著差异物种。细菌表型预测提示治疗后肠道菌群中好氧表型、耐应激性表型增加,厌氧表型下降。结论复方嗜酸乳杆菌片能改善腹膜透析患者胃肠道症状和肠道菌群失调。 展开更多
关键词 益生菌 肠道菌群 腹膜透析 16s核糖体dna
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内蒙古地区传统发酵乳中乳酸菌的分离与鉴定 被引量:3
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作者 代牡兰 锡林高娃 +4 位作者 吴金花 布日额 邢家辉 王赞嘉 石竞楠 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2023年第5期31-35,共5页
对内蒙古地区传统发酵乳中乳酸菌进行分离并鉴定。以蒙古族传统发酵乳为材料,采用传统的细菌纯培养分离方法分离乳酸菌株,通过形态学特征及生理生化试验初步确定乳酸菌的基础上,进一步利用细菌16S r DNA基因序列分析和系统发育进化树构... 对内蒙古地区传统发酵乳中乳酸菌进行分离并鉴定。以蒙古族传统发酵乳为材料,采用传统的细菌纯培养分离方法分离乳酸菌株,通过形态学特征及生理生化试验初步确定乳酸菌的基础上,进一步利用细菌16S r DNA基因序列分析和系统发育进化树构建,对其种属进行分析鉴定。分析鉴定结果显示,分离得到的29株乳酸菌共鉴定为2个属,6个种。2个属分别为乳酸杆菌属(Lactobacillus)和肠球菌属(Entercoccus),6个种分别为短乳杆菌(Levilaccillus brevis,4株)、植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum,8株)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis,9株)、鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum,3株)、蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii,1株)、耐久肠球菌(Enterococcus durans,4株)。该研究采集的发酵乳样品中乳酸菌资源丰富,代表着内蒙古蒙古族传统发酵乳制品中优势性乳酸菌菌种,为优良发酵剂的研发奠定了微生物资源基础。 展开更多
关键词 传统发酵乳 乳酸菌 分离鉴定 16s r dna基因序列分析
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松鼠大肠埃希氏菌和松鼠葡萄球菌混合感染的病原鉴定及诊治
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作者 孙宁 修福晓 +10 位作者 李新鸣 张加鑫 郞文萱 徐澍 俞曦 周媛婷 荣勤双 孟奕祥 范本旭 曲艺鸣 朱启文 《野生动物学报》 北大核心 2023年第4期878-885,共8页
2021年12月,沈阳某学院实验动物中心用于搜索毒品训练的1只笼养松鼠(Sciurus vulgaris)突发性死亡,其余陆续表现为以腹泻为主要症状的疾病。为查明发病原因,无菌采集发病松鼠的粪便及死亡松鼠样品送检。根据临床症状、剖检结果、细菌分... 2021年12月,沈阳某学院实验动物中心用于搜索毒品训练的1只笼养松鼠(Sciurus vulgaris)突发性死亡,其余陆续表现为以腹泻为主要症状的疾病。为查明发病原因,无菌采集发病松鼠的粪便及死亡松鼠样品送检。根据临床症状、剖检结果、细菌分离培养、16S rDNA基因测序及同源性比对,确定松鼠的病因是由松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)和大肠埃希氏菌(Escherichia coli)混合感染引起。进一步确定大肠埃希氏菌的血清型为O2型。药敏试验结果显示:大肠埃希氏菌对头孢克肟、庆大霉素和卡那霉素等9种抗生素敏感,对磺胺嘧啶耐药;松鼠葡萄球菌对头孢克肟、头孢唑啉和氨苄西林等8种抗生素敏感,对卡那霉素、诺氟沙星、克林霉素和红霉素耐药。根据药敏试验结果进行疾病治疗和综合预防,最终治愈并有效控制疾病。 展开更多
关键词 松鼠 大肠埃希氏菌 松鼠葡萄球菌 分离鉴定 16s r dna 药敏试验
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砒砂岩区沙棘不同平茬模式对土壤微生物群落组成的影响
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作者 黄俊月 郭月峰 +3 位作者 石麟 樊霞霞 何金军 卜繁靖 《内蒙古林业调查设计》 2023年第3期93-97,共5页
为探究不同平茬处理对沙棘(Hippophae rhamnoides)土壤微生物群落组成的影响,本研究以内蒙古砒砂岩区沙棘人工林为研究对象,应用16S rDNA测序技术,通过野外调查和室内试验相结合的方法对沙棘进行齐地平茬(A)和15cm平茬(C)处理,以未做平... 为探究不同平茬处理对沙棘(Hippophae rhamnoides)土壤微生物群落组成的影响,本研究以内蒙古砒砂岩区沙棘人工林为研究对象,应用16S rDNA测序技术,通过野外调查和室内试验相结合的方法对沙棘进行齐地平茬(A)和15cm平茬(C)处理,以未做平茬处理作为对照(E)。结果表明:(1)齐地平茬、15 cm平茬和对照样方,土壤细菌共有主要优势细菌门为变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)和酸杆菌门(Acidobacteria),其中15 cm平茬处理中变形菌门和放线菌门的相对丰度最高,分别为37.46%、26.25%。共有主要优势细菌属为鞘氨醇单胞杆菌属(Sphingomonas)、RB41和酸杆菌目未定义属(Vicinamibacteraceae_unclassified),其中15 cm平茬处理中鞘氨醇单胞杆菌属和RB41的相对丰度最高,分别为6.46%、7.84%。(2)15 cm平茬土壤微生物群落的特有ASV数量最多,值为8698,Chao1指数和Shannon指数最高,分别为2903.86和10.63。在齐地平茬、15 cm平茬和对照中,15 cm平茬处理效果最好,物种数量最多,多样性和丰富度最高。 展开更多
关键词 砒砂岩区 平茬 沙棘 土壤微生物 16s r dna
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一株产耐高温碱性蛋白酶菌株的筛选 被引量:21
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作者 武波 蒋承建 +1 位作者 陈以涛 唐纪良 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期16-20,共5页
通过形态观察和 16SrDNA序列同源性比较 ,将一株产耐高温碱性蛋白酶菌株GXD990 1初步鉴定为枯草芽胞杆菌 (Bacillussubtilis)。对GXD990 1菌株产蛋白酶的培养条件进行分析表明 ,最佳产酶培养基为 :麦芽糖 3%、NH4 H2 PO4 0 3%、MnCl2 0... 通过形态观察和 16SrDNA序列同源性比较 ,将一株产耐高温碱性蛋白酶菌株GXD990 1初步鉴定为枯草芽胞杆菌 (Bacillussubtilis)。对GXD990 1菌株产蛋白酶的培养条件进行分析表明 ,最佳产酶培养基为 :麦芽糖 3%、NH4 H2 PO4 0 3%、MnCl2 0 0 5%、KCl0 0 5%、Fe2 (SO4 ) 30 0 0 1%、K2 HPO4 0 1% ,pH11 2。在 37℃培养 6 0h后 ,蛋白酶活力达到546 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 耐高温碱性蛋白酶 16s核糖体dna 筛选
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北京地区实验动物中嗜肺巴斯德杆菌的表型分析 被引量:4
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作者 邢进 冯育芳 +1 位作者 岳秉飞 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第6期54-57,共4页
目的对北京地区实验动物中的嗜肺巴斯德杆菌分离株进行表型分析,提高检测的准确性。方法通过生化鉴定和16S rDNA测序,对306株嗜肺巴斯德杆菌可疑菌株进行鉴定。结合分离株在血琼脂平皿上的菌落特征和生化特性,组成53个特征数据谱,进行... 目的对北京地区实验动物中的嗜肺巴斯德杆菌分离株进行表型分析,提高检测的准确性。方法通过生化鉴定和16S rDNA测序,对306株嗜肺巴斯德杆菌可疑菌株进行鉴定。结合分离株在血琼脂平皿上的菌落特征和生化特性,组成53个特征数据谱,进行表型特征的聚类分析。结果 306株分离株中,BD自动细菌鉴定系统和16S rDNA测序鉴定出嗜肺巴斯德杆菌的阳性率分别为164/306和227/306。227株嗜肺巴斯德杆菌真阳性的表型特征共有140种,Heyl型106种,Jawetz型23种。结论北京地区实验动物中嗜肺巴斯德杆菌主要为Heyl型感染,Jawetz型较少,表型特征多样,分布广泛。 展开更多
关键词 嗜肺巴斯德杆菌 表型 细菌鉴定 16s核糖体dna
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土壤微生物多样性研究的新方法 被引量:59
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作者 马万里 Josquin Tibbits Mark Adams 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期103-107,共5页
传统的分离培养和鉴定土壤微生物方法所具有的困难性和局限性 ,是造成难以深入了解土壤微生物生态学特性和多样性组成方面的主要障碍。本文运用分子生物学技术 ,以澳大利亚两种主要森林类型的土壤微生物多样性研究为实例 ,介绍了从土壤... 传统的分离培养和鉴定土壤微生物方法所具有的困难性和局限性 ,是造成难以深入了解土壤微生物生态学特性和多样性组成方面的主要障碍。本文运用分子生物学技术 ,以澳大利亚两种主要森林类型的土壤微生物多样性研究为实例 ,介绍了从土壤中直接提取土壤微生物DNA的方法以及末端限制性酶切片段长度多态性 (T RFLP)分析的基本原理和方法。作者认为 ,用该方法提取的土壤真菌DNA的纯度高 ,完全适合PCR扩增和T RFLP分析的要求。T 展开更多
关键词 土壤微生物 多样性 16s核糖体dna 真菌核糖体dna ITS T-RFLP分析
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产碱性蛋白酶菌株ZK202的鉴定及其诱变 被引量:1
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作者 褚忠志 于新 +1 位作者 毕阳 杨林华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第14期5717-5719,共3页
[目的]为产碱性蛋白酶菌株在生产中的应用提供依据。[方法]从河南省兰考县盐碱地土壤中分离1株产碱性蛋白酶的菌株ZK202,通过形态观察、生理生化试验和16SrDNA序列分析对其进行鉴定。经紫外照射和DES处理后,测定诱变菌株的酶活力。[结果... [目的]为产碱性蛋白酶菌株在生产中的应用提供依据。[方法]从河南省兰考县盐碱地土壤中分离1株产碱性蛋白酶的菌株ZK202,通过形态观察、生理生化试验和16SrDNA序列分析对其进行鉴定。经紫外照射和DES处理后,测定诱变菌株的酶活力。[结果]菌株ZK202的形态符合芽孢杆菌属的特征,其16SrDNA序列与短小芽孢杆菌的同源性在99%以上。该菌株为短小芽孢杆菌一个新亚种,命名为Bacillus pumilus ZK202,属中等嗜盐菌。ZK202在氯化钠浓度0~12.5%条件下均能生长,以浓度5.0%时最佳。ZK202在碱性环境中生长良好,当培养基pH值在11.0以上时仍能生长,也属嗜碱性菌。经复合诱变后,菌株Zkud202-4发酵液的酶活力达321U/ml,比出发菌株高3.9倍。[结论]Zkud202-4具有稳定的产酶性能,可作为产碱性蛋白酶的突变菌株。 展开更多
关键词 短小芽孢杆菌 碱性蛋白酶 16s核糖体dna 诱变
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浙江省部分地区肉鸡和蛋鸡的粪便菌群结构差异分析
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作者 唐标 吴静 +4 位作者 王静鸽 郑雪 吉小凤 钱鸣蓉 杨华 《家畜生态学报》 北大核心 2022年第9期21-27,共7页
为探究蛋鸡和肉鸡粪便中微生物的差异性,本试验采用高通量测序的方法,对浙江省部分地区蛋鸡和肉鸡53份粪便样品的16S rDNA的V3-V4区进行菌群结构研究,在门和属水平上进行了菌群α多样性对比分析及组间差异对比分析。结果表明:微生物群... 为探究蛋鸡和肉鸡粪便中微生物的差异性,本试验采用高通量测序的方法,对浙江省部分地区蛋鸡和肉鸡53份粪便样品的16S rDNA的V3-V4区进行菌群结构研究,在门和属水平上进行了菌群α多样性对比分析及组间差异对比分析。结果表明:微生物群落组成分析显示,在门水平上,厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)为此次样品中的主要优势菌群;在属水平上,主要优势菌群为埃希氏菌-志贺氏菌(Escherichia-Shigella)、消化链球菌(Peptostreptococcus)、螺杆菌(Helicobacter)和拟杆菌(Bacteroides)。α多样性结果表明,蛋鸡粪便的菌群多样性大于肉鸡。在门水平上,变形菌门、梭杆菌门(Fusobacterium)、互养菌门(Synergistetes)、黏胶球形菌门(Lentisphaerae),在属水平上,埃希氏菌-志贺氏菌、螺杆菌属的相对丰度在两组样品之间的差异极显著(P<0.01)。说明基于16S rDNA扩增子测序对蛋鸡和肉鸡粪便的微生物菌群进行对比分析,结合饲养环境和饲养方式等因素,可以阐释蛋鸡和肉鸡粪便菌群的差异性。 展开更多
关键词 肉鸡 蛋鸡 粪便 高通量测序 菌群结构 16s核糖体dna
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不同性别痰湿体质者肠道菌群特征研究
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作者 于慧娟 景彩 +4 位作者 肖宁 张昌云 张昕 臧晓明 谭奇纹 《山东中医杂志》 2022年第5期510-516,共7页
目的:通过16S rDNA技术,进行高通量测序分析,从微观角度探讨不同性别痰湿体质受试者肠道菌群的特征和差异。方法:60位20~50岁痰湿体质受试者,男女各半。严格按照纳入标准和排除标准收集60份粪便标本。Illumina MiSeq高通量测序平台被用... 目的:通过16S rDNA技术,进行高通量测序分析,从微观角度探讨不同性别痰湿体质受试者肠道菌群的特征和差异。方法:60位20~50岁痰湿体质受试者,男女各半。严格按照纳入标准和排除标准收集60份粪便标本。Illumina MiSeq高通量测序平台被用于在338F_806R区域进行16S rDNA测序,以检测肠道菌群。结果:偏最小二乘回归分析法(PLS-DA)分析显示,男女受试者明显区分并聚成两个类群,可以明显区分为两个不同的组,说明痰湿体质男性和女性肠道菌群组成在OTU水平上具有显著差异。菌群Alpha多样性分析显示,女性痰湿体质者肠道菌群多样性高于男性。肠道菌群的群落组成分析结果显示,在门水平上,经Kruskal-Wallis秩和检验,梭菌门、Tenericutes门、蓝细菌门(0.01<P≤0.05)为男女受试者肠道菌群在门水平差异明显的菌门。拟杆菌属(0.01<P≤0.05)、大肠杆菌-志贺菌属(0.001<P≤0.01)为男女受试者肠道菌群在属水平差异明显的菌属。结论:男女痰湿体质受试者肠道菌群的不同可能是代谢性疾病及其合并症的发生率存在性别差异的原因。 展开更多
关键词 痰湿体质 性别 肠道菌群 16s核糖体dna 代谢性疾病
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16S rDNA全长高通量测序在蜱媒病原生物多样性研究中的应用 被引量:6
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作者 杨小娜 张琳 +1 位作者 侯学霞 郝琴 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期404-411,共8页
目的利用16S核糖体DNA(16S rDNA)全长测序方法,结合实验室检测数据,研究蜱中病原微生物种群特点,为病原体控制提供依据。方法选取山西省祁县优势蜱种50只,经形态学和基因鉴定后,提取全基因组DNA,采用PacBio平台、高通量16S rDNA全长测... 目的利用16S核糖体DNA(16S rDNA)全长测序方法,结合实验室检测数据,研究蜱中病原微生物种群特点,为病原体控制提供依据。方法选取山西省祁县优势蜱种50只,经形态学和基因鉴定后,提取全基因组DNA,采用PacBio平台、高通量16S rDNA全长测序方法,分析蜱中微生物种类及各种群丰度情况;根据16S rDNA全长序列分析结果,利用PCR检测方法对可能存在的蜱媒病原体特异性基因进行鉴定,较为全面地分析蜱媒病原体携带情况。结果16S rDNA全长测序分析表明50只血蜱均携带贝氏柯克斯体、假单胞菌,8只血蜱携带嗜吞噬细胞无形体,有部分血蜱携带立克次体、埃立克体,但仅匹配到属一级的分类信息,无法确定所携带的基因种,在50只血蜱中未检出疏螺旋体。PCR检测结果表明,50只血蜱中检测到柯克斯体内共生体、伯氏疏螺旋体、米氏疏螺旋体和斑点热群立克次体。结论高通量16S rDNA全长测序分析可以同时检测出多种病原体,可提示当地的主要蜱媒致病菌,但也存在检测不全面、无法匹配到物种的缺点,与病原体特异检测方法相结合,能更全面地了解当地血蜱携带病原体的状况。 展开更多
关键词 16s核糖体dna全长测序 实验室分子检测 蜱媒致病菌 生物多样性
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合生元制剂对小鼠抗氧化能力和肠道菌群的影响 被引量:2
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作者 王涵 刘倩 +5 位作者 郭子晨 王韵婷 王伶毓 赵江燕 张连中 孙雅煊 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2022年第7期1-8,共8页
为研究合生元制剂对小鼠抗氧化能力、细胞因子和肠道菌群的影响,随机将48只BALB/c小鼠分为对照组、低剂量组(L)、中剂量组(M)和高剂量组(H),并灌胃生理盐水和不同剂量合生元制剂,14 d后收集小鼠粪便进行菌落计数和16S rDNA高通量测序,... 为研究合生元制剂对小鼠抗氧化能力、细胞因子和肠道菌群的影响,随机将48只BALB/c小鼠分为对照组、低剂量组(L)、中剂量组(M)和高剂量组(H),并灌胃生理盐水和不同剂量合生元制剂,14 d后收集小鼠粪便进行菌落计数和16S rDNA高通量测序,测定小鼠肝脏、小肠组织中抗氧化指标,检测血清中细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平。结果表明:小肠和肝脏组织中,各个剂量组总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量上升,丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量下降。H组IL-1β水平极显著降低(p<0.05)。灌胃14 d后,各剂量组与灌胃前相比,乳杆菌和双歧杆菌数量增加,16S rDNA测序表明给予合生元制剂可以增加Rikenella、Alistipes、Bifidobacterium和Lactobacillus等丰富度。灌胃上述合生元制剂可以提高小鼠抗氧化能力,降低细胞因子水平,促进乳杆菌和双歧杆菌繁殖,对肠道菌群具有调节作用。 展开更多
关键词 益生菌 肠道菌群 细胞因子 抗氧化 16s r dna高通量测序
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基于IPTW法筛选高脂血症人群的差异肠道菌群 被引量:3
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作者 陈姝琴 王兴欣 +2 位作者 赵娟娟 纪泽敏 赵焕虎 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第11期219-229,共11页
目的:研究高脂血症患者与非高脂血症人群肠道菌群的差异。方法:采用Illumina HiSeq二代测序技术分析肠道菌群组成和丰度,利用逆处理概率加权法(IPTW)校正混杂因素,通过QIIME2 ANCOM筛选高脂血症的差异菌群,运用R Tax4Fun包进行功能预测... 目的:研究高脂血症患者与非高脂血症人群肠道菌群的差异。方法:采用Illumina HiSeq二代测序技术分析肠道菌群组成和丰度,利用逆处理概率加权法(IPTW)校正混杂因素,通过QIIME2 ANCOM筛选高脂血症的差异菌群,运用R Tax4Fun包进行功能预测。结果:高脂血症组和非高脂血症组共有7个差异扩增序列变体(ASVs)(ASV_232、ASV_63、ASV_173、ASV_46、ASV_393、ASV_283、ASV_41);甘油三酯组和非甘油三酯组(TG组与非TG组)只有1个差异ASV_(ASV_422);高密度脂蛋白胆固醇组与非高密度脂蛋白胆固醇组(HDL-C组和非HDL-C组)共有18个差异ASVs(ASV_9、ASV_15、ASV_28、ASV_36、ASV_50、ASV_56、ASV_80、ASV_99、ASV_153、ASV_45、ASV_636、ASV_243、ASV_109、ASV_516、ASV_13、ASV_74、ASV_96、ASV_259)。功能预测结果显示:高脂血症组与非高脂血症组样本菌群功能组成高度相似,没有发现显著差异,大多数功能基因与能量代谢有关。结论:高脂血症患者与非高脂血症人群的差异肠道菌群为毛螺菌科、疣微菌科,双歧杆菌属、粪杆菌属、拟杆菌属、瘤胃菌属_UCG-013、Agathobacter、Subdoligranulum、Lachnoclostridium、Lachnospiraceae_UCG-010属,该结果说明碳水化合物代谢和氨基酸代谢所占比例较大。 展开更多
关键词 高脂血症 肠道菌群 16s r dna IPTW
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