17-AAG对MCF-7细胞增殖的抑制作用及对STAT3和VEGF表达的影响

目的观察17-AAG对人乳腺癌MCF-7细胞株STAT3、VEGFmRNA及蛋白表达水平的影响。方法体外培养MCF-7细胞，分别给予不同剂量及不同作用时间的17-AAG，采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测细胞增殖能力；RT-PCR和Westernblot法检测各组细胞STAT3和VEGFmRNA及蛋白的表达水平。结果0．165～10．000mg／L17-AAG作用24h、48h对MCF-7细胞有显著的抑制作用，且有明显的时间、剂量依赖性；1．0、2．0、3．0、5．0mg／L17．AAG作用48h后，各组细胞STAT3和VEGFmRNA及蛋白表达水平均下调，且具有浓度依赖性。结论17一AAG对人乳腺癌MCF．7细胞的增殖具有明显的抑制作用，并能抑制STAT3和VEGFmRNA及蛋白的表达，且具有剂量依赖性。

热休克蛋白90抑制剂17-AAG对K562/ADR耐药细胞株生长和凋亡的影响

目的研究热休克蛋白90抑制剂17-AAG对耐药白血病细胞生长的影响及其诱导的细胞凋亡作用,为白血病的治疗提供新的研究思路。方法采用MTT法检测17-AAG对细胞增殖抑制的剂量-时间-效应关系;激光共聚焦DA-PI染色法观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡、周期及P-糖蛋白(P-gp)的变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的变化。结果 17-AAG能够明显抑制K562/ADR细胞的生长,大量细胞的核内DNA发生断裂,细胞核边缘化,加药组细胞凋亡率与对照组相比明显增高;加药后细胞被阻滞在G1期,procaspase-3和cleaved Caspase-3表达升高。结论 17-AAG可以通过诱导耐药细胞株K562/ADR的凋亡而抑制细胞生长。P-gp和Caspase-3的表达与凋亡事件的发生具有一定的相关性。

热休克蛋白抑制剂17-AAG通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖

目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-AAG抑制多发性骨髓瘤细胞增殖的主要作用机制。方法:应用200、400、600、800 nmol/L热休克蛋白抑制剂17-AAG培养多发性骨髓瘤U266细胞24、48和72 h,分别用MTT法,Western blot和流式细胞术检测17-AAG不同浓度对多发性骨髓瘤细胞增殖率、β-catenin蛋白和C-MYC蛋白的相对表达量及细胞周期的影响。结果:17-AAG不同浓度对骨髓瘤细胞具有抑制作用且呈剂量依赖性(r=0.518,P<0.05)和时间依赖性(r=0.473,P<0.05)。未添加17-AAG的培养液对骨髓瘤细胞株的增殖无时间依赖性抑制作用(P>0.05)。在17-AAG不同浓度下培养多发性骨髓瘤细胞株72 h的结果显示,17-AAG浓度越高,β-catenin蛋白和C-MYC蛋白水平越低(P<0.05)。在相同培养时间下,17-AAG浓度越高,则G_1细胞比例越高(P<0.05)。在相同浓度17-AAG下,培养时间越长,则G_1细胞比例越高(P<0.05)。结论:HSP90抑制剂17-AAG能够抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,其主要作用机制与Wnt/β-catenin信号通路下调和HSP90蛋白表达抑制有关。

Hsp90选择性抑制剂17-AAG诱导白血病细胞株凋亡的基因谱研究

目的:探讨热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂17-AAG对急性白血病细胞株HL-60和NB4细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。方法:应用CCK-8比色法观察17-AAG对HL-60和NB4细胞的生长抑制作用;用Annexin V/PI标记流式细胞术分析细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的表达水平及其活化状态,采用实时定量PCR法检测17-AAG处理后NB4细胞的凋亡相关基因的mRNA变化。结果:17-AAG呈剂量依赖性抑制白血病细胞的生长。Annexin V测定、细胞周期分析和Caspase-3、PARP1的活化均表明17-AAG诱导白血病细胞的凋亡。实时荧光定量PCR分析发现,17-AAG处理后实验组和对照组相比有56个基因显著上调,23个基因显著下调。结论:17-AAG可诱导白血病细胞的凋亡,抑制细胞增殖。17-AAG处理白血病细胞后凋亡相关基因发生明显变化,激活凋亡信号通路可诱导细胞发生凋亡。

HSP90抑制剂17-AAG对胃癌SGC-7901细胞生长周期和凋亡的影响

目的研究一种特异性的热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人胃癌细胞SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响,分析其可能的作用机制。方法应用MTT比色法检测不同浓度的17-AAG对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制率;荧光显微镜下观察PI染色的SGC-7901细胞凋亡形态学变化;采用流式细胞术检测SGC-7901细胞的细胞周期变化及凋亡率变化;通过免疫组化检测胃癌SGC-7901细胞中Fas蛋白的表达。结果 MTT法显示17-AAG能明显抑制胃癌SGC-7901细胞的生长增殖,呈时间、剂量依赖性;流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG处理48 h后使SGC-7901细胞发生G2/M期阻滞,并有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用;细胞免疫组化结果显示,SGC-7901细胞胞浆内有Fas表达,随着药物浓度的加大,阳性表达率也逐渐增加。结论 17-AAG通过改变细胞周期、诱导其凋亡来抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,上调SGC-7901细胞中Fas蛋白的表达是诱导凋亡的作用机制之一。

17-AAG协同顺铂抑制肺腺癌A549细胞的增殖

目的:观察热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-AAG与顺铂(cisplatin,DDP)联用对肺腺癌细胞株A549增殖抑制的协同效应。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度17-AAG、顺铂及两药联用对肺癌细胞株A549的生长抑制作用,并应用中效原理评价两药联用效应。结果:顺铂和17-AAG均对A549细胞的生长有较好的抑制作用,并呈现一定的剂量依赖性,顺铂作用48h时,其IC50值为69.627μmol/L;17-AAG的IC50值为0.455μmol/L。顺铂联合17-AAG显示更强的抑制作用,特别是在低剂量下协同作用更明显。结论:17-AAG联合顺铂对肺癌细胞的增殖具有协同抑制效应。

实时荧光PCR检测17-AAG对人RPE细胞Akt等基因表达的调控

目的:建立检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中Akt,Raf,Hsp90,Hsp70基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株。当加入处理因素17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据Akt,Raf,Hsp90,Hsp70的基因序列,设计Akt1,Raf1,Hsp90,Hsp70的引物,利用ABI 7300PCR仪和SYBR Green,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析。结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证明了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,17-AAG可以下调Akt及Raf基因的表达,上调Hsp90及Hsp70基因表达。结论:应用SYBR Green实时荧光PCR可以特异、准确地分析RPE细胞相关增殖基因表达差异,为系统研究17-AAG治疗PVR的复杂调控机制创造有力条件。

17-AAG联合紫杉醇对Eca-109食管癌细胞增殖的抑制作用

目的研究17-AAG联合紫杉醇(PTX)对食管癌细胞Eca-109增殖和凋亡的影响。方法予以PTX和17-AAG单独或联合使用作用于Eca-109细胞株,采用MTT法检测其细胞增殖的变化,应用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡的变化。结果与对照组相比,单独使用17-AAG、PTX均能够抑制Eca-109细胞的增殖;0.5μmol/L PTX联合0.625μmol/L 17-AAG可抑制Eca-109的生长,且联合效应明显强于各自单药组(P<0.01);流式细胞仪检测结果显示:17-AAG将Eca-109细胞阻滞于G2/M期,PTX将Eca-109细胞阻滞于S期。17-AAG与PTX联合用药使Eca-109细胞阻滞于G2/M期和S。17-AAG组、PTX组及联合组作用Eca-109细胞株24 h后其凋亡率分别为4.52%、10.91%、29.88%,显著高于对照组(1.32%);联合用药后,可形成明显凋亡峰,明显高于单药组。结论 PTX和17-AAG均可抑制食管癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,两者联合可增强上述作用。

17-AAG通过抑制Erk信号通路增强奥沙利铂诱导结肠癌细胞凋亡

目的研究17-AAG与奥沙利铂是否存在协同效应,并探讨PI3K/Akt、Erk信号通路在奥沙利铂联合17-AAG诱导人结肠癌细胞凋亡过程中的作用。方法四甲基偶氮唑盐比色实验(MTT法)检测17-AAG、奥沙利铂对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western blot法检测相关蛋白的表达水平。结果 17-AAG能抑制RKO细胞的增殖;17-AAG联合奥沙利铂作用于RKO细胞24h后,G2/M期细胞比例及凋亡率明显增加;奥沙利铂抑制p-Akt、p-Erk的活化,上调Bax,下调Bcl-2蛋白表达,活化裂解Caspase-3,联合使用17-AAG后可进一步增强上述作用,但对PI3K/Akt信号通路影响不大。结论本实验表明17-AAG具有增强奥沙利铂诱导结肠癌RKO细胞凋亡的作用,同时也说明17-AAG与奥沙利铂存在协同效应;17-AAG上调Bax,下调Bcl-2蛋白表达及增强奥沙利铂对Erk信号通路的抑制作用可能是其促进凋亡的重要机制之一。

17-AAG联合顺铂对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的观察热休克蛋白90抑制剂17-AAG联合顺铂(DDP)对人肝癌Hep G2细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法将对数生长期的Hep G2细胞分为对照组和A、B、C组。对照组只加培养基。A组加入0.625μmol/L的17-AAG,B组加入1.0μg/m L的DDP,C组加入0.625μmol/L的17-AAG和1.0μg/m L的DDP。培养24、48 h后用MTT法测算A、B、C组细胞增殖抑制率,用流式细胞术测算各组细胞凋亡率,用RT-PCR法检测各组Bax、Bcl-2mRNA。结果 A、B、C组培养48 h时细胞增殖抑制率均高于培养24 h时,P均<0.05;培养时间相同时C组细胞增殖抑制率高于A、B组,P均<0.05。培养48 h后A、B、C组细胞凋亡率和Bax mRNA均高于对照组,Bcl-2 mRNA低于对照组,P均<0.05;C组细胞凋亡率和Bax mRNA均高于A、B组,Bcl-2 mRNA低于A、B组,P均<0.05。结论17-AAG对人肝癌Hep G2细胞具有生长抑制作用,其与顺铂联合有协同作用。其机制可能与上调细胞Bax mRNA、下调Bcl-2 mRNA表达有关。

17-AAG对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的观察17-AAG对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的17-AAG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;荧光显微镜观察碘化丙啶(PI)染色的细胞凋亡形态;流式细胞仪检测分析细胞周期分布和凋亡率的变化;免疫组化法检测肝癌HepG2细胞中重组人血管内皮生长因子相关蛋白(VEGF-C蛋白)表达水平变化。结果不同浓度的17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖(P<0.05);流式细胞仪分析显示,17-AAG作用HepG2细胞48 h后G2/M期细胞比例上升,G1/G0期细胞比例下降;0.63、1.25、2.5、5.0μmol/L 17-AAG作用HepG2细胞48 h后的凋亡率分别为(3.23±1.43)%、(9.71±2.20)%、(14.15±2.34)%、(23.65±2.58)%;随着药物浓度的加大,VEGF-C蛋白表达逐渐减少。结论 17-AAG对肝癌HepG2细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用,并能抑制VEGF-C蛋白的表达。

17-AAG通过STAT3通路调控胃癌细胞VEGF基因及蛋白表达作用探讨

目的:观察17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素(17-allylamino-17-desmethoxy-geldanamycin,17-AAG)对人胃癌MKN-45细胞信号转导和转录活化蛋白3(signal transducer and activator of transcriptions 3,STAT3)、血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)mRNA及蛋白表达水平的影响,并探寻STAT3通路所发挥的作用。方法:体外培养人胃癌MKN-45细胞,分别给予不同剂量及不同作用时间17-AAG进行作用,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖能力;RT-PCR法和Western Blotting法检测各组细胞STAT3和VEGF mRNA和蛋白的表达水平。结果:0.165～10 mg/L的17-AAG作用24、48 h后对MKN-45细胞有显著的抑制作用,且有明显的时间、剂量依赖性;1.0、2.0、3.0、5.0 mg/L的17-AAG作用48 h后,各组细胞STAT3和VEGF mRNA和蛋白表达均下调,且具有浓度依赖性;3.0 mg/L 17-AAG作用12、24、48h后,各组细胞STAT3和VEGF mRNA和蛋白表达均下调,且具有时间依赖性。结论:17-AAG对人胃癌MKN-45细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能抑制STAT3和VEGF mRNA和蛋白的表达,17-AAG可能通过对STAT3通路的负性调控作用而抑制VEGF表达。

17-AAG联合顺铂对人胃癌SGC-7901细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-AAG联合顺铂对人胃癌细胞SGC-7901的抑制效应.方法体外培养SGC-7901,采用四氮唑盐比色法测定不同浓度、不同时间17-AAG、顺铂单药和联合处理后SGC-7901的生长抑制情况;采用流式细胞术检测不同浓度17-AAG和顺铂单药、联合处理后对SGC-7901细胞的细胞周期变化及凋亡率变化.结果 2种药物单用均对SGC-7901细胞有明显的生长抑制作用,2种药物联合后呈协同作用,呈时间、剂量依赖性.流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG和顺铂单药处理24 h后,17-AAG阻滞SGC-7901细胞于G2/M期,顺铂阻滞SGC-7901细胞于S期.并都具有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用,其联合用药可显著增加SGC-7901的凋亡率.结论 17-AAG和顺铂均可明显抑制SGC-7901的增值、诱导细胞凋亡,联合用药有一定的协同效应,呈剂量依赖关系.

17-AAG聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备及抗肿瘤活性研究

目的制备一种新型17-丙烯氨基-17-去甲氧基格尔德霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin poly-butylcyanoacrylate nanoparticles,17-AAG-PBCA-NPs)。方法采用界面聚合法制备17-AAG-PBCA-NPs;采用正交实验筛选最优处方;采用纳米粒度仪、透射电镜、扫描电镜对17-AAG-PBCA-NPs进行表征和鉴定;采用动态透析法测定体外释放药物情况;采用四甲基偶氮唑盐〔3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT〕考察17-AAG-PBCA-NPs对5种人肿瘤细胞株增生的抑制作用;以荷S180小鼠为模型,考察17-AAG-PBCA-NPs的抗肿瘤活性。结果界面聚合法制备的17-AAG-PBCA-NPs包封率大于90%,粒径为(180.5±12.0)nm,Zata电位为(-28.38±0.81)m V,表面形态规则均匀;17-AAGPBCA-NPs呈时间依赖性地抑制肿瘤细胞株增生,动物实验表明,17-AAG-PBCA-NPs抗肿瘤活性比17-AAG强,毒性比17-AAG低。结论采用界面聚合法可制备得到17-AAG-PBCA-NPs,制备方法简单、重现性好、包封率高,并显示了较好的抗肿瘤活性。

体外17-AAG对人RPE细胞VEGF及其受体的影响

目的:体外观察17-AAG对人RPE细胞中VEGFA,VEGFB,VEGFR1,VEGFR2基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株加入17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据VEGFA,VEGFB,VEGFR1,VEGFR2的基因序列,设计相应的引物,进行RT-PCR,琼脂糖凝胶电泳用于分析引物的特异性,再利用ABI7300PCR仪和SYBRGreen,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析。结果:17-AAG可以下调VEGFA,VEGFB和VEGFR1基因的表达,而VEGFR2只有再高浓度17-AAG作用时才下调。结论:17-AAG可抑制RPE细胞VEGF及其受体基因。

^(131)I-17-AAG治疗VX2兔前后IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的变化

目的:本文通过测定131I-17-丙烯胺基-17-脱甲基格尔德霉素(131I-17-AAG)治疗VX2肝癌兔模型前后血清白细胞介素2、4、10和IFN-γ的变化探讨对其自身免疫功能的影响。方法:以10mCi131I-17-AAG耳缘静脉注射治疗后1、2周,用放射免疫分析测定8例VX2肝癌兔模型血清中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ水平,8例未经治疗的VX2肝癌兔模型作为对照。结果:IL-2、IFN-γ在1周时有显著性差异(P<0.05),2周时无显著性差异(P>0.05),IL-4、IL-10在1、2周均无显著性差异(P>0.05)。结论:131I-17-AAG治疗VX2肝癌兔模型对细胞免疫有暂时影响,但对体液免疫无影响,总体上说对VX2肝癌兔模型的治疗是安全的。

17-AAG对不同肿瘤细胞系增殖影响作用

目的:观察17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素(17-allylamino-17-desmethoxygeldanamycin,17-AAG)对胃癌MKN-45细胞株、乳腺癌MCF-7细胞株、肝癌HepG-2细胞株和肺癌A549细胞株增殖能力的影响。方法:体外培养四种肿瘤细胞株,分别给予10.0、5.00、2.50、1.25、0.62、0.31、0.160μg/mL的不同剂量的17-AAG进行作用,并分别在24h、48h之后用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖能力的变化。结果:10.0、5.00、2.50、1.25、0.62、0.31、0.160μg/mL作用24h、48h后发现17-AAG在体外细胞试验中浓度1-10μg/mL时对人癌细胞有显著的抑制作用,且有明显的时间,剂量依赖性。结论:17-AAG能够抑制多种肿瘤细胞增殖的能力。

微生物来源的Hsp90抑制剂——抗癌格尔德霉素衍生物17-AAG的研究进展

本文主要对微生物来源的Hsp90抑制剂研发情况以及格尔德霉素的衍生物17-AAG(17-丙烯胺-17-去甲氧基,tanespimycin)的分子作用机制、药代动力学、毒性和治疗范围等全方位的重点介绍。并对17-AAG近年来有关研究进展进行了概述。

盐霉素联合17-AAG促进人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制研究

目的探讨盐霉素与17-AAG联合用药对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及机制。方法CCK8法检测单药及联合用药对MCF-7细胞增殖的影响;用流式细胞术检测单药及联合用药对MCF-7细胞凋亡的影响;用qRT-PCR检测与凋亡相关基因的表达情况。结果细胞增殖实验显示加药后48 h药物杀伤作用更为明显,且联合用药组的细胞增殖抑制率明显高于其他对照组。流式细胞术测定结果显示空白对照组、盐霉素单药组、17-AAG单药组细胞早期凋亡率分为(4.24±0.90)%、(4.79+0.89)%、(2.78±1.10)%,而联合用药组早期凋亡率为(6.42±1.70)%,明显高于其他三组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);qRT-PCR结果显示与其他三个对照组相比,联合用药组中Bcl-2的表达量显著降低,Caspase-3、Beclin-1、Bax的表达量显著增高,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论盐霉素与17-AAG联合用药可能通过相关信号通路如PI3K/Akt/mTOR、MAPK、JNK等,调控凋亡基因Bcl-2、Beclin-1、Bax等的表达而促进MCF-7细胞凋亡。

17-AAG在氧糖剥夺后复糖复氧诱导的神经元凋亡中的作用

目的探讨17-AAG在氧糖剥夺后复糖复氧(OGD/R)诱导的神经元凋亡中的保护作用及可能的机制。方法体外培养大鼠原代神经元并建立OGD/R模型。通过TUNEL实验分别检测氧糖剥夺0.5、1、2h复糖复氧24h后的神经元凋亡情况;通过TUNEL实验检测不同浓度17-AAG(0.5、1、2μmol/L)对OGD/R处理后神经元凋亡的影响;采用Western blotting检测17-AAG对OGD/R处理后神经元中HSP70蛋白表达的影响;构建HSP70干扰慢病毒,通过TUNEL实验检测HSP70干扰在17-AAG调节OGD/R诱导的神经元凋亡中的作用。结果 OGD/R能够明显诱导神经元的凋亡,且神经元凋亡率随着氧糖剥夺时间的增加而升高。17-AAG能够明显抑制OGD/R诱导的神经元凋亡,浓度越高抑制作用越明显;OGD/R能够明显抑制神经元中HSP70蛋白的表达,而17-AAG则能够明显逆转OGD/R对神经元中HSP70表达的抑制作用;HSP70慢病毒干扰可明显逆转17-AAG对OGD/R处理神经元的保护作用。结论 17-AAG通过上调HSP70的表达来抑制OGD/R诱导的神经元凋亡。