良方温经汤对寒凝血瘀证大鼠子宫及卵巢糖酵解关键酶表达的影响

探讨寒凝血瘀证与糖酵解的关系,观察良方温经汤干预对寒凝血瘀证大鼠子宫及卵巢组织糖酵解关键酶表达的影响。采用冰水浴法制备大鼠寒凝血瘀证候模型,于造模结束后进行证候量化评分,并依据评分结果随机分为模型组,良方温经汤低、中、高剂量组(4.7、9.4、18.8 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只,另设空白组10只。连续灌胃给药4周后,再次进行证候量化评分;采用激光散斑血流成像技术检测各组大鼠耳廓及子宫微循环变化;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察各组大鼠子宫及卵巢组织病理形态;采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测各组大鼠子宫及卵巢组织丙酮酸脱氢酶激酶1(pyruvate dehydrogenase kinase 1,PDK1)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)mRNA与蛋白表达情况。模型组大鼠出现蜷缩少动、舌下脉络增粗、耳廓及子宫微循环血流灌注量降低等寒凝血瘀证候表现,HE染色观察到大鼠子宫内膜变薄,上皮细胞排列混乱,卵巢中卵泡数量减少;与模型组相比,治疗组大鼠寒凝血瘀证候明显缓解,表现为舌质变红、爪甲肿胀减少、尾端未见瘀血,耳部及子宫微循环血流灌注量显著增加(P<0.05或P<0.01),尤以良方温经汤中、高剂量组大鼠改善寒凝血瘀证候最为明显,子宫可见排列整齐的柱状上皮细胞,卵巢中较模型组卵泡数量增多,多见成熟卵泡。与空白组相比,模型组大鼠卵巢及子宫组织中PDK1、HK2、LDHA mRNA与蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,良方温经汤中、高剂量组大鼠卵巢及子宫组织中PDK1、HK2、LDHA mRNA与蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01);良方温经汤低剂量组大鼠子宫及卵巢组织中PDK1、HK2、LDHA mRNA的表达,子宫组织中HK2、LDHA蛋白的表达以及卵巢组织中HK2、PDK1蛋白的表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。综上,良方温经汤对寒凝血瘀证的治疗机制与下调糖酵解关键酶PDK1、HK2、LDHA的表达,抑制子宫及卵巢糖酵解活动有关。