非洲爪蟾卵母细胞GABA_B和GABA_C受体介导的电流反应

实验应用双电极电压箝技术 ,在具有滤泡膜的非洲爪蟾 (Xenopuslaevis)卵母细胞上记录到γ 氨基丁酸(γ aminobutyricacid ,GABA) 激活电流。此GABA 激活电流的特点及有关GABA受体类型的研究和分析如下 :( 1)在 3 5 5 % ( 5 5 / 15 5 )的受检细胞外加GABA可引起一慢的浓度依赖性的外向电流。 ( 2 )GABAA 受体的选择性拮抗剂bicuculline ( 10 -5mol/L)对GABA ( 10 -5mol/L)引起的外向电流无阻断作用 (n =6)。 ( 3 )GABAB 受体的选择性拮抗剂2 hydroxysaclofen ( 10 -4mol/L)能将GABA ( 10 -5mol/L)引起的外向电流可逆性地转变为内向电流 ,后者又可被GABAC 受体的选择性拮抗剂I4AA ( 10 -5mol/L)所消除 (n =6)。 ( 4 )GABAB 受体的特异性激动剂baclofen可引起部分 ( 2 0 % ,12 / 60 )受检细胞产生一慢的浓度依赖性的外向电流。 3× 10 -6 、3× 10 -5及 3× 10 -4mol/L 2 hydroxysaclofen分别阻断baclofen ( 10 -5mol/L) 激活电流 ( 6 3± 3 2 ) % ,( 4 4 1± 2 2 ) %及 ( 86 0± 1 6) % (n =6)。 ( 5 )baclofen激活电流的I V曲线显示逆转电位在 - 96 8± 7 2mV左右 ,此电流可分别被TEA ( 5mmol/L)和BaCl2 ( 2mmol/L)所阻断。以上结果提示 :在非洲爪蟾的卵母细胞上存在内源性GABAB 和GABAC 受体 。

γ-氨基丁酸通过其B受体影响小鼠植入前胚胎的发育

目的:探讨γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)对小鼠植入前胚胎发育的影响及其机制。方法:(1)收集不同发育阶段的小鼠植入前胚胎,通过激光共聚焦检测GABA及其B受体B1亚基(B receptor B1 subunit,GB1)、A受体pi亚基(A receptor pi subunit,GABRP)以及GABA合成酶(L-glutamate decarboxylase,GAD67)的表达。(2)不同发育阶段的胚胎分别培养在含10,20,30,40,50μg/μL GABA和40μmol/L B型受体抑制剂(3-Amino-2-(4-chlorophenyl)-2-hydroxypropanesulfonic acid,2-hydroxysaclofen)的培养液中,48~72 h时观察囊胚的形成并计算囊胚形成率。结果:(1)GABA与其受体GB1蛋白在小鼠胚胎中的表达模式一致,在2-细胞和4-细胞阶段,主要表达在细胞膜上,而在8-细胞至囊胚阶段,则转移到细胞核中表达;而另一受体GABRP在植入前胚胎的各个阶段均不表达。GAD67在胚胎发育的各个阶段均有表达。(2)各发育阶段胚胎的囊胚形成率均随着GABA浓度的增加而下降,且呈剂量依赖性;10μg/μL GABA可显著降低2-细胞胚胎的囊胚形成率(92%vs.99%,χ2=5.70,P=0.035)。(3)40μmol/L 2-hydroxysaclofen能够有效逆转30μg/μL和40μg/μL GABA对囊胚形成的抑制作用(99%vs.45%,χ2=72.32,P=0.000;99%vs.4%,χ2=180.66,P=0.000)。结论:GABA通过其B受体抑制小鼠植入前胚胎的发育。