MLC20磷酸化在PKCα、PKCε调节失血性休克大鼠血管钙敏感性中的作用

目的观察肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化在蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)、蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)调节大鼠失血性休克后血管钙敏感性中的作用,进一步探讨休克血管钙失敏的发生机制。方法采用缺氧大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)和失血性休克后大鼠肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA),运用Western blot、底物磷酸化等技术方法,观察PKCα、PKCε激动剂作用下,以及抑制CPI-17、ILK、ZIPK后再给予PKCα、PKCε激动剂时,肌球蛋白轻链磷酸酶(myosin light chain phosphatase,MLCP)活性和MLC20磷酸化的变化。结果①缺氧2h后VSMC中MLCP活性增高至正常对照的150.1%(P<0.01),PKCα、PKCε激动剂可显著抑制其增高,使其分别降低至正常对照的103.0%和96.3%(P<0.01),抑制CPI-17、ILK、ZIPK,可显著抑制PKCα激动剂降低MLCP活性的作用,使其分别增高至正常对照的136.7%、127.6%和116.7%(P<0.01);抑制CPI-17、ILK、ZIPK,也可显著抑制PKCε激动剂降低MLCP活性的作用,使其分别增高至134.0%、128.5%和126.0%(P<0.01)。②失血性休克2h后SMA中MLC20磷酸化水平由32.4%显著降低至10.4%(P<0.01),PKCα、PKCε激动剂可显著抑制其降低,使其分别增高至26.4%和25.6%(P<0.01),抑制CPI-17、ILK、ZIPK,可显著削弱PKCα激动剂的增高MLC20磷酸化的作用,使其分别降低至12.7%、10.0%和15.7%(P<0.01);也可显著削弱PKCε激动剂增高MLC20磷酸化的作用,使其分别降低至10.1%、12.5%和10.3%(P<0.01)。结论PKCα、PKCε可能通过CPI-17、ILK、ZIPK调节MLCP活性和MLC20磷酸化,调节失血性休克血管平滑肌的钙敏感性。

Effect of acupuncture at Fengchi(GB 20)on the activity of myosin light chain kinase in the middle meningeal artery of migraine modeled rats

OBJECTIVE:To study the effect of acupuncture at Fengchi(GB 20) on the activation of myosin light chain kinase(MLCK) in the middle meningeal artery of migraine modeled rats.METHODS:Forty-four clean grade healthy female Sprague-Dawley(SD) rats were randomly divided into four groups:the control group,blank control group,Fengchi(GB 20) acupuncture group,and Fengchi(GB 20) prevention group.Neurogenic inflammation of these rats was induced by electrical stimulation.The γ-^(32)P infiltration method was then used to detect MLCK activation in the middle meningeal artery,and immunocytochemistry was applied to detect the structural protein expression of MLCK.RESULTS:The migraine model was successfully established in the rats.Compared with the control group,MLCK activation was significantly decreased in the blank control group(P < 0.01).CONCLUSION:The activation of MLCK in the middle meningeal artery was increased by acupuncture at Fengchi(GB 20),indicating its effectiveness in preventing and curing on acute migraine attacks.

孕酮通过RhoA/ROCK信号通路促进子宫平滑肌收缩的机制研究

目的 探讨孕酮通过RhoA/ROCK信号通路影响子宫平滑肌收缩的作用机制。方法 收集临产与未临产人子宫平滑肌组织各5例,采用Western blot和免疫组化检测肌球蛋白轻链20磷酸化(phosphorylation of myosin light chain 20,p-MLC20)、ROCK1、ROCK2的表达;分离培养子宫平滑肌细胞并经免疫荧光技术鉴定,激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca;浓度([Ca;]i);孕酮受体拮抗剂米非司酮及孕酮(P4)干预子宫平滑肌细胞,Western blot检测细胞中p-MLC20及ROCK1、ROCK2的表达,以及ROCK抑制剂Y-27632与孕酮干预后子宫平滑肌细胞中p-MLC20的表达。结果 与未临产组织相比,临产子宫平滑肌组织中p-MLC20、ROCK1、ROCK2表达明显上升(P<0.05);孕酮诱导子宫平滑肌细胞后,细胞内ROCK1、ROCK2、p-MLC20水平增加(P<0.05);Y-27632与孕酮干预子宫平滑肌细胞后,细胞内p-MLC20水平下降(P<0.05)。结论 孕酮通过RhoA/ROCK信号通路调控p-MLC20水平,促进子宫平滑肌细胞收缩。

功能性消化不良平滑肌舒缩障碍中G蛋白偶联信号转导机制的研究进展

功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)是一种异质性胃肠动力紊乱性疾病,胃肠道平滑肌舒缩障碍与之关系密切.G蛋白偶联的信号转导机制主要通过磷脂酰肌醇信号转导通路、环核苷酸信号转导通路、小G蛋白信号转导通路参与调控平滑肌舒缩.本文就G蛋白偶联的信号转导系统不同的组成、信号通路及其与FD胃肠动力紊乱平滑肌舒缩障碍的相关性作一综述,以期从微观角度调整胃肠动力异常为治疗FD提供新的思考.