染料木黄酮对去势抵抗前列腺癌22RV1细胞增殖的影响

目的:探讨大豆异黄酮对去势抵抗前列腺癌细胞增殖的抑制作用及可能机制。方法:以不同浓度[0.0、12.5、25.0、50.0、100.0和(或)200.0μmol/L]的染料木黄酮处理去势抵抗前列腺癌细胞22RV1,在24、48、72 h采用CCK-8法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,免疫细胞化学法检测Ki-67表达水平,Western blot法检测PSA、P53、CyclinD1、PCNA及AR表达水平。结果:染料木黄酮对22RV1细胞具有抑制作用。流式细胞术结果显示,染料木黄酮阻滞细胞周期于G2/M期(P<0.05)。免疫细胞化学法检测结果显示,染料木黄酮能够抑制细胞中Ki-67的表达(P<0.05)。Western blot结果显示染料木黄酮处理后细胞中CyclinD1、PCNA、PSA、AR的表达下降,P53的表达上调(P<0.05)。结论:染料木黄酮能够抑制22RV1细胞的增殖,其作用机制可能与阻滞细胞G2/M期及下调周期蛋白CyclinD1表达有关。

白藜芦醇对去势抵抗型前列腺癌22RV1细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对去势抵抗型前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)22RV1细胞增殖与凋亡的影响并探讨其可能机制。方法:用不同浓度Res作用于22RV1细胞24h后,在光学显微镜下观察细胞形态学变化。CCK-8法检测Res对细胞增殖的影响。应用Annexin-V/PI双标记法染色后,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。用活性氧特异性试剂盒检测活性氧含量。Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果:与对照组比较,Res可使22RV1细胞形态出现皱缩,变圆,细胞间隙增大,贴壁细胞减少,凋亡细胞增多。CCK-8结果示Res可抑制22RV1细胞增殖作用(P<0.05)。流式检测结果示Res可诱导22RV1细胞凋亡(P<0.01)。活性氧检测结果示Res可增加2 2 RV1细胞内活性氧含量(P<0.01),并呈剂量相关性。Western blot检测发现随Res浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达增加。结论:Res能够抑制22RV1细胞的增殖并诱导其凋亡。Res诱导22RV1细胞凋亡的机制可能与Res增加22RV1细胞内活性氧水平,激活促凋亡因子Bax,并抑制抗凋亡因子Bcl-2的活性,继而引发后续凋亡反应。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白调控前列腺癌22RV1细胞雄激素受体及Akt磷酸化

目的:探索哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTORC1和mTORC2在前列腺癌22RV1细胞增殖及凋亡中的作用。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测mTORC1和mTORC2沉默后前列腺癌22RV1细胞增殖改变;流式细胞术(FCM)检测mTORC1和mTORC2沉默后前列腺癌22RV1细胞凋亡;Western印迹检测mTORC1和mTORC2沉默后前列腺癌22RV1细胞雄激素受体(AR)和Akt磷酸化表达。结果:MTT显示mTORC1沉默后,前列腺癌22RV1细胞的生长率无明显变化(P>0.05),而mTORC2沉默后,细胞的增殖受到了显著抑制(P<0.01);FCM显示mTORC1沉默后,细胞的凋亡率明显增加(P<0.01),而mTORC2沉默后,细胞的凋亡率无明显变化(P>0.05);Western印迹检测显示mTORC1沉默后,前列腺癌22RV1细胞中AR和Akt磷酸化表达显著增加(P<0.05),而mTORC2沉默后则显著抑制了前列腺癌22RV1细胞中AR和Akt磷酸化表达(P<0.05)。结论:mTORC2对于前列腺癌22RV1细胞的存活是必需的,mTORC2有可能成为治疗前列腺癌的一个有意义的靶点。

植物性功能食品原料在前列腺癌细胞22RV1中的雄激素效应及其机制研究

目的 :研究植物性功能食品原料(当归、甘草、布渣叶)是否具有类雄激素效应,并初步探讨其机制。方法 :采用3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt(MTS)法检测植物性功能食品原料提取物对雄激素受体阳性前列腺癌细胞22RV1增殖的影响;采用real-time PCR法检测提取物对雄激素受体转录活性的影响。结果:布渣叶提取物与对照组相比,能够促进22RV1细胞的增殖,并且能够诱导雄激素受体靶基因PSA的表达,当加入雄激素受体抑制剂后,细胞活性和PSA水平均明显下降,当归和甘草提取物与对照相比并没有明显改变;ERK1/2的抑制剂U0126也可抑制布渣叶提取物介导的细胞增殖和PSA的表达。结论:在当归、甘草、布渣叶3种植物提取物中,布渣叶具有雄激素效应,并且这种效应依赖雄激素受体途径;ERK1/2信号通路参与了布渣叶提取物介导的雄激素效应。

基于AEP/PI3K/AKT信号通路探讨温肾散结方对人前列腺癌细胞的调控作用和分子机制

目的:基于天冬酰胺内肽酶(AEP)/磷酸酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/AKT),探讨温肾散结方(WSSJ方)对人前列腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,并进一步探讨其潜在的分子机制。方法:制备WSSJ方冻干粉;体外培养人前列腺癌PC3、DU145和22RV1细胞,CCK-8法检测WSSJ方对前列腺癌细胞相对活力的影响并测定最佳给药浓度;集落形成实验检测WSSJ方对单细胞增殖能力的影响;划痕实验检测WSSJ方对前列腺癌细胞迁移能力的影响;RT-qPCR检测细胞内AEP mRNA、PI3K mRNA及AKT mRNA表达;Western blotting检测细胞内AEP、PI3K及AKT蛋白表达。结果:WSSJ方组前列腺癌细胞增殖活力随给药浓度升高逐渐降低;WSSJ方组细胞计数与细胞融合情况均低于对照组;WSSJ方低、中、高剂量组细胞集落形成数量均少于对照组;WSSJ方组细胞迁移率显著低于对照组(P<0.01);WSSJ方组PC3细胞AKT蛋白相对表达量低于对照组,DU145细胞、22RV1细胞AEP、PI3K蛋白相对表达量均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);WSSJ方组PC3细胞、DU145细胞、22RV1细胞AEP mRNA、PI3K mRNA及AKT mRNA表达均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:WSSJ方能有效抑制人前列腺癌细胞的增殖和迁移能力,并且其对肿瘤细胞的抑制呈现剂量依赖性,作用机制可能与下调AEP抑制PI3K/AKT信号通路有关。

前列腺癌中netrin-1/UNC5B的表达及临床意义

目的:通过比较不同侵袭能力的前列腺癌细胞netrin-1/UNC5B表达量的差异,为前列腺癌寻找新的生物标志物及治疗手段。方法:选取前列腺癌细胞系DU145、22RV1、PC3、PC3M、RWPE-1,通过RT-PCR、Western印迹检测netrin-1/UNC5B的表达及其差异,并通过免疫荧光检测配体netrin-1及其受体UNC5B在前列腺癌细胞中的定位。结果:netrin-1/UNC5B在前列腺癌细胞中均表达,侵袭能力强的前列腺癌细胞中netrin-1表达量明显增多(P<0.05),而UNC5B在RWPE-1(正常细胞)中表达量明显增多(P<0.05)。结论:netrin-1/UNC5B表达量与前列腺癌的浸润及进展程度紧密关联,有望作为一种潜在的生物标志物来预测前列腺癌的恶性程度。

熊果酸抑制去势抵抗性前列腺癌22Rv1细胞生长的作用机制研究

目的:研究熊果酸(UA)对去势抵抗性前列腺癌22Rv1细胞生长的抑制作用并探讨其药理机制。方法:MTT法检测不同浓度UA分别作用22Rv1细胞12、24、48、72 h后对细胞的增殖抑制作用;倒置相差显微镜观察UA对22Rv1细胞形态的影响;克隆形成实验检测UA对22Rv1细胞平板克隆形成的影响;流式细胞术检测UA对22Rv1细胞凋亡的影响;Western印迹法检测UA对22Rv1细胞p38 MAPK蛋白和磷酸化、STAT3蛋白和磷酸化,以及NF-κB/p65蛋白表达的影响。结果:UA能显著抑制22Rv1细胞增殖,且抑制效应呈剂量和时间依赖性(P<0.05);以5、10、20μmol/L作为UA低、中、高浓度干预24 h,显微镜观察发现随着UA浓度增大,22Rv1细胞数目显著减少,细胞皱缩、质膜起泡;克隆形成实验结果显示,UA能显著减少22Rv1细胞克隆群落形成(P<0.05);流式细胞术结果显示,UA能显著诱导22Rv1细胞凋亡细胞比例增多(P<0.05);Western印迹结果显示,UA能增强p38 MAPK的磷酸化,并且抑制STAT3的磷酸化和NF-κB/p65蛋白的表达。结论:UA可抑制去势抵抗性前列腺癌22Rv1细胞的生长,促进22Rv1细胞凋亡,p38 MAPK/STAT3/NF-κB信号通路参与调控UA对22Rv1细胞的生长抑制作用。

前康宁胶囊对人前列腺癌细胞22RV1的抗肿瘤作用

目的研究前康宁胶囊对人前列腺癌细胞22RV1增殖的影响。方法 1采用MTT法研究前康宁胶囊对22RV1、DU145、PC-3、A549、HCT116和MDA-MB-231等6种人肿瘤细胞株及正常人胚肺细胞WI38体外增殖的抑制作用;2以人前列腺癌细胞22RV1裸鼠异种移植模型评价前康宁胶囊对肿瘤生长的抑制作用;3采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测前康宁胶囊对血清中前列腺特异性抗原(PSA)水平的影响;4采用蛋白印迹法检测前康宁胶囊对CleavedCaspase-3及Cleaved-PARP-1蛋白表达的影响。结果 1前康宁胶囊对各类受试细胞均有不同程度的抑制作用,对22RV1细胞的增殖抑制最为显著;2前康宁胶囊低剂量组、中剂量组、高剂量组,比卡鲁胺低剂量组、高剂量组,前康宁胶囊高剂量+比卡鲁胺低剂量组,及前康宁胶囊高剂量+比卡鲁胺高剂量组,各组的抑瘤率分别为25.21%、39.67%、50.88%、34.28%、53.88%、52.56%及60.24%;3前康宁胶囊低剂量对血清中PSA水平无明显影响,中剂量和高剂量组PSA水平明显降低,抑制率分别为17.83%和33.23%,比卡鲁胺低剂量组和高剂量组的抑制率分别为29.21%和38.48%。前康宁胶囊高剂量+比卡鲁胺低剂量组和前康宁胶囊高剂量+比卡鲁胺高剂量组的抑制率分别为36.93%和41.37%;4蛋白印迹结果显示,前康宁胶囊高剂量组、比卡鲁胺高剂量组及前康宁胶囊高剂量+比卡鲁胺高剂量组活化Caspase-3均显著增加。前康宁胶囊高剂量+比卡鲁胺高剂量组的PARP-1活化水平显著高于空白对照组,前康宁胶囊高剂量组和比卡鲁胺高剂量组均低于空白对照组。结论前康宁胶囊具有一定的抗肿瘤作用,可剂量依赖性地抑制22RV1细胞增殖,对血清PSA水平具有一定抑制作用,其作用机制可能与Caspase-3诱导的细胞凋亡有关。