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以16S和16S—23S rDNA间区为靶区建立副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)PCR快速检测技术 被引量:4
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作者 邓先余 王智学 +1 位作者 陈晓艳 何建国 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期555-562,共8页
提要应用BLAST程序和DNAstar软件,比较分析了5株副溶血弧菌和其他细菌的16S—23S rDNA间区序列,选取IGSIA作为扩增靶区,结合相邻的16S rDNA序列,设计合成了一对特异性引物,通过优化扩增条件,建立了快速检测副溶血弧菌的PCR方法,对其特... 提要应用BLAST程序和DNAstar软件,比较分析了5株副溶血弧菌和其他细菌的16S—23S rDNA间区序列,选取IGSIA作为扩增靶区,结合相邻的16S rDNA序列,设计合成了一对特异性引物,通过优化扩增条件,建立了快速检测副溶血弧菌的PCR方法,对其特异性和敏感性进行了探讨,并初步进行了应用研究。结果表明,新建的PCR方法能特异性地扩增出大小为306bp和552bp的2条带,分别对应于副溶血弧菌的IGS0和IGSIA,检测灵敏度为5.6×102CFU/ml,半个工作日即可得到准确的结果,能有效检测出在杂色鲍、凡纳滨对虾和各种水质中的副溶血弧菌,适用于海洋水产动物副溶血弧菌病的早期快速诊断、水产品的检疫及水质环境的监测。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 16S rdna 16S-23s rdna PCR检测 应用
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Length polymorphisms for intergenic spacer regions of 16S-23S rDNA in members of the new hydrogen-producing bacteria
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作者 李永峰 徐菁利 +1 位作者 杨传平 任南琪 《Journal of Harbin Institute of Technology(New Series)》 EI CAS 2007年第5期691-694,共4页
A method based on PCR amplification of the 16S rRNA gene (rDNA)-23S rDNA intergenic spacer regions (ISR) was developed for the identification of species within the novel group hydrogen-producing anaerobes. The sizes o... A method based on PCR amplification of the 16S rRNA gene (rDNA)-23S rDNA intergenic spacer regions (ISR) was developed for the identification of species within the novel group hydrogen-producing anaerobes. The sizes of the PCR products varied from 1264 to 398 bp. Strain of isolate Rennanqilyf 3 was characterized as having products of 1262,398,638,437 and 436 bp. The isolate Rennanqilyf 1 had product of 1264 bp. The isolate Rennanqilyf 13 had products of 1261,579 and 485 bp. Of the 3 species of the novel group hydrogen-producing anaerobes examined, no one was indistinguishable. Two environmental isolates were identified as hydrogen-producing bacteria, which were new species in present taxon. Rennanqilyf 3 could not be associated with any Clostridium sp. studied. Rennanqilyf 1 could be classified into Clostridium genus. The combination between 16S rDNA equencing and length polymorphisms of IRS in 16S-23S rDNA is a better method for determining species of the hydrogen-producing bacteria. 展开更多
关键词 Biohydrogen production Hydrogen-producing Anaerobes ISR of 16S-23s rdna Length polymorphisms
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幽门螺杆菌ureC和23SrDNA数字PCR检测体系的建立
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作者 范宏博 胡良勇 胡松青 《生物技术进展》 2024年第5期868-874,共7页
为了建立幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)ureC和23S rDNA基因的数字PCR检测体系,为Hp检测提供一个可靠的参考方法,根据Hp ureC和23S rDNA基因序列,设计了特异性引物和探针,采用质控菌评估了检测特异性;通过设定引物浓度和退火温度... 为了建立幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)ureC和23S rDNA基因的数字PCR检测体系,为Hp检测提供一个可靠的参考方法,根据Hp ureC和23S rDNA基因序列,设计了特异性引物和探针,采用质控菌评估了检测特异性;通过设定引物浓度和退火温度的梯度,对检测参数进行了优化;通过梯度法稀释DNA模板,评估了检测灵敏度;使用不同浓度模板开展了重复性检测,以评估检测精密度。经过评估,该检测方法能够特异性地用于ureC和23S rDNA基因的检测,并且不受大肠杆菌等细菌干扰。ureC和23S rDNA的最佳反应温度均为55.8℃,而最佳引物浓度分别为550和650 nmol·L^(-1),通过线性分析,两种基因的拟合度R^(2)值分别高达0.9991和0.9997,显示了良好的线性关系。此外,不同浓度样品的变异系数(CV)均小于10%,说明该检测方法具有高度的重复性。研究成功建立了Hp ureC和23S rDNA基因数字PCR检测体系,具备高度的特异性、灵敏度和重复性,为幽门螺杆菌的检测、诊断和科学研究提供了一个可靠的检测方法和技术支持。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 ureC 23s rdna 数字PCR
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