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细菌分类与鉴定的新热点:16S-23SrDNA间区 被引量:62
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作者 焦振泉 刘秀梅 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期84-89,共6页
:随着分子生物学的迅速发展 ,细菌的分类鉴定亦从传统的表型分类进入到各种基因型分类水平 ,如(G+ C) mol%、DNA杂交、r DNA指纹图、质粒图谱和 16 S r DNA序列分析等。r RNA存在于所有细菌中 ,r RNA基因由保守区和可变区组成 ,在细菌... :随着分子生物学的迅速发展 ,细菌的分类鉴定亦从传统的表型分类进入到各种基因型分类水平 ,如(G+ C) mol%、DNA杂交、r DNA指纹图、质粒图谱和 16 S r DNA序列分析等。r RNA存在于所有细菌中 ,r RNA基因由保守区和可变区组成 ,在细菌中高度保守。r RNA基因包含 5’端到 3’端的若干种成分 ,分别是 16 Sr DNA、间区、2 3Sr DNA、间区和 5Sr DNA。16 S- 2 3Sr DNA间区近年来在细菌系统发育学 ,特别是相近种和菌株的区分和鉴定方面倍受关注。作为细菌分类和鉴定中的一个热点 ,本文将就 16 S- 2 3Sr DNA间区的一些特性及其在细菌分类鉴定方面的作用做一简要的介绍。 展开更多
关键词 细菌系统发育学 16SRRNA基因 23SrRNA基因 16S-23srdna间区
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16S-23SrDNA间隔区序列寡核苷酸探针对结核患者痰标本的检测
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作者 张灵霞 庄玉辉 +2 位作者 杨华卫 李邦印 夏湘萱 《广东医学》 CAS CSCD 2000年第8期659-660,共2页
目的 应用结核分枝杆菌特异的寡核苷酸探针杂交检测结核患者痰标本中的结核分枝杆菌 ,以评价其在临床应用中的价值。方法 对生物素标记 5’ -端的一个 2 0bp的寡核苷酸探针的敏感性、特异性的研究 ,并应用该探针对 90例结核患者和 3 ... 目的 应用结核分枝杆菌特异的寡核苷酸探针杂交检测结核患者痰标本中的结核分枝杆菌 ,以评价其在临床应用中的价值。方法 对生物素标记 5’ -端的一个 2 0bp的寡核苷酸探针的敏感性、特异性的研究 ,并应用该探针对 90例结核患者和 3 0例非结核患者痰标本进行了检测。结果 寡核苷酸探针分别检测基因组DNA、3 5 0bpPCR扩增产物、2 5 0bpPCR扩增产物的敏感性分别为 5 5ng ,0 .5ng ,0 .1ng。探针检测特异性实验表明探针检测基因组DNA、3 5 0bpPCR扩增产物特异性较差 ,检测 2 5 0bpPCR扩增产物则只与结核分枝杆菌杂交。探针检测 90例结核患者痰标本结果表明 :探针杂交检测临床标本基因组DNA、3 5 0bpPCR扩增产物、2 5 0bpPCR扩增产物的阳性率分别为 3 3 %、83 %、80 % ,而扩增产物电泳阳性率为 64 %。寡核苷酸探针与 3 0例非结核患者痰标本基因组DNA及PCR扩增产物杂交则全为阴性。结论 寡核苷酸探针化学发光检测临床标本 2 5 0bpPCR扩增产物 ,能提高结核患者痰标本检测的敏感性与特异性。 展开更多
关键词 结核病 16S23srdna间隔区 寡核苷酸探针
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16S~23SrDNA间隔区分析在分枝杆菌鉴定中的应用研究
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作者 张灵霞 庄玉辉 《临床肺科杂志》 2000年第4期243-244,共2页
关键词 分枝杆菌 间隔区序列 23srdna 结核分枝杆菌 退火温度 凝胶电泳 胞内分枝杆菌 临床分离株 分类鉴定 菌种鉴定
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基于23SrDNA基因的病原细菌通用检测寡核苷酸芯片 被引量:6
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作者 宋亚军 王津 +4 位作者 翟俊辉 郭兆彪 张敏丽 韩俊 杨瑞馥 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2002年第3期168-171,共4页
目的 :利用新兴的生物芯片技术 ,以细菌 2 3SrDNA基因为靶序列 ,实现常见病原细菌的通用检测。方法 :从核酸数据库中调用一些病原细菌的 2 3SrDNA基因序列 ,在指定的片段内设计目的细菌的种特异性寡核苷酸探针 ,用适当的方法固定在玻片... 目的 :利用新兴的生物芯片技术 ,以细菌 2 3SrDNA基因为靶序列 ,实现常见病原细菌的通用检测。方法 :从核酸数据库中调用一些病原细菌的 2 3SrDNA基因序列 ,在指定的片段内设计目的细菌的种特异性寡核苷酸探针 ,用适当的方法固定在玻片上 ,制备寡核苷酸芯片 ;扩增实验细菌 2 3SrDNA基因片段 ,并同时完成荧光素的掺入标记 ,标记扩增产物纯化后 ,与芯片进行杂交 ,根据杂交结果进行条件优化及芯片评价。结果 :通过对探针、固定化、标记、杂交等条件进行优化 ,本实验中所使用的多种实验细菌可以在 4h左右通过杂交得到准确鉴定 ;以奇异变形杆菌为对象 ,本系统最低检出菌液浓度为 10 0个 ml,即反应体系中含 10个菌体即可检出。结论 :本研究建立的寡核苷酸芯片系统可以稳定而特异地实现多种细菌的通用检测 ,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 寡核苷酸芯片 病原细菌 探针 23srdna
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16S~23SrDNA内转录间隔区序列聚合酶链技术鉴定凝固酶阴性葡萄球菌 被引量:2
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作者 李奕 沈叙庄 +3 位作者 底建辉 甄景慧 张美和 杨永弘 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期578-581,共4页
目的 采用分子生物学技术鉴定凝固酶阴性葡萄球菌 (CNS)。方法 用 16S~2 3SrDNA内转录间隔区序列PCR(ITS PCR)技术 ,对 6株质控菌和 171株已通过AutoScan 4微生物分析仪鉴定过的CNS临床分离株进行分型鉴定。结果 质控菌株及经APISt... 目的 采用分子生物学技术鉴定凝固酶阴性葡萄球菌 (CNS)。方法 用 16S~2 3SrDNA内转录间隔区序列PCR(ITS PCR)技术 ,对 6株质控菌和 171株已通过AutoScan 4微生物分析仪鉴定过的CNS临床分离株进行分型鉴定。结果 质控菌株及经APIStaph系统确证的 11种CNS得到各自不同的ITS PCR电泳类型 ,建立了该技术在本实验室的CNS初级数据库 ,包括表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、腐生葡萄球菌、木糖葡萄球菌、华纳葡萄球菌、头部葡萄球菌、孔氏葡萄球菌解脲亚种、松鼠葡萄球菌、耳葡萄球菌和模仿葡萄球菌。只有松鼠葡萄球菌表现了多态性。该ITS PCR数据库对所研究的临床株的识别率为 93 5 7% (16 0 / 171) ,准确率达 93 75 % (15 0 / 16 0 )。APIStaph系统证明 ,ITS PCR法鉴定结果较为准确 ,AutoScan 4微生物分析仪检测CNS至少有 9 36 % (16 / 171)是不确切的。结论 ITS PCR证明是一项有价值 ,对CNS可选用的简便、快速、可靠 ,廉价的分子生物学鉴定技术。 展开更多
关键词 CNS 凝固酶阴性葡萄球菌 聚合酶链 内转录间隔区 PCR 溶血葡萄球菌 23srdna 松鼠 16S-23S 微生物分析
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Identification of Streptococcus species and Haemophilus influenzae by direct sequencing of PCR products from 16S-23SrDNA intergenic spacer regions
6
作者 鲁辛辛 杨持 +1 位作者 黎琳 杨宏欣 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2002年第9期1425-1427,共3页
目的利用16S-23SrRNA间区的特征建立一种简单、快速的细菌分类方法.方法以化脓性链球菌16SrRNA的3'端和23SrRNA的5'端的保守区中合成3对引物,PCR扩增16S-23SrDNA ISRs,纯化后直接测序,在GenBank上查找对应细菌的ISRs序列.用DNA... 目的利用16S-23SrRNA间区的特征建立一种简单、快速的细菌分类方法.方法以化脓性链球菌16SrRNA的3'端和23SrRNA的5'端的保守区中合成3对引物,PCR扩增16S-23SrDNA ISRs,纯化后直接测序,在GenBank上查找对应细菌的ISRs序列.用DNAMAN软件进行系统进化分析.结果链球菌属为单拷贝16S-23SrRNA ISRs片段,编码1个tRNAAla基因.流感嗜血杆菌各生物型出现2个大小相似的ISRs片段.与GenBank上的资料比较,7株链球菌归属5个种,流感嗜血杆菌均为b型.结论 ISRs作为细菌分类新的目标基因具有属、种、型和株特异性与灵敏性. 展开更多
关键词 链球菌 流感嗜血杆菌 16S-23srdna间区 序列分析
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Identification of Streptococcus species and Haemophilus influenzae by direct sequencing of PCR products from 16S-23SrDNA intergenic spacer regions
7
作者 鲁辛辛 杨持 +1 位作者 黎琳 杨宏欣 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2002年第9期135-137,158,共3页
Objective To set up a rapid and simple method for identificating bacteria by 16S 23SrDNA intergenic spacer regions (ISRs) Methods Polymorphic products of PCR from ISRs were selected on agarose gel and sequenced ... Objective To set up a rapid and simple method for identificating bacteria by 16S 23SrDNA intergenic spacer regions (ISRs) Methods Polymorphic products of PCR from ISRs were selected on agarose gel and sequenced directly using purified fragments by excising the gel without cloning Nucleotide sequences were compared with GenBank databases and analyzed by DNAMAN program Results There was only a single product in streptococcus genus after PCR amplification of 16S 23SrDNA ISRs Five streptococcal species were obtained from 7 strains of streptococcus Two major amplicons were consistently generated for 8 strains of Haemophilus influenzae (H influenzae) The sequence data showed that they all belonged to H influenzae type b on GenBank databases Conclusion PCR and direct sequencing of 16S 23SrDNA ISRs were very successful methods for bacterial species identification 展开更多
关键词 identification·streptococcus species·Haemophilus influenzae·16S 23srdna intergenic spacer region
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甘蔗宿根矮化病PCR检测技术优化分析 被引量:13
8
作者 周丹 谢晓娜 +2 位作者 陈明辉 杨丽涛 李杨瑞 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期616-620,共5页
【目的】在PCR的基本程序上,以甘蔗宿根矮化病菌Lxx16S~23S rDNA内部转录间隔区特异性引物,优化PCR反应条件,以建立稳定、快速、灵敏度高的甘蔗宿根矮化病PCR检测技术。【方法】以Lxx基因组DNA为模板,采用TaKaRa的Ex Taq Polymerase和2... 【目的】在PCR的基本程序上,以甘蔗宿根矮化病菌Lxx16S~23S rDNA内部转录间隔区特异性引物,优化PCR反应条件,以建立稳定、快速、灵敏度高的甘蔗宿根矮化病PCR检测技术。【方法】以Lxx基因组DNA为模板,采用TaKaRa的Ex Taq Polymerase和2×GCBufferⅡ,调整退火温度和引物浓度等主要因子,优化PCR反应体系;稀释Lxx基因组DNA模板的浓度,检测优化PCR的灵敏度;用优化的PCR对田间生长的甘蔗品种GT11叶片总DNA进行RSD测定。【结果】优化的PCR得到清晰特异的条带为Lxx16S~23S rDNA内部转录间隔区序列;能从稀释1000倍的Lxx基因组DNA(15.9pg/μL)中检测到Lxx,而常规的PCR只能从稀释100倍的Lxx基因组DNA(159pg/μL)中检测到Lxx,且出现假阴性,不稳定。对田间生长的甘蔗品种GT11叶片总DNA进行PCR检测,结果用优化后的PCR检测RSD感染率为66.7%,而常规的PCR检测RSD感染率为0。【结论】优化的PCR体系为:2×GCBufferⅡ12.5μL,Ex Taq DNA酶(5U/μL)0.2μL;dNTP(2.5mmol/L)1.5μL;Lxx1(10μmol/L)1.0μL,Lxx2(10μmol/L)1.0μL,DNA模板1.0μL,用ddH2O双蒸水补足至25.0μL。PCR反应程序为:95℃预变性10min,94℃15s,57℃15s,72℃30s,40个循环;72℃延伸10min。优化的PCR比常规PCR的灵敏度高、结果稳定、检测效率高,更适合于田间大批量样品快速检测。 展开更多
关键词 甘蔗 宿根矮化病 PCR检测 16S^23srdna 优化体系
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沙冬青根瘤菌遗传多样性和系统发育分析 被引量:7
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作者 毕江涛 贺达汉 +2 位作者 陈卫民 谢瑞梅 韦革宏 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期695-703,共9页
利用16S rDNA RFLP、16S-23S rDNA RFLP和16S rDNA序列分析方法,对分离自宁夏和内蒙古阿拉善地区的沙冬青根瘤菌进行了遗传多样性和系统发育分析。结果表明,分离自不同地区沙冬青根瘤菌的44株测试菌株分别归属于中慢生根瘤菌属(Mesorhiz... 利用16S rDNA RFLP、16S-23S rDNA RFLP和16S rDNA序列分析方法,对分离自宁夏和内蒙古阿拉善地区的沙冬青根瘤菌进行了遗传多样性和系统发育分析。结果表明,分离自不同地区沙冬青根瘤菌的44株测试菌株分别归属于中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium)、叶杆菌属(Phylobacterium)、中华根瘤菌属(Sinorhizobium)、根瘤菌属(Rhizobium)、土壤杆菌属(Agrobacterium)5个属种。受寄主和地理环境因素的影响,沙冬青根瘤菌具有丰富的遗传多样性。 展开更多
关键词 沙冬青 根瘤菌 16SrDNA RFLP 16S^23srdna RFLP 序列分析 遗传多样性 系统发育树
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斜茎黄芪根瘤菌的16S rDNA和23S rDNA PCR-RFLP比较分析 被引量:13
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作者 高俊莲 陈文新 ZewduTerefeworkKristinaLindstrom 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期120-125,共6页
在表型性状数值分析和AFLP指纹图谱分析的基础上,选取54株斜茎黄芪根瘤菌的代表菌株及已知根瘤菌参比菌株,进行16SrDNA和23SrDNA的PCR-RFLP比较分析。结果表明斜茎黄芪根瘤菌具有极大的系统发育多样性,... 在表型性状数值分析和AFLP指纹图谱分析的基础上,选取54株斜茎黄芪根瘤菌的代表菌株及已知根瘤菌参比菌株,进行16SrDNA和23SrDNA的PCR-RFLP比较分析。结果表明斜茎黄芪根瘤菌具有极大的系统发育多样性,分别具有24个16SrDNA遗传图谱类型和22个23SrDNA遗传图谱类型,16SrDNA与23SrDNAPCR-RFLP聚类分析树状图谱有较好的一致性,但也存在一些差异。在对较大类群的划分上,它们的结果与表型性状数值分析结果有较好的一致性。将16SrDNA和23SrDNAPCR-RFLP分析数据合并在一起进行分析时,得出26个综合遗传图谱类型和1个综合聚类分析树状图谱。很明显,16SrDNA与23SrDNA的合并,能够得出更可靠的系统发育结论。 展开更多
关键词 16SrDNA 23srdna PCR 斜茎黄芪 根瘤菌
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基于TaqMan探针的幽门螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:9
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作者 石建玲 程波 +4 位作者 刘珊 吴西钊 权兰菊 丁姗姗 孙锁柱 《中国实验诊断学》 2013年第6期986-989,共4页
目的探讨基于TaqMan探针的幽门螺杆菌23SrDNA基因片段的实时荧光定量PCR检测的有效方法。方法根据幽门螺杆菌23SrDNA序列设计引物和探针,构建质粒标准品,建立实时荧光定量PCR体系并进行方法学评价,并对2012年5月至10月收集的100份临床... 目的探讨基于TaqMan探针的幽门螺杆菌23SrDNA基因片段的实时荧光定量PCR检测的有效方法。方法根据幽门螺杆菌23SrDNA序列设计引物和探针,构建质粒标准品,建立实时荧光定量PCR体系并进行方法学评价,并对2012年5月至10月收集的100份临床样本进行检测同时应用免疫组化及银染方法进行比较分析。结果建立了检测23SrDNA的实时荧光定量PCR方法:107-102copies/ul范围内均有"S"型扩增曲线,最低检测浓度为102copies/ul,标准曲线相关系数为1。对临床其它消化道病原体不出现特异性的扩增曲线。对100份样本进行检测,实时荧光定量PCR能检出31份阳性,而免疫组化方法能检出25份阳性,银染方法能检出28份阳性。结论实时荧光定量PCR方法可成功检测幽门螺杆菌,且该方法具有灵敏度和特异性高及重复性好等优点。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 实时荧光定量PCR 23srdna
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二重PCR方法鉴别气肿疽梭菌和腐败梭菌 被引量:6
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作者 彭小兵 李旭妮 +3 位作者 王楠 何宇 丁家波 蒋玉文 《中国兽药杂志》 2011年第3期20-22,共3页
用包含16S~23S rDNA间隔区和23S rDNA的部分序列作为气肿疽梭菌特异性标志,以α毒素部分序列作为腐败梭菌特异性标志,建立了鉴别气肿疽梭菌和腐败梭菌的二重PCR方法。结果显示:气肿疽梭菌C54-1株扩增出大小为509 bp的条带,腐败梭菌C55-... 用包含16S~23S rDNA间隔区和23S rDNA的部分序列作为气肿疽梭菌特异性标志,以α毒素部分序列作为腐败梭菌特异性标志,建立了鉴别气肿疽梭菌和腐败梭菌的二重PCR方法。结果显示:气肿疽梭菌C54-1株扩增出大小为509 bp的条带,腐败梭菌C55-1株、C55-16株均扩增出大小为148 bp的条带,均与预期吻合;而产气荚膜梭菌C57-1株、C59-37株,肉毒梭菌C62-4株,诺维梭菌C61-4株均未扩增出任何条带。扩增产物的测序结果进一步证实了本方法的特异性。菌株的生物学特性试验结果也符合相应气肿疽梭菌和腐败梭菌的特点。本研究所建立的二重PCR方法可用于气肿疽梭菌和腐败梭菌的快速鉴定。 展开更多
关键词 气肿疽梭菌 腐败梭菌 16S^23srdna 二重PCR
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坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)16S—23S rDNA间区的克隆及多态性分析 被引量:1
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作者 王海亮 李赟 +2 位作者 董萍萍 宋晓玲 黄倢 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期519-524,共6页
采用16S和23SrDNA保守区设计的引物对两株坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)16S—23SrDNA间区(Intergenic spacer region,ISR)进行了PCR扩增,并克隆到pMD18-T载体上进行测序;利用生物信息学进行了16S—23SrDNA间区序列及其内所含tRNA基因... 采用16S和23SrDNA保守区设计的引物对两株坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)16S—23SrDNA间区(Intergenic spacer region,ISR)进行了PCR扩增,并克隆到pMD18-T载体上进行测序;利用生物信息学进行了16S—23SrDNA间区序列及其内所含tRNA基因的分析。2株坚强芽孢杆菌共得到11条16S—23SrDNA间区特征区带(包括300、400、500和600bp等)序列,ISR类型包括ISR0、ISRG、ISRIA和ISRGLV四种,其中ISR0、ISRG和ISRIA可能在坚强芽孢杆菌中普遍存在。相同类型的ISR序列具有较高的相似性(达52.2%—100.0%),而不同类型的ISR序列间差异较大。此外,ISR序列在靠近16S和23S区域存在不同长度的保守区域,可能成为针对坚强芽孢杆菌特异性检测的引物和探针的靶区,这也为坚强芽孢杆菌新的检测方法的建立奠定了基础。坚强芽孢杆菌的16S—23SrDNA间区序列及其多态性分析均为首次报道。 展开更多
关键词 坚强芽孢杆菌 16S-23srdna间区 TRNA基因 多态性分析
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甘蔗宿根矮化病菌PCR检测体系的优化与应用
14
作者 李文凤 卢文洁 +3 位作者 黄应昆 王明强 王晓燕 罗志明 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期598-601,共4页
为建立能快速灵敏检测甘蔗宿根矮化病(ratoon stuning disease,RSD)的PCR检测方法。本文通过改进模板DNA的制备方法,在PCR基本程序的基础上,以甘蔗宿根矮化病菌(Leifsonia xyli subsp.xyli,Lxx)16S-23SrDNA基因间隔区特异性引物,调整PC... 为建立能快速灵敏检测甘蔗宿根矮化病(ratoon stuning disease,RSD)的PCR检测方法。本文通过改进模板DNA的制备方法,在PCR基本程序的基础上,以甘蔗宿根矮化病菌(Leifsonia xyli subsp.xyli,Lxx)16S-23SrDNA基因间隔区特异性引物,调整PCR扩增反应体系各组分的浓度、反应的退火温度、循环参数等主要因子,优化PCR反应体系。此检测体系能从感染RSD的样品中扩增出大小为438 bp的特异性片段,而阴性对照和未感染样品则未扩增出任何片断;未优化仅从稀释30倍的蔗汁总DNA中扩增出RSD的特异性片段,优化后可以从稀释3 000倍的蔗汁总DNA中扩增出RSD的特异性片段。对31份田间采集样品检测,未优化的阳性检出率为32.26%;优化后阳性检出率74.19%,与I-ELISA检测结果一致。应用此检测方法可稳定、快速地检测出蔗株是否感染RSD,且检测效率高,适合于田间大批量样品快速检测。 展开更多
关键词 甘蔗宿根矮化病菌 PCR检测 16S-23srdna 间接酶联免疫吸附法
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青花菜黑腐病致病菌的分离和鉴定 被引量:4
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作者 刘莉莉 文正华 +5 位作者 单晓政 张文慧 贺丽霞 宋文芹 孙德岭 江汉民 《中国瓜菜》 CAS 北大核心 2018年第7期18-22,共5页
黑腐病是影响青花菜生产的主要病害之一,为了更好地研究该致病菌的致病机制和十字花科蔬菜对其抗性的分子机制,从发病田间采集具有典型症状的病害标样,对病原菌进行分离、纯化,并对其形态特征、理化特性和致病性进行了分析,同时测定了... 黑腐病是影响青花菜生产的主要病害之一,为了更好地研究该致病菌的致病机制和十字花科蔬菜对其抗性的分子机制,从发病田间采集具有典型症状的病害标样,对病原菌进行分离、纯化,并对其形态特征、理化特性和致病性进行了分析,同时测定了该菌株23S rDNA和hrcC基因序列,分析了与近缘细菌23S rDNA和hrcC基因序列的同源性,构建了系统发生树,比较了2种基因对相似细菌的检测和鉴别能力,结果表明,hrcC基因用于该致病菌的鉴定更具优越性。根据分离菌的表型特征及分子特征,判定该分离菌为青花菜黑腐病的致病菌-野油菜黄单胞杆菌野油菜致病变种。 展开更多
关键词 青花菜 黑腐病 23S RDNA hrcC基因
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牡丹江野生鹿血中伯氏疏螺旋体分子检测
16
作者 于昕宇 胡阳 +3 位作者 樊佳鹏 邓小丽 王春仁 常巧呈 《吉林畜牧兽医》 2021年第6期1-2,共2页
为了解牡丹江地区野生鹿自然感染伯氏疏螺旋体的情况,2019年6月间在牡丹江海林市采集20份野生鹿血标本,应用普通PCR对鹿血标本进行5S-23S基因片段的扩增和测序,并将所得序列与Gen Bank中的项序列进行分析。结果检出7份阳性样本,阳性率为... 为了解牡丹江地区野生鹿自然感染伯氏疏螺旋体的情况,2019年6月间在牡丹江海林市采集20份野生鹿血标本,应用普通PCR对鹿血标本进行5S-23S基因片段的扩增和测序,并将所得序列与Gen Bank中的项序列进行分析。结果检出7份阳性样本,阳性率为35%,序列分析发现伯氏疏螺旋体在有2个基因型,分别是Borreliella afzelii和Borreliella garinii。研究结果表明,该地区野生鹿存在伯氏疏螺旋体自然感染。 展开更多
关键词 鹿 伯氏疏螺旋体 核糖体5S-23srdna 序列分析
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甜樱桃流胶病原菌的分子鉴定和致病性检测 被引量:9
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作者 徐丽 王甲威 +3 位作者 陈新 魏海蓉 宗晓娟 刘庆忠 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期350-355,共6页
为明确甜樱桃流胶病的病原菌,采用普通细菌学方法从15个病样中分离获得10个代表性菌株,对病原菌的形态学特征、生理生化特性以及致病性进行了研究。利用PCR对菌株的16S-23S rDNA转录间隔区(ITS)序列进行扩增,扩增产物克隆测序,结果显示... 为明确甜樱桃流胶病的病原菌,采用普通细菌学方法从15个病样中分离获得10个代表性菌株,对病原菌的形态学特征、生理生化特性以及致病性进行了研究。利用PCR对菌株的16S-23S rDNA转录间隔区(ITS)序列进行扩增,扩增产物克隆测序,结果显示该菌株属于丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)。用Meg Align构建系统发育树,结果显示该菌株与丁香假单胞菌丁香致病变种(P.syringae pv.syringae)亲缘关系最近,两者最先聚在一起。分离菌株中均可检测到syr B基因。研究结果表明P.syringae pv.syringae为甜樱桃流胶病的病原菌。 展开更多
关键词 甜樱桃流胶病 丁香假单胞菌丁香致病变种 16S-23srdna转录间隔区序列 致病性 syrB基因
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滇南森林土样中的Actinobacteria的分离、快速鉴别及初步鉴定
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作者 张玉琴 李文均 +2 位作者 陈国忠 徐丽华 姜成林 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2004年第B07期203-207,共5页
Actinobacteria是一类极具开发潜力的微生物资源.Actinobacteria的23SrRNA既有高度的保守性,又有较好的可变性,体外PCR扩增Actinobacteria的23SrDNA的稳定插入片段可有效地对放线细菌进行识别.本研究中结合了16SrDNA部分序列分析对其中9... Actinobacteria是一类极具开发潜力的微生物资源.Actinobacteria的23SrRNA既有高度的保守性,又有较好的可变性,体外PCR扩增Actinobacteria的23SrDNA的稳定插入片段可有效地对放线细菌进行识别.本研究中结合了16SrDNA部分序列分析对其中9株Actinobacteria菌株进行了初步鉴定,随后又对菌株YIM70056进行了多相分类学研究,最终确定该菌株是红球菌属的一个新种,我们将其命名为云南红球菌. 展开更多
关键词 Actinobacteria分离 23srdna PCR 快速识别 微生物资源 云南红球菌
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