肺炎支原体23SrRNA基因突变及其所致肺炎的临床分析

目的了解肺炎支原体23SrRNA基因突变现状,提高对肺炎支原体大环内酯类抗生素耐药基因突变所致肺炎的临床认识和诊治水平。方法对2009年5月至2009年10月我院住院的肺炎支原体肺炎患儿咽试子标本,应用巢式PCR扩增23SrRNA基因并进行电泳检测及DNA测序分析,筛选突变株;并进行总结和分析临床特点。结果应用巢式PCR扩增23SrRNA测出基因序列45例,均存在大环内酯类抗生素耐药基因突变。且变异基因位点均为2063位A→G的点突变,其中2例为2063位点A/G双峰;临床特点表现为91.1%患儿持续性发热伴咳嗽,以中、高度热为主。68.9%外周血白细胞总数正常;45例患儿肺部影像资料显示,双肺炎症14例,大叶性肺炎7例,伴胸腔积液6例。20例有肺外合并症;45例应用红霉素静注治疗有效率91.1%。结论肺炎支原体大环内酯类抗生素作用位点之一23SrRNA 2063普遍存在突变,其所致肺炎的临床表现无特异性;应用大环内酯类抗生素治疗91.1%有效,肺炎支原体此位点突变与其在体内是否耐药尚需进一步研究。

5s-23srRNA基因间隔区RELP分析对莱姆病病例尿标本的检测

作者对来自牡丹江市林业医院和海林林场的34份尿液标本进行了5s－23srRNA基因间隔区RFLP分析，并将PCR检测和血清学检测的结果进行比较。结果表明：8个病人PCR检测结果阳性，7个病人感染了B.garinii（第二基因种）、1个病人感染了B．afzelii（第三基因种），同当地媒介生物中的优势基因种相同；血清学和PCR检测在对病人进行诊断时有互相弥补的作用。5s－23srRNA基因间隔区RFLP分析方法有望在研究临床表现和基因种的关系及流行病学调查中得到广泛应用。

支原体DNA载量和耐药基因23SrRNA的2063和2064位点突变检测在儿童支原体肺炎诊疗的应用

目的了解支原体DNA载量和耐药基因23SrRNA的2063和2064位点突变检测在肺炎支原体肺炎(MPP)的早期诊断和大环内酯类药物耐药应用情况分析。方法收集2017年3月至2019年9月昆明医科大学第一附属医院儿科因下呼吸道感染住院患儿224例为研究对象,其中男122例,女102例。年龄1~13岁,平均(5.57±3.34)岁,入院24 h严格规范采集痰液和咽拭子的标本并及时送检。采用PCR法检测MP-DNA阳性率及耐药基因23SrRNA的2063和2064位点突变情况,并对临床资料进行统计分析。结果224例下呼吸道感染患儿中,MP感染71例,感染率为31.69%,不同年龄组间MP感染率比较差异有统计学意义(P<0.05),且感染率随着年龄的增长而升高;不同性别患儿MP阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。其中检出MP-DNA阳性27人,阳性率:38%,其中检出23SrRNA的2063和2064位点突变耐药基因19人。灵敏度为70.4%,特异度为100%,结论采用PCR法对呼吸道分泌物MP-DNA载量的检测在儿童MPP早期诊断中因特异性和敏感性高、简便易行、儿童依从性好等特点得到推广,同时检测呼吸道分泌物MP耐药基因23SrRNA的2063和2064位点突变检测及时指导治疗值得肯定。

粪便23SrRNA基因检测在幽门螺杆菌感染中的应用及克拉霉素耐药性分析

目的探究粪便23SrRNA基因检测在幽门螺旋杆菌(Hp)感染中应用,并分析克拉霉素耐药性。方法选郑州市中医院2020年6月至2022年5月期间98例消化性溃疡患者,所有患者均接受胃黏膜组织活检药敏试验、粪便23SRNA基因阳性检出率。结果经胃黏膜组织活检,共检出59例Hp阳性;经粪便23SrRNA共检出73例阳性,粪便23SrRNA对Hp阳性检出率较胃黏膜组织活检高(χ^(2)=4.547,P=0.033<0.05);两种诊断方法Kappa为0.63,一致性中等;经粪便23SrRNA检测结果为Hp阳性患者中,经药敏试验确认耐药12例、敏感45例;经粪便23SrRNA检测结果确认耐药14例、敏感43例,其耐药率、敏感率之间相比均未见统计学意义(χ^(2)=0.199,P=0.655>0.05);两种诊断方法Kappa为0.73,一致性较强;突变位点中,2143、2142、2097突变率分别为16.44%、10.96%、5.48%、1.37%。结论粪便23SrRNA对Hp阳性检出率高于胃黏膜活检Hp培养高,克拉霉素耐药率与药敏试验结果相近,提示可将其应用于Hp感染及克拉霉素耐药性分析检验中,为临床治疗方案制定提供更准确参考依据。

羊种布氏菌体外药物敏感性分析

目的了解羊种布氏菌对常用抗生索的耐药情况及耐药机制。方法用微量稀释法对国内分离的69株羊种布氏菌进行12种抗生素(阿奇霉素、克拉霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、多西环素、利福平、头孢曲松、复方新诺明、链霉素)的耐药检测。结果除了阿奇霉素和克拉霉素外,所有羊种布氏菌对另外10种抗生素均敏感。所有菌株23SrRNA都具有单核苷酸多态性2632 T/C。结论 23SrRNA转肽酶中心点突变是羊种布氏菌耐大环内酯类耐药的机制之一。尽管布氏菌耐药尚未对布病防控构成威胁,但还需开展耐利福平监测工作。

24例23SrRNA A2063G基因突变肺炎支原体肺炎临床分析

目的 分析23SrRNA A2063G基因突变引起肺炎支原体肺炎（MPP）的临床特征，从而提高对该疾病的诊治能力。方法 对36例MPP患儿痰标本进行MP-DNA及23SrRNA基因测序，检测耐药基因，在此基础上分为24例大环内酯类耐药组与12例大环内酯类敏感组。比较两组患儿的临床表现、实验室检查、影像学、治疗等资料。结果 36例MPP患儿中24例检出大环内酯类抗生素耐药基因，均为23SrRNA V区A2063G突变，12例为大环内酯类敏感组。大环内酯类耐药组患儿在住院时间（P＝0.025），总咳嗽时间（P＝0.035），总发热时间（P＝0.008），抗生素治疗后发热时间（P＝0.010）及病程（P＝0.048）方面均高于大环内酯类敏感组。大环内酯类耐药组患儿白细胞计数及CRP较大环内酯类敏感组更高。大环内酯类耐药组12例患儿仅应用大环内酯类治疗5 d内体温消退，3例需改用喹诺酮类抗感染；另10例联合激素，6例加用静脉丙种球蛋白，所有患儿预后良好。大环内酯类敏感组8例患儿在大环内酯类治疗后12 h～3 d体温消退。结论 相比大环内酯类敏感组，23SrRNA A2063G基因突变引起的耐药MPP患儿在住院时间、总咳嗽时间、总发热时间和抗生素治疗后发热时间、病程上更长，白细胞计数及CRP更高。大环内酯类抗生素对部分耐药MPP治疗有效，病情严重者需联合糖皮质激素和静脉丙种球蛋白或根据病情酌情更改抗生素。

肺炎支原体23S rRNA基因测序分析的临床应用价值

目的:探讨儿童呼吸道肺炎支原体(MP) 23S rRNA基因测序分析的临床应用价值。方法:收集MP荧光定量PCR≥1×10~4拷贝数的痰或咽拭子样本,行23S rRNA基因V区测序,并按测序结果将患儿分为突变组和未突变组,比较两组患儿的临床资料;将相同样本行体外培养加药敏实验,与测序进行比较。结果:共收集120例样本,98例23S rRNA基因发生2063位点A-> G突变(突变组),22例未检测到突变(未突变组)。两组患儿在性别、年龄、急性期外周血白细胞等一般资料无显著差异,但住院时间、总发热时间、大环内酯类药物治疗后退热时间、咳嗽时间及疗程方面存在统计学差异,且突变组患儿肺外并发症及大叶性肺炎实变率高于未突变组(P <0. 05)。120例样本中48例MP体外培养阳性(阳性率40%),其中20例检出大环内酯类耐药,耐药率为16. 67%,显著低于23S rRNA基因突变率(P <0. 05)。结论:MP 23S rRNA基因突变率较高。突变组临床症状重、疗程长、并发症多,提示基因突变与MP耐药存在相关性。相对于基因测序,体外培养加药敏实验阳性率及耐药率较低。MP 23S rRNA基因测序可作为耐药检测的手段,具有一定的临床价值。

我国临床分离葡萄球菌对利奈唑胺敏感性下降的机制研究

目的研究我国2017-2018年度临床分离葡萄球菌对利奈唑胺敏感性下降的机制。方法用琼脂二倍稀释法测定葡萄球菌对抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),提取利奈唑胺MIC处于敏感上限的菌株(MIC≥4μg·mL-1)的DNA,用聚合酶链反应扩增利奈唑胺耐药基因、核糖体23SrRNA、核糖体L蛋白,并对聚合酶链反应产物进行测序和分析。结果 2017-2018年度利奈唑胺MIC≥4μg·mL-1的葡萄球菌有39株,其中34株为金黄色葡萄球菌,5株为头状葡萄球菌。5株头状葡萄球菌核糖体23SrRNA均发生G2576T突变;有1株金黄色葡萄球菌和2株头状葡萄球菌携带cfr基因;在15株菌株中检测到L蛋白突变。结论核糖体23SrRNA突变和cfr基因是导致利奈唑胺敏感性下降的主要机制,利奈唑胺敏感性下降需引起重视。