维生素D联合卤米松治疗25-羟维生素D_(3)低下轻中度斑秃疗效观察

目的观察口服维生素D联合卤米松乳膏外用治疗25-羟维生素D_(3)[25-(OH)D_(3)]低下轻中度斑秃(AA)的疗效。方法将2019年4月至2021年4月遵义医科大学第三附属医院收治的45例25-(OH)D_(3)低下的AA患者随机分为2组。对照组(n=21)患者外用卤米松乳膏每天2次,研究组(n=24)患者在外用卤米松乳膏基础上,每天口服维生素D滴剂,治疗12周后分析2组患者总有效率、不良反应及短期复发情况。结果研究组总有效率为87.5%,高于对照组的61.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。2组均未发生严重的不良反应。研究组无短期复发,对照组复发3例,2组复发率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论口服维生素D滴剂联合卤米松乳膏治疗25-(OH)D_(3)低下的AA疗效显著,且无明显不良反应,复发率低。

Molecular mechanism of the effects of 1,25-dihydroxyvitaminn D_3 and its novel analogues on proliferation and differentiation of a human megakaryoblastic leukemia cell line

Our previous studies revealed that 1, 25-dihydroxyvrtamin D_3[1, 25 (OH)_2, D_3] and its two novel analogues (MC903 and EB1089) play an important role in the modulation of proliferation and differentiation of a newly established human megakaryoblastic leu

血清中维生素D活性代谢物的LC-MS/MS定量方法研究

目的1α,25-二羟基维生素D_(3)是维生素D的活性代谢产物。但该物质在人血清中的含量非常低,常规的检测方法无法准确定量。建立并验证一种准确、选择性高、快速定量1α,25-二羟基维生素D3的液质联用方法,对满足临床研究、临床诊断的需求非常有帮助。方法因该分析物为内源性物质,方法中采用自配并经过验证的替代基质配制标准曲线和质控品。人血清样品经过液液萃取纯化,用衍生化试剂消除内源性干扰,再进行衍生化反应以提高灵敏度。采用反相柱分离,质谱电喷雾电离源正离子模式采集,离子对为574.3→314.3和577.4→317.2的多反应监测(MRM)模式,监测1α,25-二羟基维生素D3和内标。在15~1000 pg/mL范围内线性良好,最低定量限(LLOQ)为15 pg/mL。结果经过方法学验证,分析物的精密度和准确度(日内及日间)偏差均满足±20%以内的要求。血清样品稳定性实验结果良好,满足评判标准。结论该方法准确、稳定,具有耐用性及灵敏度高等优点,适用于临床样品的分析。

慢性肾脏病3～5期非透析患者25(OH)D与1,25(OH)_2D水平的相关性及影响因素

目的调查慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)3～5期非透析人群25(OH)D与1,25(OH)2D缺乏的情况,探讨25(OH)D与1,25(OH)2D水平的相关性及影响因素。方法采用放射免疫法检测82例CKD3～5期非透析患者的血浆25(OH)D与1,25(OH)2D水平,采用自动生化分析仪测定血钙、磷、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、血清肌酐(serum creatinine,SCr)、白蛋白(albumin,Alb)、肝功能、血糖等。采用单因素相关分析探讨25(OH)D及1,25(OH)2D水平的相关因素并探讨二者的相关性。采用多因素回归分析探讨25(OH)D水平及1,25(OH)2D水平的独立影响因素。结果 82例CKD3～5期非透析人群25(OH)D水平中位数8.81ng/ml,全距0.34～37.69ng/ml;血浆1,25(OH)2D水平中位数17.14pg/ml,全距1.10～65.40pg/ml。82例患者中25(OH)D不足占15.0%,缺乏占81.3%;1,25(OH)2D缺乏发生率44.0%。CKD3～5期间25(OH)D的水平及缺乏比例差异均无统计学意义(均P>0.05),但是1,25(OH)2D的水平及缺乏比例差异均有统计学意义(均P<0.05)。单因素相关分析提示:血浆25(OH)D水平与血浆Alb和24h尿蛋白定量相关;1,25(OH)2D水平与估算肾小球滤过率(estimatedglomerular filtration rate,eGFR)正相关,与合并糖尿病、血磷负相关;1,25(OH)2D水平与25(OH)D水平正相关。多因素回归分析结果提示:血浆Alb是25(OH)D水平的独立影响因素;血浆25(OH)D水平和eGFR是1,25(OH)2D水平的独立影响因素。结论 CKD3～5非透析患者普遍存在25(OH)D和1,25(OH)2D缺乏。25(OH)D水平与1,25(OH)2D水平具有相关性。血浆Alb是25(OH)D水平的独立影响因素。血浆25(OH)D水平,eGFR是1,25(OH)2D水平的独立影响因素。

血清1,25(OH)_2D和25(OH)D的测定及正常值的建立

目的 建立 1,2 5 (OH) 2 D和 2 5 (OH)D的长沙居民正常值。 方法 选择长沙居民 13 7例 ,年龄 3 0～ 75岁 ,使用RIA方法测定血清上述指标正常值。 结果 两项指标皆随年龄下降 ,对于 2 5 (OH )D ,<40岁 ,40～ 60岁以及>60岁 ,三年龄组分别为 (2 5 .5± 3 .6) ,(2 1.3± 3 .3 )以及 (18.9± 3 .3 )ng/ml ,1,2 5 (OH) 2 D三年龄组分别为 (3 2 .2± 3 .1) ,(2 7.4± 3 .4)以及 (2 5 .7± 3 .7) pg/ml组间有显著差异。 结论 1,2 5 (OH) 2 D和 2 5 (OH)D血清正常值随增龄而下降 ,必须按年龄段分别确定正常值 .

1，25-(OH)2D3在促进大鼠外周血间充质干细胞扩增中的作用

目的:探讨大鼠外周血中是否存在非黏附间充质干细胞(MSCs)以及1,25-(OH)2D3能否刺激它们形成成纤维细胞集落形成单位(CFU-f)。方法:从大鼠外周血中分离单核粒细胞(PBMGC)组份,在缺乏和添加10-8mol/L1,25-(OH)2D3条件下进行贴壁培养。培养至4天和8天时,将未贴壁细胞转移到新的培养皿中继续培养,即:"pour-off"培养,培养16天形成的细胞进行亚甲基蓝染色,计数CFU-f数目,并对4天"pour-off"培养形成的细胞进行免疫细胞化学染色。结果:PBMGC培养及4天和8天非黏附PBMGC培养都能形成CFU-fs,而1,25-(OH)2D3能够明显地促进它们形成CFU-f。非黏附细胞形成的克隆表达波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅲ型胶原,而不表达Ⅰ型胶原。结论:大鼠外周血中存在非黏附MSCs,在体外培养能够形成CFU-fs,而1,25-(OH)2D3具有促进外周血MSC扩增的作用。

天然甾体合成1α,25-二羟基维生素D_3的研究进展

讨论了近年来天然甾体合成 1α ,2 5 二羟基维生素D3

1α,25-二羟维生素D_3对体外培养人输卵管上皮细胞VDR、CaBP-D28k表达的影响

目的:探讨1α,25-二羟维生素D3[1α,25-(OH)2D3]对体外培养人输卵管上皮细胞活性及细胞维生素D受体(VDR)、钙结合蛋白calbindin-D28k(CaBP-D28k)表达的影响。方法:以不同浓度(0,10-10,10-9,10-8,10-7mol/L)1α,25-(OH)2D3处理体外培养人输卵管壶腹部上皮细胞,分别于不同时间收集细胞。应用溴化四唑蓝比色法检测细胞活性,逆转录聚合酶链反应法、免疫印迹法检测细胞VDR、CaBP-D28k mRNA及其蛋白表达。结果:1α,25-(OH)2D3对体外培养人输卵管上皮细胞增殖无影响。以不同浓度1α,25-(OH)2D3处理细胞12 h,与对照组比较,10-7mol/L 1α,25-(OH)2D3组细胞VDR、CaBP-D28k mRNA表达显著增加(P均<0.05)。以10-7mol/L1α,25-(OH)2D3处理细胞不同时间,与对照组比较,处理6h,12h后细胞VDR、CaBP-D28k mRNA表达显著增加(P均<0.05);处理24h,48h后细胞VDR、CaBP-D28k蛋白表达显著增加(P均<0.05)。结论:在体外培养条件下,1α,25-(OH)2D3不影响人输卵管上皮细胞增殖,1α,25-(OH)2D3可能通过VDR上调人输卵管上皮细胞CaBP-D28k的表达。

维生素D受体基因多态性与2型糖尿病及血清1,25-二羟基维生素D_3的相关性研究

目的探讨维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)基因ApaI酶切位点多态性与2型糖尿病及血清1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]的相关性。方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测105例2型糖尿病患者和105例正常者的VDR基因型,用酶联免疫吸附(Elisa)法测定血清1,25(OH)2D3水平,并检测相关临床及生化指标,比较VDR基因型和等位基因频率的分布差异及不同基因型血清1,25(OH)2D3等相关指标的差异。结果维生素D受体基因ApaⅠ位点基因型和等位基因频率在两组中的分布差异明显(P<0.01)。糖尿病组等位基因a和基因型aa频率明显高于对照组。基因型AA组及Aa组血清1,25(OH)2D3高于基因型aa组,而收缩压、舒张压及空腹血糖低于基因型aa组,且差别有显著性意义(P<0.05或0.01)。结论 Apa I位点的VDR基因多态性与2型糖尿病存在相关性。血清1,25(OH)2D3水平、空腹血糖及血压与VDR基因多态性密切相关。

光学活性的19-失碳-1α,25-二羟基维生素D_3 A环关键中间体的合成

报道以价廉易得的Ｄ（＋）木糖为手性源，经５步反应，立体选择性地合成１９失碳１α，２５二羟基维生素Ｄ３Ａ环关键中间体（２Ｓ，４Ｓ）１，５二氯２，４戊二醇（５）的方法．该方法具有收率高。

19-失碳-1α,25-二羟基维生素D_3A环合成子的合成

报道以价廉、易得的D-(-)-奎尼酸为手性源,经9步反应,有效地合成光学活性的19-失碳-1α,25-二羟基维生素D_3A环合成子4的合成方法。

探讨慢性阻塞性肺疾病患者血清中1α,25-二羟维生素D水平及其影响因素

目的 1α,25-二羟维生素D[1α,25(OH)2D3]是维生素D信号生物学功能的主要执行者,其血清水平不仅受其前体25-羟维生素D[25(OH)D]水平的调控,还受体内炎性状态的影响。本研究旨在分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者中血清1α,25(OH)2D3水平及其影响因素。方法收集124例COPD患者和188名健康对照者,采用酶联免疫吸附法检测血清1α,25(OH)2D3及25(OH)D水平,同期收集COPD患者血清C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)、血红蛋白量(Hb)及白蛋白(Alb)等实验室资料。结果经两独立样本t检验,与对照组相比,COPD组中血清1α,25(OH)2D3和25(OH)D平均水平明显降低,分别为:28.33±5.87 vs 30.58±6.48pg/ml,t=3.108,P=0.002;25.73±5.44 vs 27.14±5.89ng/ml,t=2.128,P=0.034。根据患者病程分层分析,与稳定期COPD相比,急性加重期患者中血清1α,25(OH)2D3和25(OH)D平均水平亦显著降低,分别为:27.04±4.67 vs 29.17±5.01pg/ml,t=2.377,P=0.019;24.31±4.22 vs 26.66±4.56ng/ml,t=2.888,P=0.005。采用Spearman相关分析法检验COPD组中血清1α,25(OH)2D3水平的相关影响因素,纳入的变量包括血清25(OH)D水平及CRP、WBC、Hb、Alb等血清学指标。结果显示COPD组中血清1α,25(OH)2D3水平与25(OH)D和CRP呈正相关(r=0.291,P=0.002;r=0.352,P=0.004),与Alb呈负相关(r=-0.346,P=0.001),而与WBC和Hb无关(P>0.05)。结论 COPD患者中血清1α,25(OH)2D3水平与血清25(OH)D、CRP和Alb水平密切相关,并可能影响患者的病程。

1,25-二羟维生素D_3诱导人成骨样细胞模型基质金属蛋白酶-1表达

目的 :研究 1,2 5 -二羟维生素D3 [1α,2 5 -dihydroxyvitaminD3 ,1α,2 5 (OH) 2 D3 ]对人成骨细胞膜型基质金属蛋白酶 - 1(membrane -typematrixmetalloproteinase - 1,MT1-MMP)表达的影响 ,探讨 1α,2 5 (OH) 2 D3 调节骨代谢作用机制。方法 :人成骨细胞用 1α ,2 5 (OH) 2 D3 干预。Western杂交检测MT1-MMP蛋白质表达。MMP - 2活性用ELISA检测。结果 :观察到 1α ,2 5 (OH) 2 D3 诱导成骨细胞MT1-MMP表达呈剂量依赖性 (均P <0 0 5 )。 1α,2 5 (OH) 2 D3 干预 12～ 2 4h促进MT1-MMP表达 (均P <0 0 5 )。 1α,2 5 (OH) 2 D3 促进MMP - 2激活呈剂量依赖性 (均P <0 0 5 )。结论 :由于MT1-MMP在骨重建过程中起着维持骨形成的关键作用 ,1α ,2 5(OH) 2 D3 可通过诱导成骨细胞MT1-MMP表达促进骨形成。此可能为 1α,2 5 (OH) 2 D3 治疗骨质疏松症机理之一。

1,25(OH)_2D_3对人白血病6T-CEM细胞株凋亡及VDR蛋白表达的影响

目的探讨1,25-二羟维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]对人白血病6T-CEM细胞株凋亡及维生素D受体(VDR)蛋白表达的影响。方法培养6T-CEM细胞株,采用随机数字表法将其分为A、B、C、D四组,A、B、C组分别加入浓度为10-6、10-7、10-8mol/L的1,25(OH)_2D_3,D组加入DMSO。采用MTT法检测各组吸光度A值和细胞增殖抑制率情况,AO-EB荧光染色观察各组细胞形态,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,RT-PCR和Western blot法检测VDR mRNA和蛋白表达。结果 A组吸光度A值明显低于B、C组和D组(P<0.05);A、B、C三组的细胞增殖抑制率从高到低依次排序为A>B>C;D组CEM细胞凋亡指数明显低于A、B、C组(P<0.05);A组凋亡指数明显高于其他三组(P<0.05);各组VDR mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);A组VDR蛋白表达明显高于其他三组(P<0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3能有效抑制6T-CEM细胞增殖,诱导其凋亡,上调VDR蛋白表达。

尼尔雌醇对去势雌性大鼠1,25双羟维生素D水平的影响

目的研究卵巢摘除(ovariectomy,OVX)后大鼠血清25(OH)D、1,25双羟维生素D[1,25(OH)2D]水平和骨表型的变化及雌激素干预效果。方法采用6月龄SD雌性大鼠双侧卵巢摘除术建立去势骨质疏松模型并随机分为去势模型组(OVX组)和去势后雌激素干预组(OVX-E组),另设假手术对照组(SHAM组),每组10只。术后5周OVX-E组开始灌服尼尔雌醇(1 mg/kg,2次/周),其他组灌服饮用水作为对照,均给药13周。采用酶免法(EIA)检测血清25(OH)D和1,25(OH)2D水平,用体积骨密度(volume bone mineral density,vBMD)和骨小梁面积(BV/TV)等指标进行骨表型分析。结果 OVX组血清25(OH)D水平保持稳定,与SHAM组比较差异无统计学意义。去势后1,25(OH)2D水平显著升高,OVX组为63.1 pmol/L,较SHAM组的38.5 pmol/L增加了64%(P<0.001)。OVX大鼠骨密度降低,较SHAM组分别减少9.5%(股骨,P<0.001)和9.8%(腰椎,P<0.001)。同时出现骨小梁面积减少和尿吡啶酚增加(58.7%,P<0.05)等骨质疏松表型。口服雌激素后,血清1,25(OH)2D水平较OVX组明显下降60.8%(P<0.001),甚至低于SHAM组(P<0.01),同时延缓骨丢失和改善骨微结构。结论去势影响大鼠维生素D(vitamin D,VD)代谢,致血清1,25(OH)2D水平明显升高,小剂量雌激素对VD代谢改变和骨丢失具有显著纠正作用。

维生素D_(3)在移植免疫中的应用进展

维生素D_(3)是维持人体正常生理功能的重要维生素,其代谢物及类似物具有强大的抗炎活性。维生素D_(3)可在人体内活化转化为类固醇激素1α,25-二羟维生素D_(3),而1α,25-二羟维生素D_(3)可以激活转录因子维生素D受体,参与细胞代谢的调控,发挥免疫调节作用,这对维持机体生理健康至关重要。目前,越来越多的研究认为1α,25-二羟维生素D_(3)在器官移植免疫调节及耐受中具有重要作用。因此,本文就1α,25-二羟维生素D_(3)的概述及生理作用、维生素D_(3)的免疫调节作用及维生素D_(3)在临床器官移植中的应用进行综述,总结维生素D_(3)在诱导移植免疫耐受中的应用价值,以期为促进维生素D_(3)在移植免疫中的应用提供参考。

25-羟基维生素D化学发光定量免疫分析方法的建立

目的建立一种竞争法定量检测人血清血浆中25-羟基维生素D[25-(OH)D]的免疫分析方法。方法本研究以磁颗粒-链酶亲和素-生物素为固相分离系统,样本中加入解离剂使维生素D结合蛋白(vitamin D binding protein,VDBP)变性而使25-(OH)D游离出来,用生物素标记25-(OH)D,用吖碇酯标记一株抗-25-(OH)D的绵羊单抗,溯源到国际标准品,建立25-(OH)D定量免疫分析方法。结果此分析方法空白限不高于1.0 ng/mL;批内不精密度不超过5%,批间不精密度不超过10%;在线性范围为6~200 ng/mL;与金标准方法LC-MS/MS相比,相关性在0.97以上,偏差在±30%内,无系统偏差。结论该25-(OH)D化学发光定量检测方法,性能优异,适合临床推广使用。

The Synthesis of an Optically Active Intermediate of A-Ring for 1α,25-Dihydroxy Vitamin D_3 Analogs

Synthesis of an optically active intermediate 4b for the A-ring of 1a,25-dihydroxyvitamin D3 analogs has been achieved in eight steps, starting from readily available, inexpensive D-(+)-xylose.

重组人干扰素α2b联合甲强龙对喘息性支气管炎患儿EOS、SP-D、25-(OH)D_(3)水平的影响

目的观察重组人干扰素α2b联合甲强龙对喘息性支气管炎患儿嗜酸性粒细胞(EOS)、肺表面活性蛋白-D(SP-D)、25-羟维生素D_(3)[25-(OH)D_(3)]水平的影响。方法纳入2018年3月至2021年3月该院收治的喘息性支气管炎患儿99例,根据随机数字表法分为两组,对照组44例,观察组45例。对照组采用甲强龙治疗,观察组采用重组人干扰素α2b联合甲强龙治疗,均治疗6 d。观察两组患儿疗效、临床症状变化时间、EOS、SP-D、25-(OH)D_(3)水平变化及不良反应发生情况。结果观察组患儿治疗6 d后的临床总有效率明显高于对照组患儿(P<0.05)。观察组的喘息消失时间、咳嗽消失时间、气促缓解时间、肺部啰音消失时间和退热时间均短于对照组(P<0.05)。观察组治疗6 d后呼气峰流速(PEF)、用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV_(1))高于对照组(P<0.05)。观察组治疗6 d后EOS、SP-D水平低于对照组,25-(OH)D_(3)水平高于对照组(P<0.05)。对照组、观察组患儿的不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组人干扰素α2b联合甲强龙治疗小儿喘息性支气管炎,可促进症状缓解,在改善肺功能、调节血清EOS、SP-D、25-(OH)D_(3)方面具有一定的优势。

系统性红斑狼疮患者维生素D与T淋巴细胞亚群及α干扰素的相关性

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者维生素D水平与T淋巴细胞亚群及α干扰素(IFN-α)水平的相关性。方法选取SLE 80例(SLE组)分为缓解期40例(缓解期组)、活动期40例(活动期组),健康体检者30例作为健康对照组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血浆中25(OH)D、IFN-α水平;流式细胞术(FCM)测定外周血中T淋巴细胞亚群水平。结果 (1)SLE组外周血25(OH)D水平低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);活动期组外周血25(OH)D水平低于缓解期组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)SLE组外周血T淋巴细胞、Th淋巴细胞及Th/Ts与健康对照组相比显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),其中活动期组患者低于缓解期组,差异有统计学意义(P<0.05);SLE组与健康对照组两组间Ts细胞计数相比差异无统计学意义(P>0.05);(3)SLE组外周血IFN-α水平高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),活动期组高于缓解期组,差异有统计学意义(P<0.05);(4)SLE组外周血25(OH)D、T细胞、Th细胞计数及Th/Ts及IFN-α水平均与病情活动度具有相关性(P<0.05);(5)SLE组外周血25(OH)D与T细胞、Th细胞计数、Th/Ts计数比值呈正相关,与IFN-α水平呈负相关(P<0.05)。结论在SLE患者体内,维生素D水平与T淋巴细胞亚群及IFN-α水平具有显著的相关性,推测维生素D可能通过调控T淋巴细胞亚群动态平衡以及IFN-α水平引发机体的免疫异常。