酿酒酵母26S rDNA D1/D2区域序列分析及其系统发育研究

利用26SrDNAD1/D2区序列分析法对中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)保藏的22株酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和1株威尔酵母(S.willianus)进行了复核鉴定,通过序列比对及构建系统发育树分析后,结果显示:21株菌株与原名称一致,与酿酒酵母CBS1171T序列相似性在99.0%以上;CICC1313原定名为威尔酵母,此次鉴定结果为酿酒酵母,与酿酒酵母CBS1171T序列相似性为99.8%;CICC1859与异常毕赤酵母(Pichiaanomala)CBS5759T相似性为100%,鉴定为异常毕赤酵母。进一步对酿酒酵母与酵母属内其他种之间的发育关系进行了分析,通过构建酵母属内各菌种模式株的26SrDNAD1/D2区系统发育树,发现酿酒酵母与属内其他菌种间差异均大于1%,表明26SrDNAD1/D2区域序列分析方法能够应用于酿酒酵母的分子生物学鉴定。

西藏拉萨市城关区市售水果酵母菌的分离与鉴定

开展酵母菌多样性研究,能够为酵母菌资源的开发与利用奠定基础。2015年4～7月,在拉萨市城关区水果市场购买12种水果,用捣碎法从水果表面及果肉分离酵母菌,结合经典分类法及26S r DNA D1/D2区域序列分析,对酵母菌菌株进行系统分类。酵母菌多样性指数的计算采用EXCEL数据处理软件按对应公式进行,采用SPSS 19.0软件统计分析不同水果酵母菌总丰度差异。结果显示:分离自拉萨市城关区12种市售水果的239株酵母菌归为隐球酵母属Cryptococcus、红酵母属Rhodotorula、德巴利酵母属Debaryomyces、有孢汉逊酵母属Hanseniaspora和锁掷酵母属Sporidiobolus等5个属10个种,其中浅黄隐球酵母Cryptococcus flavescens为优势种,其在供试水果中出现频率为100%,相对丰度约47%;不同水果酵母菌物种丰富度表明,杏和西瓜中酵母菌种类最多,其次为葡萄,柠檬和芒果则仅分离到一种;酵母菌总丰度差异性分析显示,哈密瓜中酵母菌数量最多,苹果中则最少;Shannon-Wiener多样性指数(H′)、Pielou均匀度指数(J′)及Simpson多样性指数(D)显示,杏、梨和葡萄中酵母菌多样性最丰富,柠檬和芒果中最少。研究显示供试水果酵母菌群落间存在一定差异。

西藏曲拉中酵母菌的分离、鉴定及其优势菌分析

从西藏地区采集11份曲拉样品,从中分离出36株酵母菌。利用26S rDNA D1/D2区域序列分析对这些菌株进行了分类鉴定鉴定,可以将其分为8个属9个种。Debaryomyces hansenii是曲拉中的优势菌,其中Debaryomyces hansenii-Torulaspora delbrueckii和Debaryomyceshansenii-Candida zeylanoides是曲拉中酵母菌优势组合。曲拉中的酵母菌具有丰富的生物多样性,其差异性很大。

西藏拉鲁湿地土壤酵母菌多样性及产胞外酶活性菌株分布特性研究

采用平板稀释法从西藏拉鲁湿地土壤中分离酵母菌,开展城市湿地酵母菌多样性研究。结合经典分类法及26S rDNA D1/D2区域序列分析,对获得的酵母菌菌株进行系统分类,并进行产胞外酶活性菌株的皿内初筛。结果显示,分离得到的83株酵母菌分属于隐球菌属Cryptococcus、假丝酵母属Candida、原囊菌属Protomyces、红酵母属Rhodotorula及孢囊线黑粉酵母Cystofilobasidium等5个属16个种,其中胶红酵母Rhodotorula mucilaginosa相对丰度最高,约26%,其次为维多利亚隐球酵母Cryptococcus victoriae和山杨隐球酵母Cryptococcus aspenensis;多样性分析表明,LhWS6样点的酵母菌多样性最丰富,LhWS9样点则最低;产胞外酶活性菌株初筛结果表明,25℃下产脂肪酶活性菌株比例最高,为67%,而4℃下产淀粉酶活性菌株数最多,为49株。另外,低温条件下产淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和几丁质酶的活性菌株比例均高于常温条件。结果表明拉鲁湿地土壤酵母菌总体种类较丰富,但每个样点的种类相对单一,说明湿地生境或人为活动一定程度影响到该生态环境酵母菌的种群分布,开发青藏高原耐低温、产胞外酶等活性菌株具有一定的应用前景。

高糖化力米根霉的筛选和鉴定

为了筛选一株适用于糯米酒纯菌种酿造的高糖化力根霉,以不同酒曲为筛选源分离出19株根霉,经高糖化力测试从中筛选出一株28℃糖化3天产还原糖[(64.4±0.6)g/100g米、产葡萄糖(48.1±1.4)g/100g米]最高的根霉8-3M。通过对形态学和26SrDNA D1/D2区、ITS区序列进行分析鉴定,8-3M为米根霉(Rhizopus oryzae)。酶活力测试和酒精发酵测试表明:R.oryzae 8-3M在YPS液体培养基中28℃培养4天的粗酶液淀粉酶活力最高为(69.6±1.7)U/mL,在糯米饭中28℃培养96h的糖化酶活力最高为(36.8±2.0)U/mL、酒精度为(1.0±0.1)%(V/V)。因而R.oryzae 8-3M既能分泌淀粉酶,将绝大部分淀粉转化为可发酵性糖,又能将可发酵性糖转化为少量酒精,具有适用于糯米酒纯菌种酿造的潜力。