日本血吸虫菲律宾株26kDa抗原的表达、纯化与应用

利用亲和层析和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等分子生物学技术，表达、纯化、鉴定了重组日本血吸虫菲律宾株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ），并比较了其与日本血吸虫大陆株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）基因ｃＤＮＡ序列的异同，分析了其应用前景。分别以质粒ｐＧＥＸ和血吸虫大陆株总ＲＮＡ为模板，经ＰＣＲ或逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出的Ｓｊｐ２６ＧＳＴ和Ｓｊｃ２６ＧＳＴｃＤＮＡ，其片段长度均为６５４ｂｐ。通过双脱氧测序结果显示两者碱基排列顺序相同。用大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）表达载体在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达Ｓｊｐ２６ＧＳＴ，ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ占菌体总蛋白的２５％。用谷胱甘肽（ＧＳＨ）亲和层析柱一步纯化法，得到纯品Ｓｊｐ２６ＧＳＴ，将其作为靶抗原用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测血吸虫大陆株感染者和感染小鼠血清及用Ｓｊｃ２６ＧＳＴ免疫的小鼠血清，反应均为阳性。本研究提示Ｓｊｐ２６ＧＳＴ与Ｓｊｃ２６ＧＳＴ在ＤＮＡ序列、氨基酸顺序和抗原性等方面高度同源。

幽门螺杆菌26kDa外膜蛋白的基因克隆

目的:构建幽门螺杆菌外膜蛋白的基因重组载体,为的疫苗开发、快速诊断试剂盒的研究奠定基础。26kDaHp方法:用从染色体基因组扩增外膜蛋白的基因片段,将目的基因、载体同时经PCRHpDNA 26kDa26kDapET32a(+)Bam、HIHindⅢ双酶切、纯化;T4连接酶连接;转染大肠菌以及筛选含插入片段的重组载体。Top10结果:经酶切、测序分析插入的基因 片段为表达外膜蛋白基因,有发生变异,以及氨基酸残基改变。与文献相比:有高度的同源性。Hp26kDa1.1%bp1.51%结论:外膜蛋白的基因克隆、重组载体的构建将有可能为一种有效蛋白质疫苗的制备打下基础。

日本血吸虫未成熟虫卵26-28kDa抗原的分离与纯化

本文采用超凝胶AcA柱层析方法和SDS-PAGE结合凝胶洗脱方法等,分离纯化了日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)26-28kDa组分.SDS-PAGE、免疫印迹分析(EITB)和银染色等证明,采用该方法分离纯化的26-28kDa抗原纯度高,有较强的免疫活性,并证明该抗原组分在SIEA中含量丰富.纯化的SIEA26-28kDa可作为抗日本血吸虫生殖产卵和抗卵胚发育侯选抗原,用于抗病保护性免疫的研究.

原血吸虫病流行区人群GST抗体水平调查报告

血吸虫疫苗研究进展表明,日本血吸虫成虫含有丰富的谷光甘肽S-转移酶(GST).用重组26kDa GST抗原免疫小鼠及猪诱导保护性免疫力已取得成功.为了解血吸虫病流行区人群自然感染血吸虫后体内GST抗体水平情况及杀虫治疗多年后抗体的留存情况,作者对已消灭血吸虫病多年的本地原血吸虫病流行区3个村及非流行区1个村人群用酶联免疫吸附法(ELISA)作了GST抗体水平调查,并以IHA作对照.

重组GST抗原对水牛的保护性及其防制血吸虫病效果的研究

目的 研究重组GST抗原对水牛的保护性及其防制血吸虫病的效果。方法 在洲垸亚型血吸虫病流行区 ,选择两个村居民役用水牛 ,试验组 96头水牛免疫重组GST抗原 ,对照组 90头水牛不免疫作对照 ;观察两组水牛血吸虫感染率、湖洲感染性钉螺密度等的变化。结果 试验组免疫 2 0个月后检测水牛 5 6头 ,感染率为 5 36 % ,比免疫前 (13 5 4 % )下降了6 0 4 1% ,比对照组同期 (16 6 7% )低 6 7 85 % ,试验组外洲易感地带感染性钉螺密度较免疫前降低了 71.4 3%。居民血吸虫感染率基本无变化。结论 水牛免疫重组GST抗原能产生一定的保护力 ,对降低水牛血吸虫病情有明显作用。

日本血吸虫三价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH的构建及其免疫保护作用评价

目的:构建含有日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白(SjFABP),3-磷酸甘油醛脱氢酶(SjGAPDH),26kDa谷胱甘肽S转移酶(Sj26)的三价DNA疫苗,并通过药理实验评价其抗血吸虫感染的免疫保护作用。方法:以血吸虫成虫RNA为模板制备cDNA第一链,RT-PCR扩增得到抗原基因片段,再通过重组PCR技术,将Sj26和SjGAPDH融合为Sj26.SjGAPDH基因。将SjFABP和Sj26.SjGAPDH分别克隆入pVIVO2的mcs1和mcs2,获得重组质粒pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH。瞬时转染MCF-7细胞,通过逆转录PCR(RT-PCR)检测抗原基因在mRNA水平的表达,通过间接荧光免疫(IIF)检测抗原基因在小鼠体内抗原水平表达,验证了DNA疫苗的有效性;并免疫小鼠后进行免疫保护性初步试验。结果:经过酶切、测序及体内外表达验证,该三价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH构建成功;该三价DNA疫苗在小鼠抗血吸虫感染中诱发减虫率和减卵率达到58.6%和59.8%。结论:该三价DNA疫苗组具有比单价和双价DNA疫苗组更加良好的免疫保护作用,为日本血吸虫DNA疫苗的研制奠定了基础。