槲皮素通过抑制氧化应激改善3×Tg-AD小鼠的认知功能障碍

目的探讨槲皮素(Quercetin,QT)对含有3个突变等位基因(PS1、APP、Tau)的纯合子小鼠(3×Tg-AD)的认知功能改善作用及其机制。方法通过基因鉴定确定小鼠的基因型,将9月龄的3×Tg-AD小鼠和其同窝野生对照小鼠随机分为4组:野生型组(wildtype,WT)、野生型+QT组(WT+QT)、模型组(3×Tg-AD)和模型小鼠+QT组(3×Tg-AD+QT),每组8只。WT+QT组和3×Tg-AD+QT组的小鼠灌胃给予QT 15 mg/kg/天,WT组和3×Tg-AD组的小鼠灌胃给予等体积溶剂,共治疗8周。第7周进行水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力。采用ELISA法检测小鼠脑组织中的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α)、白介素-1β(interleukin-1β)和小鼠血清中谷胱甘肽-过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的含量;试剂盒检测小鼠血清中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量以及脑组织中一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量;Western blot检测脑组织中核转录因子E2相关因子2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1的表达水平。结果3×Tg-AD组小鼠存在明显的认知功能障碍;而3×Tg-AD+QT组小鼠的学习记忆能力明显提高(P<0.05)。另外,3×Tg-AD组血清中MDA水平较WT组升高,SOD与GSH-Px水平较WT组下降;3×Tg-AD+QT组小鼠血清中MDA水平下降,SOD和GSH-Px水平则升高。3×Tg-AD组小鼠脑组织中的NO、TNF-α、IL-1β水平明显升高;3×Tg-AD+QT组小鼠脑组织中的炎症因子水平均明显降低(P<0.05)。3×Tg-AD组小鼠脑组织中的Nrf2表达降低,Keap1表达升高;3×Tg-AD+QT组中,Nrf2表达上调,Keap1表达下调(P<0.05)。结论QT可能通过抑制炎症因子和MDA,Keap1的水平,上调SOD,GSH-Px,Nrf2的表达,发挥改善3×Tg-AD小鼠学习记忆能力的作用。

二苯乙烯苷对AD模型小鼠Tau蛋白Thr205和Ser404位点磷酸化的影响

目的:研究二苯乙烯苷(TSG)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠Tau蛋白Thr205、Ser404位点磷酸化的影响,探索TSG抗AD的可能机制。方法:将APP/PS1/Tau三转基因痴呆(3×Tg-AD)小鼠随机分成模型组、阳性对照组(石杉碱甲,0.15 mg/kg)和TSG低、中、高剂量组(0.033、0.1、0.3 g/kg),每组6只;另取6只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。各给药组小鼠灌胃相应药物,模型组和正常对照组小鼠灌胃等体积生理盐水,每天给药1次,连续给药60 d。末次给药结束后,采用免疫荧光染色法检测各组小鼠脑组织中Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白(Thr205、Ser404位点)的分布和表达;采用Western blotting法检测各组小鼠脑组织中磷酸化Tau蛋白(Thr205、Ser404位点)的表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠脑组织中Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白(Thr205、Ser404位点)表达增多、容易聚集成团、分布更为广泛,相对表达量均显著升高(P<0.01),且Western blotting结果显示磷酸化Tau蛋白(Thr205、Ser404位点)的表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,阳性对照组和TSG各剂量给药组小鼠脑组织中Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白(Thr205、Ser404位点)表达和聚集减少、分布范围变窄,相对表达量均显著降低(P<0.01),且Western blotting结果显示磷酸化Tau蛋白(Thr205、Ser404位点)的表达水平也显著降低(P<0.01);与阳性对照组比较,TSG各剂量给药组小鼠脑组织中Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白(Thr205、Ser404位点)的分布情况差别不大,相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05),但Western blotting结果显示TSG中、高剂量组小鼠脑组织中磷酸化Tau蛋白(Thr205位点)的表达水平和TSG各剂量组小鼠脑组织中磷酸化Tau蛋白(Ser404位点)的表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:TSG可能通过下调脑组织中磷酸化Tau蛋白(Thr205、Ser404位点)的表达,从而发挥其对AD模型小鼠的抗痴呆作用。

阿尔茨海默病转基因小鼠肝内核受体和细胞色素氧化酶基因转录谱变化

目的探讨阿尔茨海默病(AD)病变与肝Ⅰ相药酶基因表达的相关性,为早期和长期药物干预AD病程提供实验参考。方法制备B6.129-PS1M146V/APPSwe/Tau P301L三重转基因AD模型小鼠(3×Tg AD小鼠)及同系非转基因正常小鼠(NTg小鼠)肝组织总RNA和总蛋白质样品,逆转录PCR/实时荧光定量PCR技术检测肝核因子4(HNF4)等7种核受体和细胞色素氧化酶P4501a2(Cyp1a2)等7种CYP基因mRNA相对表达量,比较基因转录谱差异;Western蛋白印迹法检测技术检测差异显著的目的基因蛋白质水平。结果与NTg小鼠相比,3×Tg AD小鼠HNF4、雌激素受体(ERα)及组成型雄甾烷受体均下调近66%(P<0.01),孕烷X受体和芳香烃受体分别上调1.84和1.64倍(P<0.05),糖皮质激素受体及受氧化应激激活的核因子E2相关因子未见显著变化;主要药物代谢酶Cyp2b10及Cyp2a5 mRNA分别降低至正常小鼠水平的3%(即下降97%,P<0.01)和30%(P<0.05),Cyp2e1、Cyp2j9、Cyp3a11基因的转录水平则分别上调了2.26倍、2.42倍和3.66倍(P<0.05);Cyp1a2和Cyp2d22基因转录在两种小鼠中无明显差异。Western蛋白印迹分析证实,3×Tg AD小鼠ERα和CYP2a5明显下降(P<0.05)而Cyp3a11表达则明显上升(P<0.05),蛋白质表达变化的趋势与其相应mRNA水平改变一致。结论 3×Tg AD小鼠肝内核受体基因及CYP酶基因转录谱发生显著改变,提示AD病变可能干扰机体肝代谢功能,对机体内源性及外源性化合物生物转运产生影响。